淫羊藿对大鼠骨量及骨髓基质干细胞增殖、分化过程中Cbfa1和Osterix表达的影响

目的:研究淫羊藿对大鼠骨量及骨髓基质干细胞增殖、分化过程中Cbfa1和Osterix表达的影响。方法:24只雌性SD大鼠被随机分成观察组和对照组各12只,其中观察组给予淫羊藿0.5 g/0.1 kg,每天1次灌胃,持续两周;对照组给予相同剂量的生理盐水。于分组时间将大鼠处死,取右侧股骨远侧段用于骨组织形态计量学检测;抽取左侧股骨骨髓用于细胞培养,于培养21 d时提取细胞总RNA,经PCR方法分离获得cbfa1,osterix扩增产物。结果两组大鼠的骨形态计量学进行比较,观察结果表明,观察组大鼠骨组织计量学动态参数以及静态参数BV/TV、BFR/BS、tb.th、MAR比着对照组明显要高,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组大鼠的Cbfa1,Cbfb和OSX m RNA表达的差异比较,研究组Cb fa1 m RNA,OSX m RNA在各时间点的表达均明显增加(P<0.05),并且这种差异随SIM作用时间增加而增强,研究组与对照组Cbfbm RNA差异无统计学意义(P>0.05)两组大鼠的骨形态蛋白-2以及转化因子β1相比,骨形态蛋白-2观察组明显高于对照组,差异存在统计学意义(P<0.05),转化因子β1比较观察组明显高于对照组,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:骨组织形态计量学方法显示淫羊藿组促进骨量增加;细胞分子生物学显示淫羊藿能够促进成骨细胞分化增殖作用,为中药抗骨质疏松提供组织细胞和分子生物学基础证据。

骨骼发育中的转录因子Cbfa1

骨骼由骨和软骨共同构成 .最近的研究表明 ,转录因子Cbfa1不仅控制骨的形成和生长 ,还影响软骨组织成熟 ,并且可能与破骨细胞分化和软骨血管侵入有关 .

Cbfa1在强直性脊柱炎活动期的表达及意义

目的探讨核心结合因子(core-binding factor a1,Cbfa1)在强直性脊柱炎(AS)活动期的病理性表达及意义。方法通过原位杂交技术检测活动期AS患者与对照组(骨盆骨折患者以及静止期AS患者)骶髂关节滑膜组织中Cbfa1的表达情况,用图像分析系统比较它们的表达差异。结果在活动期AS患者骶髂关节滑膜组织中Cbfa1阳性表达,而对照组骶髂关节滑膜组织中Cbfa1均阴性表达,图像灰度值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Cbfa1在活动期AS患者骶髂关节滑膜组织中阳性表达,证实其在强直性脊柱炎骶髂关节病理性成骨硬化过程中起着重要作用。控制AS病理过程中Cbfa1的表达,可能为治疗强直性脊柱炎提供新的思路。

慢性肾衰竭大鼠股骨cbfa1表达与骨密度关系的研究

目的探讨股骨核心结合因子-a1(cbfa1)对慢性肾衰竭大鼠股骨密度变化的影响。方法将12只大鼠随机分为空白对照组、慢性肾衰竭模型组。造模成功后测量各组大鼠股骨的整体骨密度(Whole-bone mineral density,W-BMD)、松质骨骨密度(Trabecular-bone mineral density,T-BMD)、皮质骨骨密度(Cortical-bone mineral density,C-BMD),留取血清测定钙、磷等生化参数,采用免疫组织化学和HE染色的方法分别检测大鼠股骨中Cbfa1蛋白的表达及松质骨和皮质骨的形态学改变。结果与空白对照组比较,慢性肾衰竭模型组W-BMD、C-BMD降低,T-BMD升高(P<0.001);股骨松质骨Cbfa1表达增多,皮质骨Cbfa1表达减少(P<0.001);相关分析显示W-BMD与皮质骨Cbfa1蛋白表达呈正相关(r=0.979,P<0.001),与松质骨Cbfa1蛋白表达呈负相关(r=-0.974,P<0.001),与血清钙浓度呈正相关(r=0.730,P<0.001),与血清磷浓度呈负相关(r=-0.652,P<0.001)。结论 Cbfa1是肾性骨病导致的骨密度改变的预测因素,可能是Cbfa1对骨形态的影响而导致骨密度的改变。

成骨特异性转录因子——核心结合因子Cbfa1在骨改建中的作用

成骨细胞由具有多向分化潜能的间充质细胞经骨原细胞、前成骨细胞分化而来,它一旦终末分化以后就分泌产生各种细胞外基质蛋白,如I型胶原、骨桥蛋白（osteopontin）和骨钙素（osteocalcin），并参与骨基质的钙化．

Runx2/Cbfa1在出生后小鼠牙髓牙本质复合体形成中的作用研究

目的探讨Runx2/Cbfa1在出生后小鼠成牙本质细胞分化及牙本质形成中时间和空间的分布特点及意义。方法采用免疫组化SABC法检测Runx2/Cbfa1在出生后BALB/c小鼠牙本质、成牙本质细胞及牙髓细胞中不同发育时期的表达及特点。结果Runx2/Cbfa1在成牙本质细胞的发育成熟过程中具有时空特异性,在牙根尚未发育之前的牙胚钟状晚期,Runx2/Cbfa1只在前期牙本质中有表达,在牙髓细胞及成牙本质细胞中皆为阴性;约从第11天开始,随着牙根的发育,Runx2/Cbfa1在根部成牙本质细胞、牙髓细胞中表达为阳性,在冠部成牙本质细胞中表达为阴性。结论Runx2/Cbfa1参与牙本质的形成和矿化及成牙本质细胞和牙髓细胞的发育,可能对它们起重要作用。

肿瘤坏死因子α干预小鼠成骨细胞cbfa1/runx2基因的表达

背景:肿瘤坏死因子α可降低牙周膜纤维细胞碱性磷酸酶的活性,抑制牙周膜纤维细胞向成骨细胞的功能转化。目的:观察肿瘤坏死因子α对小鼠成骨细胞生长及cbfa1/runx2基因表达的影响。方法:取生长良好的小鼠成骨细胞系MC3T3/E1细胞,分别以20,40,60,80μg/L的肿瘤坏死因子α进行干预,以正常培养的细胞作为对照。采用RT-PCR法检测MC3T3/E1细胞cbfa 1/runx2mRNA的表达;PNPP法测定碱性磷酸酶活性;MTT法检测细胞活力。结果与结论:正常培养的MC3T3/E1细胞cbfa1/runx2 mRNA呈阳性表达,随着肿瘤坏死因子α浓度的增高,其表达水平逐渐下降。同时MC3T3/E1细胞活力和碱性磷酸酶活性也随肿瘤坏死因子α浓度的增高而下降。提示肿瘤坏死因子α可抑制MC3T3/E1细胞生长,而cbfa1/runx2可能参与了成骨细胞的分化过程。

腺病毒介导的Cbfa1基因转移对NIH3T3细胞的调节作用

目的 探讨腺病毒介导的核心结合因子a1(corebindingfactora1,Cbfa1)基因转移对NIH3T3细胞的调节作用。方法 含有Cbfa1基因的重组腺病毒转染NIH3T3细胞,RT PCR检测成骨标志基因骨钙素(osteocalcin ,OCN)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨唾液蛋白(bonesialoprotein ,Bsp)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase ,AKP)、Cbfa1的表达。Westernblot检测Cbfa1的表达,免疫细胞化学染色检查OCN的表达。结果 NIH3T3细胞在Cbfa1基因转移后RT PCR检测到OCN、Bsp、AKP、typeⅠcollagen基因的表达,Westernblot检测到Cbfa1蛋白的表达,免疫细胞化学染色检测到了OCN蛋白的表达。结论 腺病毒介导Cbfa1基因转移NIH3T3细胞后出现成骨表型。

转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对Cbfa1和Ose2元件启动子活性的影响

目的探讨Notch信号转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对核心结合因子Cbfa1基因启动子和骨钙素基因启动子区域Ose2元件启动子活性的影响。方法构建CBF1真核表达载体pCMV-Tag4/CBF1;将梯度浓度pCMV-Tag4/CBF1和荧光素酶报告质粒共转染两成骨前体细胞系Kusa-A1和Kusa-O,用双荧光素酶报告基因方法检测Cbfa1和Ose2元件启动子活性。结果随CBF1浓度增加,Kusa-A1和Kusa-O细胞中Cbfa1和Ose2元件启动子活性均逐渐提高。统计分析表明Kusa-A1细胞中1/40μg/μL实验组两启动子活性均与对照组差异显著;Kusa-O细胞中1/40μg/μL实验组Ose2元件启动子活性与对照组差异显著。结论转录调控因子CBF1可以促进Cbfa1和Ose2元件启动子活性,从而可能对细胞的成骨性分化有正调节作用。

AdEasy1/Cbfa1基因转移对兔成纤维细胞碱性磷酸酶表达的影响

目的探讨腺病毒介导的核心结合因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)基因转移对原代培养兔皮肤成纤维细胞碱性磷酸酶表达的影响。方法胰酶消化法培养兔皮肤成纤维细胞,采用AdEasy1/Cbfa1感染原代培养的兔皮肤成纤维细胞,取不同时间点检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙钴法染色检测ALP的表达。结果兔皮肤成纤维细胞在AdEasy1/Cbfa1感染后出现ALP表达,在12 d时表达最高。结论AdEasy1/Cbfa1感染兔皮肤成纤维细胞,可促进ALP的表达。

静态张应力作用下人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1表达的变化

目的检测静态张应力作用对人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1表达变化的影响。方法有限稀释法克隆化培养纯化人牙周膜干细胞(hPDLSCs),应用内外双层套筒式硅胶膜细胞加力装置对人牙周膜干细胞加力,加力时间点为0、3、6、12、24小时。采用原位杂交和实时定量PCR检测各加力时间点Cbfa1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人牙周膜干细胞受力后Cbfa1蛋白的表达。结果人牙周膜干细胞受到静态张应力作用后3小时、6小时、12小时Cbfa1 mRNA表达均升高(P<0.05),且以加力3小时最为明显,6小时后开始下降,24小时后基本恢复到不加力时的表达水平。加力3小时Cbfa1蛋白表达未见明显升高,加力6小时后Cbfa1蛋白逐渐升高,一直持续到加力24小时(P<0.05)。结论静态张应力作用下,人牙周膜干细胞核心结合因子Cbfa1在RNA水平和蛋白水平的表达均发生变化,说明Cbfa1在机械力促使人牙周膜干细胞向成骨细胞方向分化的过程中起到了重要作用。

Cbfa1基因结构与功能分析

核结合因子α1(cbfa1)是runt结构域基因家族的重要成员之一,编码一个成骨细胞特异性转录因子,调控成骨细胞发育、分化和骨的形成。cbfa1基因含8个外显子,但它的多个外显子存在选择性剪接,产生多样cbfal的异构体,具有不同的转录激活潜能。多条信号传导通路参与到cbfal的活性或表达的调控。本文主要从cbfa1基因的结构、功能、表达调控以及基因功能的影响因子等方面进行了综述。

转录因子Cbfa1及其在硬组织发育中的研究

Cbfa1作为成骨细胞分化的特异性转录因子,对成骨细胞的生长分化,软骨细胞的成熟发育及牙齿的分化发育具有重要作用。其缺失突变可引起遗传性骨病。Cbfa1的转录调节作用受多种因素影响,本文对Cbfa1的结构、亚型组成、调节及其在硬组织形成相关细胞的生长与分化中的作用作一综述。

FSK88对UMR106细胞中cbfa1基因表达的影响

以大鼠成骨肉瘤细胞———UMR106为模型,应用RT-PCR方法,检测用不同浓度的FSK88药液(25,50,100μmol/L)、维甲酸(RA,10μmol/L,阳性对照)以及FSK88+RA(等体积)混合药液处理细胞72 h后,细胞内cbfa1基因表达量的变化.3次重复实验显示:与对照组相比,经25,50,100μmol/L 3种浓度FSK88药液处理的细胞内cbfa1基因表达量分别增加35.5%,64.5%,124.0%.其中用100μmol/L的FSK88处理细胞后,cbfa1基因表达量有显著的上调(P<0.01),并且上调作用强于10μmol/L的维甲酸药液.证明FSK88能够通过直接或间接增强UMR106细胞中cbfa1基因的表达,从而促进肿瘤细胞向正常细胞逆转分化.

cbfa1、satb2双基因共表达载体的构建及鉴定

目的:构建携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体。方法:采用PCR技术,从质粒中扩增基因cbfa1和satb2,经TA克隆、酶切筛选后,对阳性重组子进行商业测序鉴定。将测序正确的cbfa1和satb2分别插入pIRES上、下游的相应酶切位点中,构建pIRES-cbfa1-satb2。然后通过双酶切,得到cbfa1-Ires-satb2片段,将其插到含有neo/kana基因的慢病毒载体pLentinTrident1-CMV的相应酶切位点上,构建慢病毒真核表达载体pLentinTrident1-CMV-cbfa1-Ires-satb2。结果:通过PCR技术成功扩增了cbfa1和satb2基因,借助中间载体pIRES中的内部核糖体进入位点,将cbfa1和satb2同时连到了慢病毒载体pLentinTrident1-CMV上,经PCR、酶切及测序验证,质粒构建成功。结论:本实验成功构建了携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体,为进一步研究2种基因的功能奠定了基础。

成骨细胞特异性转录因子OSF2/CBFA1

文章介绍了CBFA基因编码的OSF2/CBFA1转录因子的结构、对成骨细胞生长分化的影响、对骨基质中非胶原蛋白表达水平的调控以及OSF2/CBFA1与遗传性骨病的关系。OSF2/CBFA1作为一种成骨细胞特异性转录因子调控着骨形成过程中成骨细胞的分化,其详细机理有待深入研究。

普伐他汀对激素性坏死股骨头内Cbfa1表达的相关影响

目的分析普伐他汀对激素性坏死股骨头内Cbfa1表达的影响。方法将90只健康的成年新西兰白兔作为研究对象,随机分为3个组别,对照组、试验组、模型组各30只。试验组、模型组造成股骨头坏死模型,并对试验组灌服普伐他汀,对照组和模型组灌服蒸馏水。观察白兔的股骨头组织血管数量和骨陷窝缺损情况,采用荧光定量PCR法检测Cbfa1的表达水平。结果试验组白兔的血管数量为(8.4±1.6)条,血管直径为(9.8±1.2)μm,骨陷窝缺损率为(20.3±4.7)%,第8周、12周、16周股骨头内Cbfa1的表达水平分别为(0.531±0.074)、(0.717±0.079)、(0.885±0.083),均高于其他两组,且随着时间延长表达水平逐渐增高。结论普伐他汀能够促进坏死股骨头内Cbfa1表达,从而改善组织病理学,提示在激素性股骨头坏死的治疗中具有重要价值。

cbfa1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究

目的 :构建 pcDNA3-cbfa1重组质粒 ,瞬时转染人牙乳头细胞 ,观察cbfa1在转染前后的表达。方法 :用EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切pcDNA3空载体和 pGEM - 5z -f -cbfa1质粒 ,电泳回收后进行连接 ,连接产物转化DH5α ,进行酶切鉴定和PCR分析。采用脂质体法瞬时转染人牙乳头细胞 ,制备细胞爬片 ,免疫组织化学染色。结果 :共挑出 7个阳性转化子 ,酶切和PCR分析结果均显示重组质粒构建成功。正常人牙乳头细胞中cbfa1表达阴性 ,瞬时转染 2 4h后 ,cbfa1表达阳性。结论 :成功构建了 pcDNA3-cbfa1真核表达载体 ,人牙乳头细胞无cbfa1的表达 ,当转染正义的cbfa1重组质粒后出现cbfa1的表达 。

Cbfa1对骨髓间充质干细胞分化的定向调控研究(英文)

目的研究Cbfa1调控间充质干细胞(MSCs)分化为成骨细胞的分子机制。方法用Percoll密度梯度离心法分离获得人、大鼠和小鼠的MSCs,通过苏木精-伊红染色、细胞化学、免疫细胞化学、免疫荧光及透射电镜等方法进行鉴定。传代培养后的MSCs分别用重组真核表达载体pcD-NA3.1(+)/Cbfa1-II通过脂质体系统转染,用NorthernBlot检测三种成骨细胞特异性细胞外基质蛋白mRNA的表达情况。结果转染后人、大鼠和小鼠的MSCs都有骨钙素、骨桥接蛋白和I型胶原的表达,三者间无明显差别。结论Cbfa1在转录水平定向调控间充质干细胞分化为成骨细胞,可应用于骨科疾患的基因治疗。

核心结合因子(Cbfa1／Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达

目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/Runx2cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2。经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测。通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功。Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%。转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白。