细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1/p34cdc2)对喉癌术后局部复发的预测价值

目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2年以上的喉鳞状细胞癌中14例出现局部复发(复发组),71例未复发(未复发组)。在喉鳞状细胞癌和癌切缘组织中p53蛋白阳性率分别为60.0%和36.5%;p21蛋白阳性率分别为38.8%和21.2%;Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为70.6%和29.4%。喉鳞状细胞癌复发组和未复发组的切缘组织中p53蛋白阳性率分别为71.4%和29.6%(P=0.003),切缘组织中p21蛋白阳性率分别为50.0%和15.5%(P=0.004),切缘组织中Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为57.1%和23.9%(P=0.013)。癌旁切缘组织中p53与p21及Cdk1/p34cdc2蛋白表达之间无相关性(P均>0.05)。结论 p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用;癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2过表达与喉鳞状细胞癌局部复发密切相关。

二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。

不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34^(cdc2)表达的差异

旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显著高于30与60d(P<0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显著(P>0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显著(P<0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显著高于30d(P<0.05),但60和90d差异不显著(P>0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。

Cyclin B_1、P34^(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 为了研究非小细胞肺癌组织中CyclinB1及P34 cdc2 的表达 ,探讨CyclinB1及P34 cdc2 的表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁细支气管和 /或小支气管增生组织和正常肺组织 )标本10 0例。采用免疫组织化学SP法。结果 显示在癌组织与癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织及正常肺组织中CyclinB1及P34 cdc2 表达差异有显著性 (P <0 0 1)。在癌组织中有过表达 ;在癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中的表达较正常肺组织中的表达增强。 10 0例非小细胞肺癌组织中CyclinB1及P34 cdc2 表达呈正相关 (P <0 0 1) ,相关系数为 0 96 6。癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中 ,CyclinB1及P34 cdc2 的表达也呈正相关 (P <0 0 1) ,相关系数为 0 6 38。组织类型、分化程度和淋巴结转移与CyclinB1及P34 cdc2 的表达均无统计学意义 (P >0 0 5 )。不同临床分期的非小细胞肺癌 ,其CyclinB1及P34 cdc2 的表达差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 CyclinB1及P34 cdc2 在非小细胞肺癌中有过表达现象 ,二者在M期前形成过多的促成熟因子 (maturationpromotingfactor,MPF)从而加速非小细胞肺癌细胞跨越G2 /M期关卡进入分裂期。过表达的CyclinB1及P34 cdc2 可作为反?

p34^(cdc2)和cyclin B1在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:研究细胞周期蛋白p34cdc2和cyclin B1在宫颈癌组织中的表达水平,并探讨它们的表达与宫颈癌患者临床病理资料之间的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)法和Western印迹法,对62例原发性宫颈癌和15例对照宫颈组织进行检测,定量分析p34cdc2和cyclin B1的mRNA和蛋白质的表达水平。结果:在宫颈癌组织中p34cdc2和cyclin B1的mRNA和蛋白质表达水平明显高于对照宫颈组织(P=0.004,P=0.013和P=0.016,P=0.029),而且主要表现为过表达。p34cdc2和cyclin B1之间存在显著性正相关,mRNA和蛋白质表达的相关系数分别为0.527(P=0.001)和0.432(P=0.022)。p34cdc2和cyclin B1的mRNA表达与宫颈癌淋巴结转移之间存在密切关系(P=0.02,P=0.001),但与患者的年龄、临床分期、病理类型和分化程度无关(P>0.05)。结论:p34cdc2和cyclin B1是宫颈癌中的重要调控分子,可促发癌细胞克服细胞周期G2/M期控节制点进入M期,促进肿瘤的发生与发展。p34cdc2和cyclin B1的高表达可能成为研究宫颈癌发生机制和淋巴转移的新的分子标志。

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞CyclinB_1和p34^(cdc2)蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量 X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞 CyclinB1和 p34cdc2 蛋白表达的变化。结果表明 ,与假照组相比 ,75 m Gy X射线全身照射后 8h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始升高 ,12 h达高峰 ,4 8h恢复至正常水平 ;而 2 Gy照射后 4 h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始降低 ,12 h降至最低 ,2 4 h有回升趋势 ,4 8h恢复至假照水平。p34cdc2 蛋白的表达 ,与假照组相比 ,75 m Gy照射后 4～ 4 8h未见明显变化 ;而 2 Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后 Cyclin B1蛋白表达的变化基本一致。提示 :低剂量 X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞 Cyclin B1蛋白表达增强 ,从而促进细胞周期进程 ,但对 p34cdc2 表达无影响 ;相反 ,较高剂量照射导致 Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达均下降 ,最终发生 G2 阻滞。

鼻咽良恶性病变中EBV-LMP1、CyclinB1、P34^(cdc2)和Survivin的表达及意义

目的 :探讨P34cdc2 、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和颈部淋巴结转移灶中的表达及意义 ,并分析与EBV LMP1表达的相互关系。方法 :应用免疫组化检测 30例鼻咽粘膜慢性炎、30例鼻咽癌和 30例鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中LMP1、P34cdc2 、CyclinB1和Survivin的表达。结果 :LMP1、P34cdc2 、CyclinB1和Survivin在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为 2 0 .0 % (6 /30 )、10 .0 % (3/30 )、10 .0 % (3/30 )和 3.3% (1/30 ) ;在鼻咽癌中的阳性率分别为 6 3.3% (19/30 )、73.3% (2 2 /30 )、5 0 .0 % (15 /30 )和 36 .7(11/30 ) ,与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性 (P <0 .0 1) ;在鼻咽癌颈部淋巴结转移灶中的阳性率分别为 70 0 % (2 1/30 )、80 .0 % (2 4 /30 )、76 .7% (2 3/30 )和 4 3.3% (13/30 ) ,与鼻咽粘膜慢性炎比较差异均有显著性 (P <0 .0 1) ,与鼻咽癌相比较均有所增高 ,但仅CyclinB1有统计学意义(P <0 .0 5 )。在鼻咽癌及其颈部淋巴结转移灶中 ,LMP1与P34cdc2 和CyclinB1的表达均有显著相关性 (分别P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。结论 :鼻咽癌中存在P34cdc2 、CyclinB1和Survivin蛋白过表达 ,LMP1与P34cdc2 和CyclinB1可能协同致病。

细胞周期调控蛋白P34cdc2与cyclin B1在头颈部鳞癌中的预测价值

头颈部鳞癌是一种较常见的恶性肿瘤。p34cdc2及cyclinB1是调控G2/M期的重要蛋白,可以促进G2/M期转换而加速细胞周期进程。关于p34cdc2及cyclinB1与头颈部鳞癌的发生发展及预后的研究目前已相当普遍。本文就它们在头颈部鳞癌中的预测价值进行综述。

P34^(cdc2)、Cyclin B1在大肠癌中的表达及意义

目的:研究p34cdc2、细胞周期素B1(cyclin B1)在大肠癌组织中的表达,并探讨其与大肠癌发生、发展的关系. 方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测p34cdc2、cyclin B1在64例大肠腺癌组织及10例正常对照大肠组织中的表达情况. 结果:64例大肠癌组织中p34cdc2、cvclin B1表达阳性率分别为68.75%和82.81%,定位于细胞质中,呈棕黄色或棕褐色.10例正常对照大肠组织中p34cdc2、cvclin B1部分为弱阳性及中度阳性表达.病例组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05).cyclin B1与p34cdc2的表达呈正相关,相关系数为0.586. p34cdc3和cyclin B1在大肠癌组织中的表达在有淋巴结和远隔器官转移组与没有淋巴结和远隔器官转移组间其差异有显著性(P<0.05);而在根据患者年龄、性别、肿瘤的原发部位、分化程度等进行分组的组间其表达的差异没有显著性. 在大肠癌组织中PCNA阳性细胞呈弥漫分布,呈明显异质性,阳性率为73.44%.在正常大肠组织中见PCNA阴性或少量阳性表达.经统计学分析在大肠癌组织中PCNA的表达与p34cdc2和cyclin B1均没有相关性. 结论:p34cdc2、cyclin B1在大肠癌中呈过表达,可作为反映大肠癌淋巴结转移和远隔器官转移的指标之一.

cyclinB_1、p34^(cdc2)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期调控因子cyclinB1、p34cdc2在卵巢肿瘤发生、发展及预后中的作用。方法应用免疫组化SP法对正常卵巢、卵巢良性上皮性肿瘤及恶性肿瘤中cyclinB1、p34cdc2的表达进行检测。结果cy-clinB1和p34cdc2在正常卵巢、良性肿瘤和恶性肿瘤中的阳性表达呈递增趋势,在恶性肿瘤的阳性表达率显著高于正常卵巢和良性肿瘤(P<0.05);并且cyclinB1和p34cdc2的表达与肿瘤的分化程度、临床分期及预后明显相关(P<0.05)。结论cyclinB1和p34cdc2在卵巢肿瘤的进展、诊断和判断预后方面有一定的意义。

结直肠癌组织中CyclinB1、p34^(cdc2)、PCNA和Ki-67表达的研究

目的:探讨结直肠癌发生和分化中CyclinB1、p34cdc2、PCNA和Ki-67表达异常及其临床病理学意义。方法:采用免疫组化SABC法检测CyclinB1、p34cdc2、PCNA和Ki-67在16例结直肠癌组织中蛋白的表达。结果:CyclinB1和p34cdc2染色定位于细胞胞浆和(或)胞核内。PCNA和Ki-67染色定位于胞核内。在研究病例中有87.5%(14/16)CyclinB1阳性表达,81.2%(13/16)p34cdc2阳性表达,93.7%(15/16)PCNA阳性表达,81.2%(13/16)Ki-67阳性表达。低分化结直肠癌的CyclinB1、p34cdc2、PCNA和Ki-67阳性率明显高于高中分化结直肠癌,CyclinB1、p34cdc2、PCNA和Ki-67的表达具有高度一致性。结论:CyclinB1、p34cdc2、PCNA和Ki-67的阳性表达率及表达强度同结直肠癌分化程度有密切关系。

乳腺癌细胞中p53、C-erbB-2、p21^(WAF1)和CDK4的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测120例乳腺癌组织石腊切片上p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达。结果:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4阳性表达率分别为53.3%、63.3%、58.3%、41.6%;阳性产物主要位于细胞核中,p53、C-erbB-2的表达与肿瘤组织分级(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)显著相关,p21WAF1的表达与淋巴结转移(P<0.01)显著相关,无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组;与组织分级及PR、ER表达无显著相关。CDK4阳性表达与肿瘤组织分级(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)显著相关,与PR、ER无相关。结论:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为判断肿瘤浸润转移、指导治疗和估计预后的参考指标。特别是p53的表达水平及淋巴结转移可能是判断乳腺癌的术后生存的独立有效指标,而综合应用上述指标可能更有助于预后的判断。

Cyclin E、CDK_2和p21^(WAF1)在食管上皮癌变过程中的表达及意义

目的 探讨食管上皮癌变过程中细胞周期调控因子cyclin E、CDK2和p21WAF1的表达状况及其意义。方法 应用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织、31例非典型增生组织和17例正常食管粘膜中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA表达。应用半定量RT PCR和Western blot检测22例新鲜食管癌及相应癌旁组织的mRNA和蛋白表达。结果 从食管正常粘膜、非典型增生组织到癌组织,cyclin E和CDK2蛋白和mRNA阳性表达率逐渐上升,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。食管癌组织中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA高表达,与癌旁组织或切缘正常食管粘膜有显著性差异(P<0.01)。cyclin E、CDK2和p21WAF1 基因表达显著正相关(P<0.01 或P<0.05)。结论 食管上皮癌变过程中,细胞周期相关基因cyclin E和CDK2表达逐渐增强。cyclin E基因表达异常是食管癌变过程中的早期事件。p21WAF1 基因在食管癌中高表达,可能与细胞周期调控的反馈机制有关。

Survivin、P34^(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 研究非小细胞肺癌组织中survivin和P34cdc2 的表达 ,探讨survivin和P34cdc2 的表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁细支气管和 /或小支气管增生组织和正常肺组织 )标本 10 0例。采用免疫组织化学SP法染色。结果 在癌组织与癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织及正常肺组织中survivin和P34cdc2 表达差异有显著性 (P <0 .0 1)。在癌组织中有过表达 ,在癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中的表达较正常肺组织中的表达增强 ;癌组织中survivin和P34cdc2 表达呈正相关 (P <0 .0 1) ,癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中 ,survivin和P34cdc2 的表达也呈正相关 (P <0 .0 1)。癌组织类型、分化程度和淋巴结转移与survivin和P34cdc2 的表达均无相关性 (P >0 .0 5 )。不同临床分期的非小细胞肺癌 ,其survivin和P34cdc2 的表达差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 survivin和P34cdc2 在非小细胞肺癌中有过表达现象 ,在非小细胞肺癌的G2 /M期 ,P34cdc2 可能通过将survivinThr (34)磷酸化而激活或增强细胞的抗凋亡能力 ,从而将细胞周期进程与凋亡调控有机地联系起来。过表达的survivin和P34cdc2 可作为反映非小细胞肺癌细胞分裂增殖、凋亡抑制 (细胞生存?

P53、P21^(WAF1)和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义

背景与目的:P53、P21WAF1和CDK1是细胞周期中G2/M期DNA损伤检验点"P53通路"的关键因子,本研究拟探讨P53、P21WAF1和CDK1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、76例卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白的表达,并分析卵巢上皮性癌组织中P53、P21WAF1、CDK1蛋白表达与其临床病理特征的关系以及各蛋白表达之间的相关性。结果:P53、P21WAF1和CDK1蛋白在卵巢上皮性癌中的阳性率与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤相比其差异均有统计学意义(P<0.05),而在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤之间其阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。在卵巢上皮性癌中,临床分期越晚、组织分化越差,P53蛋白表达越高;随着临床分期的增加,P21WAF1蛋白表达逐渐降低;CDK1蛋白的表达与各临床病理特征无相关性。卵巢上皮性癌中P53蛋白和P21WAF1蛋白的表达与CDK1蛋白的表达呈负相关(r=-0.388,P=0.001;r=-0.282,P=0.014),P53蛋白与CDK1蛋白表达呈正相关(r=0.263,P=0.022)。结论:P53蛋白与卵巢上皮性癌的恶性程度相关,P53和P21WAF1蛋白可能与卵巢上皮性癌的恶性进展有关。检测CDK1可能有助于卵巢癌的早期诊断。

雌激素对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化影响的研究

目的:研究雌激素对人子宫内膜样癌(EC)Ishikawa细胞(高分化)中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化的影响。方法:分别采用含3种不同浓度雌二醇(E_2)(10^(-6)、10^(-8)、10^(-10)mol/L)的培养基培养Ishikawa细胞24、48、72h,MTT检测细胞增殖情况,光镜和电镜观察细胞形态变化,Western blot法检测p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,低、中浓度E_2组Ishikawa细胞增殖明显(P<0.05),高浓度E_2组细胞增殖不明显(P>0.05)。光镜及电镜结果显示,与对照组比较,低、中浓度E2组Ishikawa细胞密度增加,部分细胞内线粒体、内质网轻微肿胀,随着作用时间延长,其肿胀程度增加;高浓度E_2组Ishikawa细胞密度减少,较多细胞内线粒体明显肿胀,可见细胞凋亡现象,随着作用时间延长,线粒体、内质网弥漫肿胀、空泡化,细胞凋亡增多。Western blot法结果显示,随着E_2作用时间延长及浓度增加,p57^(kip2)、Cyclin D1与CDK4蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),其中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白均在高浓度E_2组表达最高,而p57^(kip2)蛋白在低浓度E_2组表达最低,Cyclin D1与CDK4蛋白在对照组表达最低。Cyclin D1和CDK4蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:E_2浓度较低时可能以上调Cyclin D1与CDK4蛋白表达为主,发挥正向调控细胞周期进程的作用,促进Ishikawa细胞增殖;E_2浓度较高时可能以上调p57^(kip2)蛋白表达为主,从而抑制Ishikawa细胞增殖,还可导致较强细胞损伤。

P34^(cdc2)与人卵巢癌顺铂耐药的关系研究

卵巢癌顺铂耐药是导致晚期卵巢癌患者复发原因之一，逆转顺铂耐药是卵巢癌治疗中亟待解决的难题。细胞周期蛋白依赖性激酶2（P34cdc2激酶）在细胞周期调控中起着调控G2至M 期的作用［1］，过度表达，可使细胞周期进程紊乱，DNA修复系统异常，导致细胞恶性增殖，使顺铂化疗诱导的细胞凋亡减少，从而产生耐药。为探讨 P34cdc2过度表达与卵巢顺铂耐药相关性，我们应用RT‐PCR及免疫印迹法检测卵巢癌顺铂敏感细胞株与耐药细胞株中P34cdc2 m RN A及蛋白表达的差异。

抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21^(cip1)转录的影响

目的 分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。 方法 将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。 结果 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。 结论 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin

Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定

目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果：荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01（survivin）、36.33±1.21和43.26±1.02（cdk1）。结论：本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。