过表达CDK11^(p58)促进人胰腺导管腺癌MIAPaCa-2细胞增殖

CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺导管腺癌细胞)单克隆细胞,并通过流式细胞分析、MTT检测及real-time PCR的方法检测了细胞周期、细胞增殖能力及G1/S期相关调控基因的转录水平.结果显示,该单克隆细胞(实验组)与空载体组细胞和空白对照组细胞相比G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期细胞比例明显上升(P<0.01);细胞增殖能力明显提高(P<0.01);cyclin D1、cyclin D3、p21基因mRNA水平较两组对照细胞明显升高(P<0.01).提示过表达的CDK11p58通过上调cyclin D1、cyclin D3和p21基因的mRNA水平促进MIAPaCa-2细胞通过细胞增殖的关键限速点G1/S期,加快细胞增殖.

CDC2L1～2基因及与肿瘤的关系

细胞周期调节蛋白激酶（CDC2L）1和CDC2L2基因定位于人第1号染色体1p36.3区,在人体细胞中,通过选择性剪接,转录出超过20个不同的信使RNA和蛋白质,在CDC2L基因各种产物中指定的773～786氨基酸,总共有15个氨基酸的差异,12个非保守的和3个保守的.CDC2L1～2在细胞有丝分裂、凋亡、纺锤体形成、微管稳定,肿瘤发生、发展等方面均有重要作用.进一步研究CDC2L1～2基因在肿瘤中的具体发病机制将为肿瘤的预防、治疗、预后等方面带来新思路.

高糖条件下p58促胰岛β细胞凋亡的机制

2型糖尿病是一种具有明显遗传倾向的复杂的多基因疾病。CDC2L2是中国北方汉族人2型糖尿病的一个易感基因。目前,该基因与2型糖尿病发生发展的关系尚不清楚。本文针对CDC2L2编码的蛋白p58与胰岛β细胞凋亡的关系及其作用的分子机制进行了研究。INS-1(大鼠胰岛β细胞瘤细胞株)高糖浓度(20mmol/L)下培养,分为三个组:空白对照组、空载体对照组(转染载体pcDNA3.0)和实验组(转染质粒pcDNA3.0-HA-p58),Annexin V-FITC/PI双染法检测胰岛β细胞的凋亡状况。结果显示,在高糖培养条件下,p58高表达组INS-1细胞的凋亡率显著高于空白对照组和空载体对照组(P<0.01,P<0.05)。Western blot检测显示,与两对照组相比,p58高表达组的INS-1细胞中Caspase-3和Bax的表达水平明显上升(P<0.05,P<0.01),胞浆内CytoC的含量显著升高(P<0.01),Bcl-2的表达水平显著下降(P<0.05)。以上结果提示,p58在高糖条件下可能通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,使线粒体外膜的通透性增加,从而引起CytoC由线粒体向胞浆的释放,最终活化Caspase-3,引起INS-1细胞凋亡。本实验为进一步研究CDC2L2与胰岛β细胞凋亡的关系及其分子作用机制奠定了重要的实验基础。