β-tubulin在肾脏D5R与CCKBR相互调节中的重要作用

目的探讨β-tubulin在胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)和多巴胺D5受体(dopamine D5 receptor,D5R)相互作用的调节机制。方法选用正常人和高血压患者肾脏近曲小管细胞(renal proximal tubular cells,RPTC),各分为3组:CCKBR激动剂(gastrin)处理组;D5R激动剂(fenoldopam)处理组;gastrin+微管抑制剂(nocodazole)组。免疫荧光法测定β-tubulin、CCKBR和D5R的定位,免疫印迹方法检测CCKBR、D5R和Na+,K+-ATP酶的表达。结果 Gastrin处理正常RPTC后D5R表达显著增加(P<0.05),Na+,K+-ATP酶的表达降低(P<0.05),fenoldopam同样能够刺激CCKBR表达增加(P<0.05),但nocodazole预处理后再加入gastrin并不能够增加D5R的表达,也不能降低Na+,K+-ATP酶的表达。高血压患者RPTC中CCKBR和D5R的相互作用以及Na+,K+-ATP酶的表达变化并不明显。免疫荧光结果显示,正常RPTC中CCKBR和D5R蛋白能够被诱导转移到细胞膜上,微管抑制剂能够显著阻断转移过程,但高血压患者RPTC中β-tubulin杂乱无章,CCKBR和D5R蛋白也没能有效转移到细胞膜上。结论 tubulin通过促进CCKBR和D5R从细胞质向细胞膜转运,从而发挥生物学功能,可能在二者相互作用和钠水代谢中起到重要作用。

遗传多样性高血压小鼠模型的建立与基因转录调控分析

目的探讨13个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾病理变化以及相关致病通路。方法将13个品系的遗传多样性小鼠分别与Cckbr-/-小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的Cckbr+/+、Cckbr+/-、Cckbr-/-3种基因型的小鼠。利用BP-2000无创血压分析系统测量小鼠血压,利用Western Blot检测小鼠肾CCKBR蛋白表达变化,利用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化(IHC)检测小鼠肾组织病理学变化,利用转录组测序(RNA-Seq)分析筛选原发性高血压致病相关通路。结果3个特定小鼠品系(A/J、LOT、FIM)中,收缩压(systolic blood pressure,SBP)Cckbr-/-组较Cckbr+/+组具有显著性差异(P<0.05)。HE染色及IHC发现高血压对小鼠造成了一定程度的肾损伤。通过GO与Pathway富集分析,发现差异表达基因富集在新陈代谢与昼夜节律调节等方面。结论遗传多样性高血压小鼠在血压表型、病理特征及基因表达等方面呈现显著性差异,有效模拟了人群的遗传异质性对疾病表型的影响。

CCKBR蛋白的生物信息学分析、原核表达及抗体制备

为了获得胆囊收缩素Ⅱ型受体（CCKBR）的多克隆抗体,建立CCKBR的分子水平检测方法,试验克隆了CCKBR基因CDS全序列并采用生物信息学方法分析CCKBR的抗原表位,根据分析结果合成重组CCKBR基因序列进行原核表达并对表达产物分析鉴定,最后制备多克隆抗体并分析抗体的适用性。结果表明：CCKBR基因CDS全序列扩增成功;抗原区域可能位于35-53,160-175,195-215,245-300,347-368,390-430位氨基酸残基;原核表达的目的条带大小为23.9 ku,与预期结果一致,Western-blot检测条带正确;用包涵体免疫新西兰大耳白兔,获得CCKBR的多克隆抗体,Westernblot检测到CCKBR天然蛋白。说明试验表达CCKBR重组蛋白成功,且由该蛋白制备的抗体能检测出CCKBR天然蛋白,可用于CCKBR的进一步研究。

胃泌素的生物合成与作用机制的相关研究进展

胃泌素(Gastrin,Gas)是由胃和十二指肠G细胞分泌的多肽类激素,主要参与刺激胃酸分泌及营养胃肠道黏膜,近年来越来越多的研究表明胃泌素及其衍生物还有促进增殖和抑制凋亡的作用。在体外和动物模型的实验中表明长期高胃泌素血症可能与较高的癌症发病率相关,且胃泌素通过与其受体结合发挥生物学作用。