Cyclin D1(CCNDl)A870G基因多态性与保定地区结肠癌的关系

为了探讨cyclin D1(CCNDl)A870G基因多态性与保定地区结肠癌患者的年龄、性别、高胆固醇血症、家族史、病理分型、病理分期的关系,我们从200例保定地区结肠癌患者和200例保定地区健康体检者的血中提取DNA,用聚合酶链反应和限制性酶切片段长度多态体分析对提取的DNA进行多肽性分析。结果显示,病例组和对照组AA\AG\GG基因频率无明显差异。高胆固醇及重度吸烟的结肠癌患者GG基因型频率明显高于其他基因型,有明显差异(P<0.05),重度吸烟及高胆固醇血症在健康体检人群中GG基因型无明显差异(P>0.05)。由此推断高胆固醇血症及吸烟可作为在cyclin D1(CCNDl)A870G基因多态性中GG基因型中结肠癌发生的危险因子,遗传因素的结肠癌患者AA基因型频率明显高于其他基因型,有明显差异(P<0.05)。由此推断遗传因素可作为在cyclin D1(CCNDl)A870G基因多态性中AA基因型中结肠癌发生的危险因子,这将为进一步研究结肠癌分子生物学的发生机制提供依据。

Ccnd1反义寡核苷酸脂质体对囊外摘出术后大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探索Ccnd1反义寡核苷酸(Ccnd1antisense oligonucleotides,Ccnd1-ASON)脂质体对晶状体囊外摘出术(extracapsular extraction of lens,ECLE)后大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增生的抑制作用。方法48只SD大鼠随机分为3组,双眼行ECLE,术中前房内分别注入Ccnd1-ASON脂质体溶液(反义组)、Ccnd1基因正义寡核苷酸(Ccnd1sense oligonucleotides,Ccnd1-SON)脂质体溶液(正义组)、无药脂质体溶液(无药组)50μL;每组随机取4只分别于术后即刻、1d、7d、14d处死,实时荧光定量PCR检测LECCcnd1表达变化,组织病理学检测单位面积LEC数量,免疫组织化学检测LEC周期蛋白(cyclin)D1表达,应用方差分析进行统计学处理。结果术后1d、7d、14d,Ccnd1表达量反义组分别为0.1415、0.2743、0.3406,低于正义组(0.7861、1.1623、0.7537)和无药组;晶状体组织单位面积(mm2)LEC数量反义组分别为633±65、1636±212、2440±359,低于正义组(808±73、2476±349、3115±316)和无药组(845±78、2242±303、3133±331)(P<0.05),正义组和无药组之间无明显差异(P>0.05);晶状体组织单位面积(mm2)Cyclin D1阳性细胞积分光密度值反义组分别为6.18±0.67、11.20±1.66、17.38±3.00,低于正义组(7.74±0.88、16.03±2.40、24.56±2.49)和无药组(7.60±0.66、16.17±2.03、25.93±2.21)(P<0.05),正义组和无药组之间无明显差异(P>0.05)。结论Ccnd1-ASON前房注射能有效降低大鼠ECLE后LEC Ccnd1和Cyclin D1表达,抑制LEC增殖,减轻后囊膜混浊。

辐射诱导细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究

采用实时定量PCR技术检测小鼠胸腺和脾脏基因表达对X射线全身照射的反应,为探索可行的辐射生物标志物打下实验基础。研究中选用细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因Cdkn1a、Ccnd1、Ccnb1、Gadd45a、Atm和Fdxr,以Gapdh为参考基因,观察0.5、1、2、4、6 Gy X射线全身照射后4和24小时上述基因在胸腺和脾脏的相对表达量的变化。同时计数骨髓细胞涂片嗜多染红细胞(PCE)的微核率进行对比。结果显示,上述6种基因对电离辐射全身作用都出现变化,但以Cdkn1a、Ccnd1和Ccnb1三者对全身照射的剂量效应关系较为明显,其中Cdkn1a和Ccnd1基因的表达随辐射剂量增加而升高,Ccnb1基因的表达随辐射剂量增加而下降。剂量效应曲线可拟合为线性-平方方程,其相关系数r为0.851～0.998,p<0.05～0.01。但与嗜多染红细胞微核率进行对比,Ccnd1和Ccnb1的表达只有部分结果与之具有显著的相关关系。Cdkn1a的表达量则不仅随辐射剂量增加而升高,而且与嗜多染红细胞微核率的剂量-效应曲线明显相关,在两器官和两时间点其相关系数为0.950～0.975,p<0.01。另一方面Cd-kn1a表达量变化的幅度较大,照射后4小时和24小时胸腺的最高表达量分别为11.2和11.3倍,脾脏的最高表达量分别为20.6和9.3倍。鉴于实时定量PCR技术适用于快速、高通量检测,通过进一步在人体观察验证,Cdkn1a基因表达变化有可能成为研制新的辐射生物剂量计的候选者。

四种乳腺癌相关基因联合检测对乳腺癌诊断的临床应用研究

目的:探讨核内原癌基因(nuclear oncogene,MYC)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/leukemia 2 gene,Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Ccnd1)和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)基因表达水平在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法:建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,并以GAPDH为内对照测定34名健康女性体检者、55例良性乳腺疾病患者和91例乳腺癌患者外周血中MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19的表达量。结果:MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19表达水平与GAPDH的比值在乳腺癌组显著高于健康女性体检者和良性乳腺疾病患者(P<0.05)。它们在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义(P>0.05)。四组GAPDH差异无统计学意义(P>0.05)。MYC,Ccnd1,Bcl-2与CK19联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论:FQ-PCR技术可以快速定量检测MYC,Ccnd1,Bcl-2和CK19 mRNA,四者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。