人肝癌相关抗原Cdc25C特异性多肽抗体的制备及其应用

目的制备抗人肝癌相关抗原Cdc25C特异性多肽抗体,为进一步研究Cdc25C的功能奠定基础。方法通过生物信息学软件对人Cdc25C蛋白的抗原属性进行分析,综合考虑多肽的纯度、氨基酸组成、长度、亲水性和二级结构等,得到若干个同源性低、抗原性较高的候选多肽。多肽合成后与KLH佐剂偶联,免疫新西兰大白兔,制备相应的多克隆抗体。经ELISA和Western blotting方法鉴定其活性,并以免疫组化法检测多肽抗体的效果。结果多肽抗体的效价较高,特异性强。以多肽抗体对重组表达的Cdc25C融合蛋白进行Western blotting鉴定,于73k D附近有明显反应条带。以全蛋白的单克隆抗体和多肽抗体检测同一肝细胞癌癌旁组织,购买的Cdc25C单克隆抗体与制备的Cdc25C多肽多克隆抗体平均光密度分别为0.538±0.192、0.410±0.122,两者比较差异无统计学意义(t=0.109,P>0.05)。结论成功制备抗人肝癌相关抗原Cdc25C特异性多肽抗体;筛选获得的候选多肽具有Cdc25C全蛋白一样的抗原性,制备的多肽抗体具有和针对Cdc25C全蛋白抗体一样的效果。