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Cecropin-X发酵过程中工程菌质粒稳定性的研究 被引量:8
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作者 邱英华 沈益 +3 位作者 王玉海 徐贤秀 董雪吟 张洪祖 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期390-392,共3页
通过连续斜面转接实验 (5 0次 )检测重组Cecropin X工程菌质粒的结构稳定性 ,采用 30L自动控制发酵罐观察不同培养基 ,有无选择压力和溶氧高低等培养条件对质粒分裂稳定性的影响。结果表明 ,该工程菌质粒具有结构稳定性和分裂不稳定性... 通过连续斜面转接实验 (5 0次 )检测重组Cecropin X工程菌质粒的结构稳定性 ,采用 30L自动控制发酵罐观察不同培养基 ,有无选择压力和溶氧高低等培养条件对质粒分裂稳定性的影响。结果表明 ,该工程菌质粒具有结构稳定性和分裂不稳定性。当外源蛋白表达时 ,便会出现分裂不稳定性 ,表达量越高 ,质粒丢失情况越严重。经1 2h的培养 ,当采用TB和 2×LB作为发酵培养基时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 98 0 % ,包涵体得率有很大差异 ,干重分别为 1 2 4和 0 4 0g L。发酵培养基中 (TB)氨苄青霉素浓度为 0和 1 0 0 μg mL时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 92 0 % ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为 1 2 4和 1 2 0g L。通过改变搅拌速度来调节溶氧量 ,当转速为 1 5 0和 2 5 0r min时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 1 0 0 % ,包涵体得率有较大差异 ,干重分别为 1 2 4和 0 71g L。 展开更多
关键词 cecropin-x 发酵 质粒稳定性
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含有FXa切割位点的抗菌肽X在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 袁榴娣 窦非 +4 位作者 梁玉璞 谢维 王芳 张双全 戴祝英 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期411-414,共4页
PCR method was used to introduce the code sequence of Factor Xa cleavage site to the 5′ end of cecropin CMIV mutant gene X,then the gene was cloned into the expression vector pGEX KG,and was highly expressed in E.col... PCR method was used to introduce the code sequence of Factor Xa cleavage site to the 5′ end of cecropin CMIV mutant gene X,then the gene was cloned into the expression vector pGEX KG,and was highly expressed in E.coli BL21 by IPTG induction.The fusion protein was purified by affinity chromatography and was cleaved by Factor Xa.Cecropin X with antibacterial activity was obtained after purified by ion exchange chromatography. 展开更多
关键词 抗菌肽X 融合表达 凝血因子FXa 抗菌活性
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溶氧对杀菌肽-X发酵工艺的影响 被引量:2
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作者 邱英华 沈益 +3 位作者 王玉海 董雪吟 张洪祖 徐贤秀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期972-974,共3页
本研究采用 30L自动控制发酵罐研究了重组杀菌肽 X工程菌的基本发酵条件。经 12h发酵培养 ,发酵培养基中氨苄青霉素浓度为 0和 10 0 μg mL时 ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为 1 2 4和 1 2 0g L ;控制溶氧为 2 0 %~30 %和溶氧自然变... 本研究采用 30L自动控制发酵罐研究了重组杀菌肽 X工程菌的基本发酵条件。经 12h发酵培养 ,发酵培养基中氨苄青霉素浓度为 0和 10 0 μg mL时 ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为 1 2 4和 1 2 0g L ;控制溶氧为 2 0 %~30 %和溶氧自然变化 (转速分别为 2 5 0和 15 0r min)的条件下 ,包涵体得率有较大差异 ,干重分别为 0 0 5、0 71和1 2 4g L。在较优化的发酵条件下 ,目的融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 4 5 %~ 5 0 %。 展开更多
关键词 杀菌肽-X 发酵 溶氧 包涵体
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抗菌肽-X基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:5
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作者 沈益 邱英华 +3 位作者 劳学刚 张洪祖 董雪吟 徐贤秀 《生物技术通讯》 CAS 2003年第4期278-281,共4页
用PCR技术获得抗菌肽-X基因、TNFα基因,与温度诱导的表达载体pRC连接成为重组表达载体,导入大肠杆菌TG1,通过温度诱导表达重组蛋白。将重组质粒转入不同的表达菌中进行表达,经SDS-PAGE选出E.coliBL21(DE3)为最佳表达的宿主菌。培养后,... 用PCR技术获得抗菌肽-X基因、TNFα基因,与温度诱导的表达载体pRC连接成为重组表达载体,导入大肠杆菌TG1,通过温度诱导表达重组蛋白。将重组质粒转入不同的表达菌中进行表达,经SDS-PAGE选出E.coliBL21(DE3)为最佳表达的宿主菌。培养后,离心得菌体,经超声破碎离心得包涵体,溶解后用CNBr切割并透析,最后经CM52纤维素柱分离纯化得到有活性高纯度的抗菌肽-X。 展开更多
关键词 抗菌肽—X基因 克隆 大肠杆菌 表达
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