黑顶黄堇化学成分及其Cdc25A/Cdc25B酶抑制活性

目的研究黑顶黄堇Corydalis nigro-apiculata C.Y.Wu化学成分及其Cdc25A/Cdc25B酶抑制活性。方法黑顶黄堇95%乙醇提取物采用硅胶柱、Sephadex LH-20、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用全自动多功能酶标仪测定不同极性部位提取物对组蛋白磷酸化酶Cdc25A/Cdc25B的抑制效果。结果从中分离得到16个化合物,分别鉴定为mucroniferanine A(1)、mucroniferanine C(2)、mucroniferanine D(3)、mucroniferanine F(4)、山缘草定碱(5)、山缘草碱(6)、二氢血根碱(7)、6-甲氧基二氢血根碱(8)、血根碱(9)、乙氧基血根碱(10)、黄连碱(11)、原阿片碱(12)、巴马亭(13)、紫堇碱(14)、hendersine B methyl ester(15)、tomentelline C(16)。黑顶黄堇氯仿部位、正丁醇部位和水相萃取部位对于Cdc25A酶和Cdc25B酶均存在较好的抑制效果,其中正丁醇和水部位最为显著。结论化合物1~16均为首次从该植物中分离得到,该药材氯仿部位及正丁醇部位对组蛋白磷酸化酶Cdc25A/Cdc25B具有抑制效果。

45种藏药材的CDC25A/CDC25B磷酸酶抑制活性筛选

目的:初步研究了45种藏药材乙醇提取物抑制CDC25A/CDC25B酶活性。方法:通过体外酶抑制活性测定,利用基于重组表达的CDC25A/CDC25B建立的高通量筛选模型,筛选获得活性乙醇提取物。结果:得到45种藏药材对CDC25A/CDC25B显示不同程度的抑制作用。其中有13种藏药材(防风、荆芥、雪层杜鹃、锁阳、侧金盏、斑花黄堇、黑顶黄堇、条裂黄堇、尼泊尔黄堇、粗梗黄堇及柳兰)对CDC25A/CDC25B有很好的抑制作用,且抑制率均小于50%。讨论:该实验结果为揭示藏药抗肿瘤活性提供科学依据,同时为进一步开发利用提供参考。

新型四唑[1,5-a]并嘧啶-5,7-二醇衍生物的合成及对Cdc25B抑制活性评价

以5-氨基四唑与丙二酸二乙酯为原料设计并合成了四唑[1,5-a]并嘧啶-5,7-二醇(1)和13个新型6-芳基偶氮四唑[1,5-a]并嘧啶-5,7-二醇(2a~2m)。通过^(1)H NMR,^(13)C NMR,IR,ESI-MS和元素分析等方法对其进行了结构表征。对所合成的目标化合物进行了细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)抑制活性筛选,结果表明:化合物2b,2c,2h,2i和2m对Cdc25B具有抑制作用,其抑制率可高达97.66%。

白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

含苯并咪唑环N-酰腙衍生物的合成及作为Cdc25B和PTP1B抑制剂的生物评价

以酚和氯乙酸为起始原料,经多步反应,合成出了14个新型的含苯并咪唑环N-酰腙衍生物5a^5n,并利用IR,~1HNMR和元素分析确定了其结构.评价了目标化合物对Cdc25B和PTP1B的抑制活性,讨论了结构与活性的关系.实验结果表明,大部分化合物对PTP1B显示出良好的抑制活性(IC50=(6.43±0.88)^(19.76±4.00)μg/mL),其中5h的抑制活性最高(IC50=(6.43±0.88)μg/mL).目标化合物5a^5n对Cdc25B有弱的抑制活性.

CDC25B在肿瘤中的表达及其抑制剂研究进展

目的CDC25（A、B和C）是双特异性蛋白磷酸酶,在细胞周期调控中发挥巨大作用.CDC25B是CDC25激酶家族的成员,其过度表达或激酶活性异常可提高细胞增殖存活能力,促进肿瘤生长和细胞转化,导致肿瘤发生.CDC25B基因已成为恶性肿瘤治疗的新靶点,寻找CDC25B抑制剂已成为抗肿瘤药物研发领域的重要任务.该文综述了CDC25B在某些肿瘤细胞中的表达及其抑制剂的研究,为抗肿瘤药物的研发提供参考依据.

细胞周期调控因子CDC25A、B抑制剂F09ZB-860H的研究

目的从真菌的代谢产物中筛选出对细胞周期调控因子CDC25A、CDC25B具有抑制活性的化合物,为研发新抗癌药物提供了先导化合物。方法利用基于重组表达的CDC25A和CDC25B建立的高通量筛选模型进行体外酶抑制活性测定,筛选获得活性菌株;筛选得到的阳性菌株,其发酵液溶剂提取物经硅胶柱层析及HPLC制备分离,得到活性化合物并通过综合波谱解析确定了活性化合物结构;利用肿瘤细胞株进行活性化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性评价。结果从真菌F09ZB-860的代谢产物中分离得到活性化合物F09ZB-860H,其结构与脱氢弯孢菌素相同。该化合物对CDC25A和CDC25B的IC50值分别为4.0和14.9μg/mL。抗癌细胞增殖结果表明该化合物具有强肿瘤细胞增殖抑制活性,对人宫颈癌细胞株HeLa和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的IC50值分别为0.7和2.8μg/mL。结论 F09ZB-860H是一个新的CDC25A和CDC25B双抑制剂,并具有强抗癌细胞增殖活性。

计算机辅助选择性CDC25B抑制剂的设计

目的:设计出针对CDC25B的抑制剂,证明其理论活性。方法:以CDC25B为靶点,利用计算机辅助药物设计的方法设计出抑制剂,应用分子对接证明其理论活性。结果:设计出了一个全新的化合物,运用理论证明其抑制活性高于已有化合物4f。结论:进一步探索了CDC25B抑制剂在治疗癌症中的前景,为CDC25B抑制剂的结构改造及活性测定奠定基础。

小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达

目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达。方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达。结果通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Westernblot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致。结论成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据。

CDC25磷酸酶调控细胞分裂作用机制探讨

CDC25磷酸酶是调节正常细胞分裂和细胞应对DNA损伤的重要调控子。近期研究表明多种CDC25C磷酸酶亚型对细胞周期进行协同调控。除ATM/ATR-CHK信号通路以外,p38-MAPKAP通路也参与激活G2/M期关卡。CDC25磷酸酶在许多肿瘤中过度表达,表明特异性的CDC25磷酸酶抑制剂可能成为有前途的癌症治疗药物。

细胞分裂周期因子CDC25B在肿瘤中作用的研究进展

细胞分裂周期因子25B(cell division cyclin 25B,CDC25B)作为细胞周期调控蛋白家族成员之一,定位于细胞质,参与细胞周期的转换及有丝分裂过程。CDC25B在多种肿瘤中高表达,是一种新发现的癌基因,CDC25B能阻滞细胞周期,进而调控肿瘤的进展,与肿瘤的发生发展密切相关。本文就CDC25B与肿瘤关系的研究进展作一综述。

酰胺硫醚桥连1,3-硒唑和1,2,4-三唑衍生物合成及其对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)抑制活性

细胞分裂周期25磷酸酯酶B (Cdc25B)与致癌转化有关,是潜在的抗癌疗法的药物靶标.为筛选Cdc25B抑制剂,以1,3-硒唑为核心组块,利用酰胺硫醚键与1,2,4-三唑席夫碱活性组块桥连成目标化合物2-(1,2,4-三唑-3-基)硫代-N-(4-苯基-1,3-硒唑-2-基)乙酰胺(TATS).首先为验证将1,3-硒唑作为核心组块的合理性,选择了苯环未被修饰的TATS1与Cdc25B进行分子对接模拟,结果表明, 1,3-硒唑能紧密地嵌入Cdc25B结构中,与Cdc25B的重要催化位点Arg492发生N-H…PI非键弱相互作用,发挥了核心作用.酰胺羰基氧原子与Arg492和Arg488形成氢键,表明酰胺硫醚键引入合理.在理论对接研究的基础上,通过对1,2,4-三唑席夫碱活性组块中两个区域用不同基团修饰,设计并合成了13个新型目标化合物TATS1~TATS13,对比测试了目标化合物和重要中间体对Cdc25B的抑制活性.结果表明,其中12个目标化合物生物活性优于阳性参照物Na3VO4, 1,2,4-三唑席夫碱两个区域的不同修饰对抑制活性有明显影响,实现了活性叠加效应,表明该类结构化合物有望成为潜在的Cdc25B抑制剂.

新型含咔唑环酰腙衍生物的合成及Cdc25B/PTP1B抑制活性评价

以咔唑和4-氰基氯化苄为初始原料,经多步反应合成出了一系列新型含咔唑基团的酰腙衍生物6,并利用IR、^1H NMR、^13C NMR和元素分析对其进行了结构表征.对目标化合物进行了Cdc25B/PTP1B抑制活性评价,结果显示,目标化合物6对Cdc25B/PTP1B均具有较高的抑制活性,其中4-[(咔唑-9-基)甲基]-N'-(2-羟基-1-萘亚甲基)苯甲酰肼(6g)对Cdc25B和PTP1B的抑制活性最高,IC50值分别为(2.16±0.38)和(1.06±0.23)μg/mL.对化合物6g进行分子对接的研究结果表明,6g能与Cdc25B/PTP1B酶形成稳定的复合物,形成氢键和疏水等相互作用.

新型二茂铁基1,2,4-三唑Mannich碱的合成及其Cdc25B抑制活性

以5种二茂铁基三唑席夫碱为原料,分别与吗啉、哌嗪和N-甲基哌嗪等进行曼尼希反应,首次设计合成了15个新型3-二茂铁基-1,2,4-均三唑曼尼希碱(3a^3e、4a^4e和5a^5e).通过IR、1H NMR和HRMS等测试方法对目标化合物结构进行了表征,并对代表目标化合物3b进行X-ray单晶衍射测试.研究了目标产物对Cdc25B的抑制活性,结果发现,13个目标化合物表现出良好的抑制活性,其中3c、4a、5b、5c和5e等5个化合物的IC50值小于阳性参照物正矾酸钠(1.86±0.24μg·m L-1),分别为0.91±0.18、0.62±0.13、1.10±0.33、0.44±0.04和0.67±0.13μg·m L-1,对比PTP1B抑制活性筛选结果,目标化合物对Cdc25B有选择性的抑制作用,可以作为潜在的Cdc25B抑制剂.

基于咔唑的单-/双-硫代碳酰腙衍生物的合成及Cdc25B/PTP1B抑制活性评价

合成了一系列新型的基于咔唑的单-/双-硫代碳酰腙衍生物.利用IR、1H NMR、13C NMR和元素分析对其进行了结构表征.评价了目标化合物对Cdc25B和PTP1B的抑制活性,讨论了其结构与活性的关系.实验结果显示,大部分目标化合物对Cdc25B和PTP1B表现出良好的抑制活性.其中,1,5-双[(9-戊基-3-咔唑基)亚甲基]硫代碳酰腙(4d)对Cdc25B的抑制活性最高,IC50为(0.23±0.02)μg/m L.1,5-双[(9-乙基-3-咔唑基)亚甲基]硫代碳酰腙(4a)对PTP1B的抑制活性最高, IC50为(1.00±0.16)μg/m L.对目标化合物4a和4d进行分子对接研究和密度泛函理论(DFT)计算,结果表明,目标化合物4d和4a分别进入到了Cdc25B和PTP1B酶的活性位点区域,有活性作用的主要是硫代碳酰腙和咔唑基团.

新型酰基硫脲衍生物的合成及细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性研究

采用超声波辐射与固-液相转移催化联用技术合成出了一系列新型含咔唑基团的酰基硫脲衍生物3,利用IR、~1H NMR、^(13)C NMR和元素分析对其进行了结构表征.该合成方法具有反应时间短、操作简便、产率高等优点.对所合成的目标化合物进行了细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性筛选,实验结果显示,目标化合物3对Cdc25B均具有良好的抑制活性,部分化合物对PTP1B也表现出良好的抑制活性.其中1-(4-硝基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3n)对Cdc25B的抑制活性最高[IC50=(0.49±0.12)mg/mL],1-(2-硝基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3l)对PTP1B的抑制活性最高[IC50=(3.59±1.15)mg/m L].值得注意的是,化合物3n对Cdc25B和PTP1B均具有较高的抑制活性.分子对接的初步研究结果揭示了此类抑制剂的结构-活性关系.这些活性目标化合物是潜在的Cdc25B和PTP1B抑制剂,在癌症和糖尿病治疗方面具有很好的应用前景.

新型3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物的合成及细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性研究

以邻苯二胺和一氯乙酸为初始原料,经多步反应,合成了一系列新型含苯并咪唑环和芳磺酰基的3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物7a^7y.利用~1H NMR、IR和元素分析对新的中间体化合物3、4、6及目标产物7进行了结构表征.对所合成的目标化合物进行了细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性筛选,实验结果显示,部分目标化合物对Cdc25B和PTP1B显示出良好的抑制活性,其中目标化合物7d对Cdc25B的抑制活性最高[IC50=(7.72±0.73)mg/m L],7u对PTP1B的抑制活性最高[IC50=(3.31±0.57)mg/m L].值得注意的是,化合物7b、7d、7l、7t和7u对Cdc25B和PTP1B均具有抑制活性.这些活性的目标化合物是潜在的Cdc25B和PTP1B抑制剂,在癌症和糖尿病治疗方面具有很好的应用前景.

含吡啶组块3-脂肪基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4噻二唑衍生物的合成及生物活性

分别将6种脂肪酸与二氨基硫脲反应,合成了6种含不同碳数的3-脂肪基-1,2,4-三唑(1a^1f),其中化合物1e和1f为首次合成。在三氯氧磷存在下,分别将化合物1a^1f与4-吡啶甲酸和2,6-吡啶二甲酸反应,首次高产率合成了12种三唑并噻二唑衍生物(2a^2f)和(3a^3f)。为对比引入3-脂肪基和吡啶组块对生物活性的影响,分别合成了3-苯基含吡啶组块产物(5)、双枝3-苯基含吡啶组块化合物(6)、不含吡啶组块的化合物(7a^7c)和(8a^8c)。应用IR、1H NMR和HRMS等技术手段对19种新物质进行了结构表征,并研究了其对Cdc25B和PTP1B的抑制性能,研究结果表明,含有吡啶组块的双枝脂肪基化合物3b、3d、3e和3f对Cdc25B有良好的抑制活性,IC50值(mg/L)分别为1.12±0.27、2.72±1.07、0.72±0.05和4.97±0.93;化合物2b、3d和5对PTP1B表现出较高的抑制活性,IC50值(mg/L)分别为0.98±0.13、1.33±0.11和2.18±0.20。

人Cdc25B基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析

目的构建人细胞分裂周期25家族蛋白B(Cdc25B)基因启动子(promoter)荧光素酶报告基因载体p GL3-Cdc25B-promoter,并检测其转录活性。方法应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得人Cdc25B基因5'端非编码区处包含转录起始位点在内的-2000^+100的DNA序列。以正常人全血基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列,并插入到p GL3-Basic荧光素酶报告基因载体上。通过设计不同引物,进一步构建系列缺失体,共获得7个不同长度启动子序列的报告基因载体。将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染He La细胞,通过双荧光素酶报告基因活性测定实验检测不同缺失体的转录活性。利用定点突变及RNA干扰(RNAi)探究预测的转录因子对Cdc25B转录活性的影响。结果构建的人Cdc25B基因启动子荧光素酶报告基因载体p GL3-Cdc25B-promoter经酶切鉴定及测序结果比对完全正确,将其转染He La细胞后,检测到荧光素酶高表达(P<0.05)。启动子系列缺失分析显示-160^-53片段包含基本核心启动子,与生物信息学的预测结果一致。定点突变及RNA干扰显示NF-YB转录因子对Cdc25B起正调控作用。结论成功构建了7个具有转录活性的人Cdc25B启动子缺失片段,确定了NF-YB是Cdc25B转录的一个重要调控因子,为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础。

细胞分裂周期蛋白CDC25B抑制剂研究进展

CDC25(cell division cyclin 25)是调控细胞周期的重要蛋白,主要有CDC25A,CDC25B和CDC25C 3种亚型。CDC25B的过表达与许多癌症的发生有关,被认为是新的很有潜力的抗肿瘤药物靶点。高活性、高选择性的小分子抑制剂能为研究CDC25B在细胞通路中的生物功能和作用机制提供工具化合物,为抗肿瘤药物研究提供药物先导物。本文就2012年以来报道的CDC25B抑制剂做简要的综述。