Cd1-型亚硝酸盐还原酶脱氮工程菌的构建与表达

目的用基因工程技术将铜绿假单胞菌PAO1中nirS基因定向克隆至表达载体pQE-30上，使nirS基因得到高效表达。方法根据GenBank公布的nirS碱基序列和表达载体pQE-30的多克隆位点设计引物，以铜绿假单胞菌PAO1的基因组DNA为模板，应用PCR技术扩增目的片段nirS；之后经过BamH I和HindⅢ双酶切，定向克隆到pQE-30上，化学转化DH5α，构建含有重组质粒的转化子pQE30-nirS-DH5α；经酶切和测序鉴定，扩增产物的碱基序列与GenBank公布的序列完全吻合，再将重组质粒pQE30-nirS转化表达菌株SG13009构建脱氮基因工程菌pQE30-nirS-SG-13009（PNS）。最后用SDS-PAGE（IPTG浓度：0．05mmol／L；诱导温度：25℃；诱导时间：2～3h）和His-tag in-gel Stain鉴定cd1-型亚硝酸盐还原酶的分子量与特异性。结果构建了高效表达cd1-型亚硝酸盐还原酶的脱氮基因工程菌PNS。结论Cd1-型亚硝酸盐还原酶能够在脱氮基因工程菌PNS中得到正确和高效的表达。

高危型HPV感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响

目的:探讨宫颈炎患者高危型HPV(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响。方法:选取2020年12月-2022年12月因宫颈炎就诊于本院的102例临床资料,根据是否感染HR-HPV分入高危HPV阴性组(n=65)与阳性组(n=37)。检测HPV阳性患者HPV感染亚型,比较两组阴道微生态改变及阴道微生态平衡状态;采用荧光定量PCR法检测宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平;Spearman法分析宫颈阴道微生态与宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平的相关性;采用多因素logistic逐步回归分析HR-HPV感染影响因素。结果:HR-HPV阳性组宫颈病变严重程度高于阴性组,阳性组中HPV16亚型检出率最高(51.0%),其次为HPV18(18.6%);阳性组阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率均高于阴性组,miR-149-3p(0.53±0.12)低于阴性组(1.67±0.23),CYBRD1相对表达量(1.29±0.27)高于阴性组(0.46±0.10)(均P<0.05);HR-HPV感染与宫颈脱落细胞miR-149-3p表达呈负相关、与CYBRD1表达、阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率及乳酸杆菌异常率呈正相关(均P<0.05)。HR-HPV阳性组不良孕产史占比高于阴性组(P<0.05)。多因素分析显示:解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率、不良孕产史、阴道微生态失衡、miR-149-3p降低、CYBRD1升高是HR-HPV感染影响因素(均P<0.05)。结论:HR-HPV感染者宫颈脱落细胞中miR-149-3p低表达、CYBRD1高表达,亚型检出以HPV16、HPV18为主,且HR-HPV感染会影响患者宫颈阴道微生态失衡,增加宫颈病变严重程度。

MTHFR和PAI-1基因多态性与2型糖尿病患者下肢深静脉血栓发生风险的相关性研究

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T突变和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)4G/5G基因多态性与2型糖尿病患者下肢深静脉血栓(DVT)发生风险的相关性。方法对2022年5月至2023年4月收治的240例2型糖尿病患者的MTHFR和PAI-1基因型进行分析。依据是否发生DVT分为非DVT组57例和DVT组183例。利用PCR-RFLP检测这2种基因的多态性,收集2组患者的临床资料,比较2组MTHFR C677T和PAI-14G/5G基因多态性、不同MTHFR C677T基因型同型半胱氨酸水平,分析下肢DVT发生的风险因素。结果DVT组中吸烟患者比例高于非DVT组,D-二聚体升高患者占比高于非DVT组(P<0.01)。DVT组MTHFR C677T TT基因型频率与非DVT组比较差异无统计学意义(P>0.05)。DVT组中PAI-14G4G基因型频率显著高于非DVT组(P<0.01)。携带MTHFR C677T TT基因型的患者同型半胱氨酸水平显著高于非携带者(P<0.05),DVT组中TT基因型同型半胱氨酸水平高于非DVT组(P<0.05)。携带MTHFR C677T TT和PAI-14G4G基因型的2型糖尿病患者发生下肢DVT的风险显著增加,OR值为7.33,排除环境因素影响后,OR'值为12.65。结论PAI-14G4G基因型是2型糖尿病患者发生下肢DVT的独立风险因素;MTHFR C677T TT和PAI-14G4G基因型同时存在时,2型糖尿病患者发生下肢DVT的风险提高。

血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平对妊娠期肾病综合征妊娠结局不良的预测效能

目的观察血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)和可溶性CD14(sCD14)水平对妊娠期肾病综合征(NSP)患者妊娠结局不良的预测效能。方法选择2020年1月至2022年12月在该院诊断为NSP的患者98例作为NSP组,根据NSP患者24 h尿蛋白定量将其分为轻度蛋白尿组(32例)、中度蛋白尿组(22例)和重度蛋白尿组(44例)。另选择同期在本院定期产检的健康孕妇45例作为正常妊娠组。观察各组血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平。采用二元Logistic回归分析影响妊娠结局不良的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平对妊娠结局不良的诊断效能。结果NSP组血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平均明显高于正常妊娠组(P<0.05);重度蛋白尿组血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平均明显高于中度蛋白尿组和轻度蛋白尿组,而中度蛋白尿组血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平均明显高于轻度蛋白尿组,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据妊娠结局的不同,将NSP患者分为妊娠结局不良组(25例)和妊娠结局良好组(73例)。妊娠结局不良组尿蛋白、同型半胱氨酸、sTREM-1、suPAR和sCD14水平均明显高于妊娠结局良好组(P<0.05)。二元Logistic回归分析结果发现血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平升高是发生妊娠结局不良的危险因素(P<0.05)。血清sTREM-1、suPAR和sCD14水平联合检测NSP患者发生妊娠结局不良的灵敏度为88.0%,特异度为95.9%,曲线下面积(AUC)为0.924,明显高于sTREM-1(z=2.039,P=0.041)、suPAR(z=2.143,P=0.032)和sCD14(z=2.417,P=0.016)单独检测,但血清sTREM-1、suPAR和sCD14单独检测的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清sTREM-1、suPAR和sCD14可以作为评估NSP严重程度的检测指标,且三项联合检测有助于提高NSP患者发生妊娠结局不良的诊断效能。

1型5α-还原酶在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达及与临床特征的关系

目的探讨1型5α-还原酶在乳腺癌组织及癌旁正常组织中表达程度的差异,研究其与临床特征[年龄、肿瘤分期、肿瘤大小、15型17β羟化类固醇脱氢酶(17β-HSD15)、细胞分裂控制蛋白47(CDC-47)雌激素受体α(ERα)、雄激素受体(AR)、孕激素受体B(PRB)]的关系。方法研究材料来源于2013年1月至2014年10月于本院行乳腺癌改良根治术的70例女性患者的乳腺癌组织及癌旁正常组织,应用免疫组织化学法,研究1型5α-还原酶在乳腺癌组织及癌旁正常组织中表达程度的差异。结果 1型5α-还原酶及17β-HSD15在乳腺癌组织中的表达程度明显低于癌旁正常组织,差异具有显著性(P<0.05);CDC-47、AR、PRB在乳腺癌组织中的表达程度明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。乳腺癌组织中1型5α-还原酶与17β-HSD15阳性表达存在一致性。结论 1型5α-还原酶及17β-HSD15在乳腺癌组织中的表达程度明显低于癌旁正常组织,且二者在乳腺癌组织中的阳性表达存在一致性。1型5α-还原酶在乳腺癌发生发展及在调控肿瘤组织内部雄激素及雌激素水平过程中具有重要作用。

行前哨淋巴结活检的保乳术联合白蛋白结合型紫杉醇治疗乳腺癌效果及对HCCR-1影响

目的探讨行前哨淋巴结活检的保乳术联合白蛋白结合型紫杉醇治疗乳腺癌效果及对人宫颈癌基因(HCCR)-1影响。方法以开展行前哨淋巴结活检的保乳术联合白蛋白结合型紫杉醇治疗时间为截点,选取2018年11月—2020年11月收治的乳腺癌55例作为对照组(行前哨淋巴结活检的保乳术治疗),2020年12月—2021年12月收治的乳腺癌55例作为观察组(行前哨淋巴结活检的保乳术联合白蛋白结合型紫杉醇治疗)。比较2组入院时及治疗后2、3个月HCCR-1阳性检出率,入院时及治疗后2个月T淋巴细胞水平,治疗后6个月的临床效果,以及观察组治疗期间毒副作用。结果治疗后2和3个月,乳腺癌病灶和周围组织HCCR-1阳性检出率2组均低于入院时,观察组均低于对照组(P<0.05)。治疗后2个月,CD3+、CD4+和CD4+/CD8+2组均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后6个月,观察组完全缓解率74.55%(41/55)高于对照组52.73%(29/55)(P<0.05)。治疗期间,观察组出现恶心呕吐11例,皮肤潮红2例,骨髓抑制1例,给予对症治疗均在2周内恢复正常。结论行前哨淋巴结活检的保乳术联合白蛋白结合型紫杉醇治疗乳腺癌可降低HCCR-1水平,促进免疫指标恢复,改善近期疗效,且毒副作用较小。

T2DM患者血清过氧化还原酶1水平与抑郁症状及主观应激间的关系

目的:分析血清过氧化还原酶1(PRDX1)水平与2型糖尿病(T2DM)患者抑郁症状及主观应激的相关性。方法:选择2019年7月至2021年12月陕西省榆林市第二医院的256例T2DM患者,根据抑郁—焦虑—压力量表-21(DASS-21)抑郁评分将患者分为抑郁症状组(n=56)及无抑郁症状组(n=200)。采用酶联免疫吸附法检测血清PRDX1水平。根据DASS-21评估患者心理状态。采用压力知觉量表(PSS)评估患者的主观应激程度。结果:根据DASS-21评分,抑郁症状组中血清PRDX1水平显著高于无抑郁症状组的患者(P<0.05);所有T2DM患者血清PRDX1水平为(12.98±3.70)ng/mL,且血清PRDX1水平与DASS-21抑郁评分和压力评分均呈正相关关系(P<0.05);经受试者工作特征曲线分析,血清PRDX1水平诊断T2DM合并抑郁症状的曲线下面积为0.767(95%CI:0.699~0.835),灵敏性、特异性分别为87.5%、68.5%;经Pearson相关性分析和校正多种干扰因素的多元线性回归分析,血清PRDX1水平与有抑郁症状的T2DM患者PSS评分呈正相关关系(P<0.001),但与无抑郁症状的患者PSS评分无相关关系(r=0.076,P=0.283)。此外,对于有抑郁症状的T2DM患者,血清PRDX1水平与IL-6、TNF-α水平亦呈正相关关系(P<0.001)。结论:血清PRDX1水平对诊断T2DM患者是否合并抑郁症有良好的效能,且对于出现抑郁症状的T2DM患者,血清PRDX1水平持续增加与患者机体低度炎症反应以及主观应激程度有关。

CD4^+CD25^+CD127^(low/-)调节性T细胞在寻常型银屑病发病机制中的作用

目的:探讨CD4^+CD25^+CD127^(low/-)调节性T细胞(Treg)在寻常型银屑病(PV)发病机制中的作用。方法:利用流式细胞仪检测外周血Treg细胞的数量;MTT法检测Treg细胞对自身CD4^+CD25-T细胞增殖的抑制作用;采用酶联免疫吸附试验法检测血清中白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果:PV患者外周血Treg细胞数量与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),但对自身CD4^+CD25-T细胞增殖的抑制百分率降低(P<0.01);PV患者血清IL-10含量较正常对照组低(P<0.01),血清TGF-β1的含量较正常对照组高(P<0.01)。结论:PV患者Treg细胞的功能缺陷及分泌IL-10的降低可能参与PV的发病机制。

CD86协同刺激信号在孕早期母-胎界面Th1/Th2型细胞因子表达调控中的作用

目的 :探讨CD86协同刺激信号在孕早期母 胎界面Th1 Th2型细胞因子表达调控中的作用。方法 :建立正常妊娠模型CBA×Balb c和自然流产模型CBA×DBA 2。于孕第 4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠IgG作为对照组 ;仅于孕第 4天或于孕第 4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb。孕第 14天计算两种模型各实验组胚胎吸收率R。ELISA法测定孕第 9和第 14天各实验组母 胎界面组织体外培养上清中Th1 Th2型及相关细胞因子 (IL 2、IFN γ、TNF α、IL 4、IL 10、TGF β2 )表达水平。 结果 :孕早期干预CD86协同刺激信号 ,对正常妊娠模型母 胎界面孕第 9和第 14天IL 4、IL 10、TGF β2以及IFN γ、TNF α表达均无显著影响 ,其胚胎吸收率亦无显著变化。自然流产模型中 ,孕早期干预CD86协同刺激信号后 ,孕第 9、第 14天母 胎界面IL 4、IL 10、TGF β2表达均显著增加 (P <0 0 5 ) ;而IFN γ、TNF α表达显著下降 (P <0 0 5 )。胚胎吸收率亦显著下降 (P <0 0 5 )。结论 :孕早期母 胎界面CD86协同刺激信号的调节紊乱可能是触发母体对胚胎产生免疫排斥的重要病理因素 ,于孕早期干预CD86协同刺激信号能够恢复母 胎界面Th1型 Th2型免疫调节的生理平衡 ,从而诱导母 胎免疫耐受。

血清sCD40L、sICAM-1水平检测对2型糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨血清可溶性白细胞分化抗原CD40配体(sCD40L)、可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)水平检测对2型糖尿病肾病(DN)的诊断价值。方法选取DN患者80例(观察组)和单纯2型糖尿病(T2DM)患者80例(对照组),检测两组空腹血糖、餐后2h血糖、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、sCD40L、sICAM-1水平以及尿白蛋白/肌酐比值(UACR)、肾小球滤过率(eGFR),采用多因素Logistic回归分析DN发生的危险因素,通过受试者工作特征曲线(ROC)分析血清sCD40L、sICAM-1水平对DN的诊断价值。结果观察组TC、TG、LDL-C、sCD40L、sICAM-1、UACR水平较对照组升高,eGFR较对照组降低(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,糖尿病病程、TC、sCD40L、sICAM-1、UACR均是DN的独立危险因素(P均<0.05)。ROC分析显示,血清sCD40L、sICAM-1水平单独诊断DN的敏感性和特异性均在0.75以上,二者联合检测诊断DN的敏感性和特异性分别为0.860和0.848,均高于单独检测(P均<0.05)。结论DN患者血清sCD40L、sICAM-1水平明显升高,联合检测T2DM患者血清sCD40L、sICAM-1水平可及时发现并诊断DN。

干扰MiRNA-155表达的寻常型银屑病患者CD4^+ T细胞分化观察

目的观察干扰微小核糖核酸(miRNA)-155表达的寻常型银屑病患者外周血CD4^+T细胞分化情况。方法 (1)30例寻常型银屑病患者、30例健康志愿者,抽取两组空腹外周静脉血10 m L,免疫磁珠法分选CD4^+T细胞,q PCR法检测外周血miRNA-155,流式细胞仪测算表达IL-17A的细胞比例,酶联免疫吸附试验检测外周血IL-17A。(2)另取寻常型银屑病患者外周血CD4^+T细胞,诱导Th17分化后分为miRNA-155模拟物组、miRNA-155抑制物组、空白对照组,分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物(促进表达)、50 nmol/L miRNA-155抑制物(抑制表达)、含有Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基,流式细胞仪测算表达IL-17A的CD4^+T细胞比例,酶联免疫吸附试验检测IL-17A,q PCR法检测细胞miRNA-155、IL-17A和E26转录因子(Ets)-1mRNA。(3)取分离培养CD4^+T细胞,IL-2刺激培养72 h,将细胞分为A、B、C组。A、B、C组分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物、50 nmol/L miRNA-155抑制物、含Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基。A、B、C组再各自分为两个亚组,分别转染Ets-1 siRNA(促进表达)、Ets-1 siRNA阴性对照(空白质粒),培养48 h。荧光定量RT-PCR法检测各组IL-17A、Ets-1mRNA,Western blotting法检测各组细胞Ets-1蛋白。结果寻常型银屑病外周血miRNA-155相对表达量、IL-17A细胞比例及IL-17A相对表达量均高于健康体检者(P均<0.05)。模拟物组、抑制物组、空白对照组CD4^+T细胞表达IL-17A细胞比例分别为34.56%±4.78%、19.21%±1.56%、21.23%±2.65%,组间两两比较,P均<0.05。模拟物组、抑制物组、空白对照组培养液IL-17A水平分别为(1486±137)(783±86)、(886±100)pg/m L,组间两两比较,P均<0.05。与空白对照组、抑制物组比较,模拟物组miRNA-155、IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与本组Ets-siRNA阴性者比较,A、B、C组IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05)。结论寻常型银屑病患者外周血CD4^+T细胞miRNA-155表达升高、Ets-1表达降低。抑制miRNA-155表达可抑制寻常型银屑病患者CD4^+T细胞分化为Th17细胞,其机制可能为抑制Ets-1mRNA及蛋白表达。

受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型H1N1流感病毒感染小鼠记忆性CD8^+T细胞的应答

受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)是坏死复合体的关键成分之一,介导细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的发生。前期研究发现流感抗原特异性CD8^+T细胞的初次应答部分依赖于RIPK3分子,为探讨其在记忆性CD8^+T细胞应答中的作用,对初次感染后的C57BL/6小鼠在免疫记忆阶段进行了再次感染,并用流式细胞仪检测了流感病毒特异性的记忆性CD8^+T细胞的表型和功能。结果发现小鼠初次感染甲型H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34后37d,RIPK3敲除小鼠的CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力均显著低于野生型小鼠;在再次感染相同病毒时,RIPK3敲除小鼠流感病毒特异性CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子IFN-γ的能力依旧显著低于野生型小鼠;而CD8^+中枢型记忆性T细胞(TCM)比例显著高于野生型小鼠,效应型记忆性T细胞(TEM)或效应性T细胞(TEff)比例却显著低于野生型小鼠。提示RIPK3分子参与调节流感病毒特异的记忆性CD8^+T细胞诱生数量和分泌细胞因子功能,并影响其TCM与TEM/TEff的比例,为深入探索病毒特异的记忆性CD8^+T细胞应答的分子机制提供了新线索。

胰岛CD68、CD22阳性细胞表达及血清IL-12、IL-4水平的改变对1型糖尿病小鼠的影响

目的探讨1型糖尿病(T1DM)小鼠胰岛表达CD68、CD22的改变,血清白介素-12(IL-12)、白介素-4(IL-4)水平的变化及可能的机制。方法正常雄性C57BL/6J小鼠104只,随机分为正常对照组、盐水对照组及实验组。小剂量多次注射链脲佐菌素(MLD-STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,分别于第3、7、10、14、21、28天测空腹血糖,取胰尾组织及血清,通过免疫组化SABC法、酶联免疫吸附法(ELISA)及形态计量法进行研究。结果与正常及盐水对照组相比较,实验组小鼠胰岛数目减少,胰岛面积减小。实验组小鼠胰岛CD68阳性细胞的面数密度(NA)于第3天起明显高于正常对照组和盐水对照组(P<0.01),但第10天的NA在实验组相对较低。实验组胰岛CD22阳性细胞的NA值于第3天即高于正常对照组和盐水对照组(P<0.01),至第7天最高。血清ELISA结果显示,实验组小鼠血清IL-12水平自第7天开始增高(P<0.05);而血清IL-4水平与正常及盐水对照组相比有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD68及CD22阳性细胞在T1DM早期即浸润胰岛,有可能通过抗原递呈等作用促进了T1DM的发生。实验组小鼠血清IL-12增高,IL-4减少,提示Th1/Th2细胞失衡,推测是引发T1DM的重要因素之一。

尼莫地平联合拉坦前列腺素治疗原发性开角型青光眼的疗效及对房水EPO ET-1 sCD44的影响

目的:探讨尼莫地平联合拉坦前列腺素治疗原发性开角型青光眼的疗效及对房水促红细胞生成素(EPO)、内皮素-1(ET-1)、可溶性CD44(sCD44)的影响。方法:选择2015年6月至2017年6月我院接诊的91例原发性开角型青光眼患者进行研究,通过随机数表法分为观察组46例和对照组45例。对照组给予拉坦前列腺素治疗,观察组在对照组基础上,给予尼莫地平治疗,均连续治疗6个月。比较两组临床疗效、视力相关指标、视盘筛板血流、房水EPO、ET-1、sCD44的变化及不良反应。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率为93.48%(43/46),明显高于对照组的77.78%(35/45)(P<0.05);观察组眼压、视野缺损明显低于对照组[(16.57±1.54) mm Hg vs(18.72±1.85) mm Hg,(9.21±1.10) d B vs(11.37±1.20) dB],视网膜光敏感度、视力明显比对照组高[(18.74±2.30) d B vs(16.89±2.03) dB,(0.76±0.12) vs(0.71±0.09)](P <0.05);视盘筛板血流结果中,观察组血流速度、血流量、红细胞移动率均明显比对照组高[(188.42±20.56) mm/s vs(167.34±17.57) mm/s,(15.68±1.62) L/min vs(12.73±1.50) L/min,(1.04±0.15) vs(0.83±0.10)](P <0.05);观察组房水EPO、ET-1、sCD44均明显比对照组低[(7.05±1.17) m U/m L vs(8.49±1.45) m U/m L,(43.72±4.59) ng/L vs(51.04±5.64) ng/L,(13.40±1.39) ng/m L vs(18.15±1.70) ng/m L](P<0.05);治疗期间,两组不良反应总发生发生率分别为10.87%(5/46)和8.89%(4/45),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在原发性开角型青光眼患者中使用尼莫地平联合拉坦前列腺素效果显著,其内在机制可能和降低房水EPO、ET-1、sCD44表达相关,且用药安全性高,值得应用推广。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺治疗强直性脊柱炎的疗效及其对CD14 Dkk-1基因表达的影响

目的探究重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺治疗强直性脊柱炎(AS)的疗效及其对CD14、Dkk-1基因表达的影响。方法选取濮阳市人民医院2016年1月至2019年5月收治的AS患者124例为研究对象,按照随机数字表法分观察组、对照组,各62例。两组均在基础治疗基础上,对照组给予沙利度胺治疗,观察组给予肿瘤坏死因子-α(TNF-α)受体类生物制剂(重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白)联合沙利度胺治疗,均治疗3个月。比较两组疗效,治疗前及治疗3个月后患者脊柱活动度、腰椎骨密度、血清骨生化指标[骨钙素(OC)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、I型胶原交联C末端肽(CTX)]、炎性因子[TNF-α、白细胞介素(IL)-23(IL-23)、IL-6]水平、不良反应及外周血单个核细胞(PBMC)中CD14、Dkk-1基因表达情况。结果观察组治疗总有效率为91.94%(57/62),高于对照组的75.81%(47/62),差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗前后脊柱活动度、腰椎骨密度差值高于对照组(P<0.05),PBMC中CD14、Dkk-1基因治疗前后差值亦高于对照组(P<0.05)。观察组治疗前后OC、CTX、TNF-α、IL-23、IL-6差值均高于对照组(P<0.05),但两组BALP治疗前后差值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TNF-α受体类生物制剂联合沙利度胺治疗AS疗效显著,对CD14、Dkk-1基因表达、脊柱活动度、骨密度、骨细胞功能、机体炎症反应均有明显改善作用,整体治疗效果理想。

4-1BBL单克隆抗体激发U937细胞NF-κB的核转位及4-1BBL/CD28同型异构分子共定位

本研究探讨共刺激分子4-1BBL逆向信号在人急性单核细胞白血病细胞株U937中的分子机制。选择U937细胞株作为靶细胞,与鼠抗人4-1BBL激发型单克隆抗体1F1(mAb 1F1)共培养。应用激光共聚焦显微镜观察U937细胞株上NF-κB核转位及4-1BBL分子与CD28同型异构分子(CD28i)的共定位;使用流式细胞术及RTPCR检测U937细胞4-1BBL和CD28i的分子表达。结果表明:U937细胞经mAb 1F1刺激后,出现明显的NF-κB核内转位及细胞膜上4-1BBL与CD28i分子的共定位。结论:介导U937细胞生长的4-1BBL逆向信号的传导与NF-κB的核转位相关;CD28i分子可能参与了4-1BBL逆向信号的传导。

白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响

背景:研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素,抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应,但机制尚不明确。目的:了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin,Ad-mI L-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠,对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法:3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只,随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组,分别于第1,8,15,21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+Ad-m IL-10、Ad-mI L-10和生理盐水。结果与结论:12周后,与对照组相比,经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低,而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加,同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加;且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用;但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。

急性心梗患者PCI治疗前后血清Hcy sCD40L和ET-1检测的临床意义

目的探讨急性心梗患者PCI治疗前后血清Hcy、sCD40L和ET-1水平的变化及意义。方法应用放免法和酶免法对36例急性心肌梗死患者进行了PCI治疗前后血浆Hcy、sCD40L和ET-1的检测,并与35例正常健康人进行比较。结果在PCI治疗前,急性心梗患者血浆Hcy、sCD40L和ET-1水平非常显著高于正常人组(P<0.01);治疗后2周,则与正常健康人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论检测急性心梗患者血浆Hcy、sCD40L和ET-1水平的变化,对了解病情、观察预后,均有重要的临床价值。

西北燥证对糖尿病大鼠AQP1、AQP3和CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达的影响

目的探讨西北燥证对糖尿病大鼠水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP1)、水通道蛋白-3(Aquaporin-3,AQP3)和CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达的影响。方法选取16只正常大鼠,建立2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为正常环境T2DM组、西北燥证T2DM组,每组8只。另选正常大鼠8只设为正常对照组。观察各组大鼠的一般情况,检测大鼠空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、空腹血清胰岛素(Fasting serum insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)的变化,比较各组大鼠AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的表达水平,分析血清CD4^(+)、CD8^(+)与AQP1、AQP3表达水平的相关性。结果与正常对照组比较,正常环境T2DM组大鼠和西北燥证T2DM组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T表达差异均有统计学意义(P<0.05);与正常环境T2DM组比较,西北燥证T2DM组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论西北燥证外环境可影响T2DM大鼠的血糖水平,其作用机制可能与调控AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达有关。

抗CD20单克隆抗体与IL-10基因联合应用对NOD鼠肝脏PDX-1的影响

目的察抗CD20单克隆抗体与IL-10基因联合应用于已发病的NOD鼠,观察对其肝脏中PDX-1表达的影响。方法 17-20周龄雌性发病的NOD小鼠24只,随机分为A、抗CD20单克隆抗体组(于发病第1 d尾静脉注射Anti-CD20 500μg,并于第3、6、9 d尾静脉注射Anti-CD20 250μg);B、抗CD20单克隆抗体+IL-10基因组(第1 d尾静脉注射Anti-CD20 500μg+IL-10基因0.1 ml,后相同时间尾静脉注射Anti-CD20 250μg+IL-10基因0.1 ml);C、IL-10基因组(IL-10基因0.1 ml);D生理盐水对照组(生理盐水0.1 ml)。发病后每周监测2次体重;每天同一时间监测血糖,若血糖≥25 mmol/L,按20 U/kg皮下注射来得时。观察6周后行免疫组化检测肝脏中PDX1蛋白相对表达量,并行PCR了解PDX-1基因表达情况。结果联合治疗组肝脏中PDX-1基因表达及蛋白表达水平高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗CD20单克隆抗体与IL-10基因组联合干预可提高可促进PDX-1的表达。