雪松松针中莽草酸的纯化方法研究

为建立莽草酸的纯化方法,以莽草酸的含量为指标,对雪松松针水提液的醇沉、大孔吸附树脂单用或与不同柱层析合用的纯化方法进行了探索。最终确定的莽草酸的纯化工艺流程为:提取-醇沉-柱层析-重结晶,其中醇沉法可以将莽草酸的含量由12.69%提升到20.08%,大孔吸附树脂柱层析法单用可以将莽草酸的含量由20.08%提升到35.73%,回收率均超过95%;大孔吸附树脂柱结合硅胶柱层析法可得到纯度为80.05%的莽草酸近白色固体,回收率达60.04%,再经二氯甲烷和甲醇重结晶得到纯度为96.54%的莽草酸白色粉末,表明该纯化方法简单可行,重复性好,易于实施工业化生产。

UPLC-QQQ MS/MS法同时测定松针中的14个成分

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-QQQ MS/MS)同时测定不同品种和产地的松针中14个成分的含量测定方法。方法:运用UPLC-QQQ MS/MS技术,采用Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,柱温35℃,以0.1%的甲酸-乙腈溶液(A)和0.1%的甲酸-水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1);电喷雾离子源,多反应监测模式。各成分的监测离子对分别为m/z 125.0/79.1(没食子酸)、m/z 105.1/77.2(对羟基苯甲醇)、m/z 109.1/91.1(原儿茶酸)、m/z 93.1/65.2(对羟基苯甲酸)、m/z 190.9/85.2(绿原酸)、m/z 151.8/108.2(香草酸)、m/z 135.1/89.2(咖啡酸)、m/z 167.0/122.9(丁香酸)、m/z 119.2/93.2(对香豆酸)、m/z 208.1/193.0(芥子酸)、m/z 82.0/77.2(苯甲酸)、m/z 91.3/65.3(苯乙酸)、m/z 93.1/65.2(水杨酸)、m/z 103.2/77.2(肉桂酸)。结果:所测定的12份松针样品中各成分含量范围分别为没食子酸0.34~3.42 mg·g^(-1)、对羟基苯甲醇1.32~9.76 mg·g^(-1)、原儿茶酸0~6.32 mg·g^(-1)、对羟基苯甲酸0~19.06 mg·g^(-1)、绿原酸0~18.78 mg·g^(-1)、香草酸0.16~3.81 mg·g^(-1)、咖啡酸0~6.68 mg·g^(-1)、丁香酸0.09~4.64 mg·g^(-1)、对香豆酸0.10~9.90 mg·g^(-1)、芥子酸0.98~19.01 mg·g^(-1)、苯甲酸1.28~18.21 mg·g^(-1)、苯乙酸0.95~20.72 mg·g^(-1)、水杨酸0~3.25 mg·g^(-1)、肉桂酸0~0.27 mg·g^(-1),各成分在测试范围内线性关系良好,平均加样回收率均在98.0%~101.7%,14个成分定量限介于0.01~0.4 ng。结论:本方法适用于常见松针中酚酸类成分的含量测定,其中对羟基苯甲醇、绿原酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸、芥子酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸9个成分为首次在松针中发现和测定,可为松针中多种酚酸类成分含量测定提供参考。

雪松松针中莽草酸的分离及其纯度检查

目的从雪松松针中提取分离莽草酸并进行纯度检查。方法采用水提、萃取、柱层析、重结晶等步骤分离纯化莽草酸,用NMR和理化性质鉴定其结构,再采用TLC和HPLC对其纯度进行检查。结果分离得到的莽草酸纯度达95%以上,得率为0.72%。结论该法简便经济、合理可行,可用于雪松松针中莽草酸的提取分离。

雪松不同部位中莽草酸的含量分析

目的：测定雪松不同部位的莽草酸含量,为进一步开发利用雪松提供参考。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为0.1%磷酸水溶液-甲醇（95∶5,V/V）,流速为1.0 ml/min,检测波长为217 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。结果：莽草酸的质量浓度在1～50μg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 8）;精密度试验的RSD〈2%,重复性、稳定性试验的RSD〈3%;平均加样回收率为99.2%,RSD=2.08%（n=9）。雪松不同部位中莽草酸的含量依次为松针〉嫩枝〉花序〉老枝〉老枝的树皮〉老技的木质部,其中以雪松松针最高,达3.22%。结论：雪松的松针和嫩枝所含的莽草酸较高,具有较高的开发价值。

正交试验优选雪松松针中莽草酸的提取工艺

目的优选雪松松针中莽草酸的最佳提取工艺。方法采用L9(34)正交试验设计,以莽草酸的含量为指标,以液料比、浸泡时间、提取时间为因素,优化雪松松针中莽草酸的提取工艺。结果最佳提取工艺为加20倍量的水,浸泡0.5 h,加热回流2 h。在最佳工艺条件下,提取的莽草酸含量为3.58%。结论优选得到的提取工艺简单、稳定、可行。

HPLC同时测定雪松松针中没食子酸、原儿茶酸和儿茶素的含量

目的建立同时测定雪松松针中没食子酸、原儿茶酸和儿茶素含量的高效液相色谱法。方法采用TC-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0~8 min,10%A,8~45 min,10%→30%A）,流速：1.0 mL·min-1,检测波长：280 nm,柱温：25℃。结果雪松松针中没食子酸、原儿茶酸和儿茶素依次在0.4~4.0,4~40和2~20μg·mL-1内呈良好线性关系,相关系数r分别为0.999 8,0.999 9,0.999 9,加样回收率（n=9）分别为104.7%,99.5%和105.8%。结论该方法适用于雪松松针中没食子酸、原儿茶酸和儿茶素的含量测定,方法简单、快速、高效。

大孔吸附树脂同时纯化雪松松针中的莽草酸和总黄酮

目的优选大孔吸附树脂同时纯化雪松松针中莽草酸和总黄酮的最佳工艺。方法以雪松松针中莽草酸和总黄酮的质量分数为评价指标,考察了6种树脂的纯化效果;以上样质量浓度、上样体积流量、上样量、水洗脱用量、乙醇质量浓度和乙醇洗脱用量考察了最佳树脂的纯化能力;在单因素实验的基础上,采用正交试验法,通过综合评分优选最佳的纯化工艺。结果 XAD 7HP树脂对雪松松针中莽草酸和总黄酮的纯化效果最佳,水洗脱部分为莽草酸,乙醇洗脱部分为总黄酮,其最佳的纯化工艺为上样液中莽草酸的质量浓度11.59 mg/m L和总黄酮的质量浓度6.96 mg/m L、上样体积流量8 BV/h、上样量2.0 m L/g;水洗脱用量为上样液加4 BV的水洗液、70%的乙醇洗脱4 BV。纯化后莽草酸的质量分数由19.25%提升到28.98%,总黄酮的质量分数由11.92%提升到54.45%。结论优选的纯化工艺稳定、可行,为工业化生产雪松松针中莽草酸和总黄酮提供参考。

HPLC法同时测定雪松不同部位5种酚酸类成分的含量

目的:建立同时测定雪松中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、咖啡酸和阿魏酸的含量测定方法,并用于雪松不同部位(松针、花序、嫩枝、木质部、树皮)该5种酚酸类成分的测定。方法:采用Eclipse Plus-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~6 min,7%A;6~70 min,7%A→20%A;70~80 min,20%A),流速1.0 m L·min^(-1),检测波长:280 nm,柱温:25℃。结果:没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、咖啡酸和阿魏酸质量浓度分别在0.06~2.4、0.3~7.2、1.3~31.2、0.6~14.4和0.5~12μg·m L^(-1)范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999 6~0.999 9;平均加样回收率(n=6)分别为93.4%、102.2%、100.3%、99.6%和98.6%;精密度、重复性和稳定性良好,RSD均小于3%。雪松各部位中5种酚酸类化合物的含量存在明显差异,嫩枝中没食子酸、儿茶素和阿魏酸的含量最高,分别为0.134、2.345和0.838 mg·g^(-1),松针中原儿茶酸的含量最高为0.479 mg·g^(-1),木质中咖啡酸的含量最高1.113 mg·g^(-1),5种酚酸之和由高至低依次为嫩枝、木质、树皮、松针、花序。结论:经方法学验证,本法可用于雪松不同部位中5种酚酸类成分的含量测定。

雪松松针HPLC特征图谱及6个成分的含量测定

目的:利用高效液相色谱法建立雪松松针的特征图谱,同时测定其原儿茶酸、原儿茶醛、二氢杨梅素、咖啡酸、阿魏酸、芦丁6个成分的含量。方法:采用CAPCELL PAK-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),检测波长300 nm,柱温30℃;应用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012.130723版本)对14批雪松松针进行相似度分析,同时对其6个成分的含量进行测定。结果:14批雪松松针样品的色谱图与特征图谱的相似度介于0.932~0.992之间,标定共有峰22个,并对其6个共有峰进行归属。14批样品中原儿茶酸、原儿茶醛、二氢杨梅素、咖啡酸、阿魏酸、芦丁6个成分的含量范围分别为34.312~1216.750μg·g^(-1)、5.246~12.533μg·g^(-1)、43.912~132.047μg·g^(-1)、50.791~145.021μg·g^(-1)、13.543~70.379μg·g^(-1)、82.763~243.758μg·g^(-1),结论:所建立的HPLC特征图谱结合6个化学成分的含量测定,能较全面反映雪松松针内在化学成分质量,简便可行、快速准确,可为其质量控制提供参考。

雪松松针正丁醇部位化学成分的研究

目的对雪松Cedrus deodara松针正丁醇部位的化学成分进行研究。方法利用硅胶柱及Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离、纯化,并根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果从雪松松针正丁醇部位分离得到10个化合物,分别鉴定为1-(4′-羟基-3′-甲氧基苯基)-2-[4″-(3-丙醇基)-2″-甲氧基苯基]-1,3-丙二醇(1)、(7S,8R)-9,9′-二羟基-3,3′-二甲氧基-7,8-二氢苯并呋喃-1′-丙醇基新木脂素-4-O-β-D-葡糖苷(2)、(7R,8R)-3′,9,9′-三羟基-3-甲氧基-7,8-二氢苯并呋喃-1′-丙醇基新木脂素-4-O-α-L-鼠李糖苷(3)、(6R,9R)-6-羟基3-oxo-α-ionol-9-O-β-D-glucopyranoside(4)、(6R,9R)-3-oxo-α-ionol-9-O-β-D-glucopyranoside(5)、莽草酸正丁酯(6)、奎宁酸正丁酯(7)、(6S,9R)-6-hydroxy-3-oxo-α-ionol-9-O-β-D-glucopyranoside(8)、5-p-trans-coumaroylguinic acid(9)、(E)-1-O-对香豆酰基-α-D-吡喃葡萄糖苷(10)。结论化合物1～7为首次从该属植物中分离得到。