南蛇藤提取物增强抑癌基因Maspin抑制人胃癌细胞株MGC803侵袭能力的研究

目的:构建高表达抑癌基因Maspin的人胃癌MGC803细胞,研究不同浓度的南蛇藤提取物能否增强Maspin抑制胃癌细胞的侵袭能力。方法:克隆重组GV208-Maspin-EGFP慢病毒表达载体,感染人胃癌MGC803细胞。加入不同浓度的南蛇藤提取物(10、20、40μg·m L-1),Transwell小室法检测药物对高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞侵袭能力的影响。结果:成功构建高表达Maspin的人胃癌MGC803细胞模型。各药物组Transwell小室下方穿膜细胞的数目减少,呈现一定的药物浓度依赖性。结论:南蛇藤提取物可增强抑癌基因Maspin抑制人胃癌细胞株MGC803侵袭的能力。

南蛇藤提取物靶向maspin抑制胃癌转移机制

利用过表达maspin的人胃癌MGC803细胞,加入不同浓度的南蛇藤提取物(20、40、80、160μg·mL^(-1))作用24 h后,Western blotting法分析南蛇藤提取物增强抑癌基因maspin的抑制胃癌转移的作用及分子机制。结果表明:与对照组相比,Akt、p-Akt、ERK、P38蛋白的表达水平显著降低,且呈现一定的剂量依赖性。说明南蛇藤提取物能够增强抑癌基因maspin的抑制胃癌转移的作用,其分子机制可能与PI3K/Akt和MAPK信号转导通路相关。

南蛇藤提取物联合miR-451抑制胃癌细胞侵袭和迁移的机制研究

为探讨南蛇藤提取物联合miR-451抑制人胃癌AGS细胞侵袭和迁移的作用机制,用慢病毒转染技术构建稳定过表达miR-451的人胃癌AGS细胞,记作AGS/miR-451^(+)细胞。MTT试验检测不同浓度南蛇藤提取物(20、40、80、160或320μg·mL^(-1))对AGS/miR-451^(+)细胞增殖的影响。伤口愈合试验和Transwell试验观察南蛇藤提取物对细胞迁移的影响。qRT-PCR试验检测南蛇藤提取物处理后细胞内mTOR mRNA表达量的变化。Western blot试验分析南蛇藤提取物对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路相关蛋白质表达的影响。结果表明:南蛇藤提取物处理24 h后明显抑制AGS/miR-451^(+)细胞的侵袭和迁移能力。细胞中E-Cadherin表达量增加,Vimentin和N-cadherin表达量降低。mTOR通路相关蛋白质,如mTOR、PI3K、AKT、4EBP1的总蛋白质表达水平和磷酸化蛋白质表达水平均显著降低。综上,南蛇藤提取物协同miR-451可抑制AGS/miR-451^(+)细胞的增殖、侵袭和迁移,其分子机制与PI3K/AKT/mTOR信号转导通路相关。

南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的:利用高表达抑癌基因maspin的人胃癌MGC-803细胞探讨南蛇藤提取物对其凋亡的影响。方法:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,不同质量浓度20,40,80,160,320 mg·L-1南蛇藤提取物作用于MGC-803细胞24,48 h后,MTT法检测南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞增殖的影响;以不同质量浓度COE组(0,20,40,80 mg·L-1)及32 mg·L-1的5-FU阳性对照处理24 h后,TUNEL法检测南蛇藤提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测对maspin,Bcl-2,Bcl-2L12及Bax蛋白表达的影响。结果:南蛇藤提取物(20,40,80,160,320 mg·L-1)能明显抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,呈现时间及浓度依赖性;与空白组比较,不同质量浓度的南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)作用24 h后,镜下显示,随着药物浓度升高,细胞数目减少,形态变圆,胞浆浓缩,出现凋亡小体,TUNEL结果表明南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)能促进细胞凋亡,Western blot结果显示南蛇藤提取物(20,40,80,160 mg·L-1)可呈浓度依赖性地增加抑癌基因maspin蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-2L12的表达,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论:南蛇藤提取物能够抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物促进抑癌基因maspin的表达以及抑制Bcl-2,Bcl-2L12的表达有关。

南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P<0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。

南蛇藤提取物靶向mTOR抑制人肝癌HepG2细胞侵袭与转移能力的研究

目的探索南蛇藤提取物(COE)靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、侵袭与转移的分子机制。方法用si RNA技术,构建敲除m TOR基因的Hep G2细胞模型,MTT法检测COE对Hep G2/m TOR-细胞增殖能力的影响。划痕实验及Transwell实验检测药物对细胞侵袭转移能力的影响。Western blotting法分析用药后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平变化。结果成功构建敲除m TOR表达的Hep G2/m TOR-细胞。COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。划痕实验结果显示COE降低了细胞迁移能力。Transwell实验结果表明,COE(80 mg/L)明显减少了穿膜细胞数目(P<0.05)。Western blotting结果显示,COE(80 mg/L)明显降低MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 COE明显抑制Hep G2/m TOR-细胞的增殖与侵袭转移,m TOR通路可能是其抑制肝癌的潜在作用靶点之一。

南蛇藤提取物对ERK/MAPK通路介导的人胃癌MKN45细胞侵袭转移的研究

目的:探索南蛇藤乙酸乙酯提取物(celastrus orbiculatus extract,COE)对人胃癌MKN45细胞增殖、侵袭与转移的影响及其可能的分子机制。方法:采用MTT法检测COE对人胃癌MKN45细胞生长增殖的影响;细胞划痕实验及体外侵袭实验检测COE对MKN45细胞侵袭和转移能力的影响;Western Blot法检测经COE作用后的MKN45细胞中金属基质蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)家族蛋白MMP2、MMP9、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白及ERK/MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果:COE可明显抑制MKN45细胞增殖;划痕实验显示COE可降低细胞迁移运动能力;体外侵袭实验显示,经不同浓度(20 mg·L^(-1)、40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1))COE处理过的MKN45细胞透膜数目显著下降;Western Blot结果显示,经不同浓度的COE处理后,细胞中MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimention、Ras、Raf、MEK、MEK1/2蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调,且呈浓度依赖性。结论:南蛇藤提取物明显抑制人胃癌MKN45细胞的侵袭与转移,其作用机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平,抑制ERK/MAPK信号通路有关。

南蛇藤及其有效成分抗胃癌作用机制的研究进展

随着中医药抗肿瘤研究的深入,越来越多的中药被发现并证实具有很好的抗肿瘤效果。其中南蛇藤及其有效成分抗肿瘤的研究已近20年,许多研究已经证实南蛇藤及其有效成分具有很好的抗胃癌活性。已经被分离和证实具有抗肿瘤活性的成分包括萜类化合物、脂肪类化合物和苷类化合物等,其中萜类化合物的抗肿瘤活性最强。南蛇藤及其有效成分抗胃癌的主要作用为抑制胃癌细胞的增殖、诱导胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞侵袭转移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)、抑制胃癌血管生成和逆转胃癌多药耐药等。这些研究结果对深入挖掘南蛇藤抗胃癌活性成分和分子机制具有非常重要意义。从南蛇藤抗胃癌的有效成分及其南蛇藤抗胃癌的作用机制研究2个方面对南蛇藤抗胃癌的相关研究进行综述,为今后南蛇藤的进一步开发和利用提供参考。

南蛇藤提取物通过抑制PI3K/AKT信号通路对胃癌细胞转移和侵袭的影响

目的:探究南蛇藤提取物通过抑制磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对胃癌细胞转移和侵袭的影响。方法:取对数生长期的人胃癌细胞系AGS细胞,设为对照组(vector)、阳性药物组(cisplatin)、低剂量组(low)、中剂量组(medium)和高剂量组(high),vector组以培养液培养,cisplatin组以顺铂处理,low、medium和high组以不同剂量(10、50、100μg/mL)的南蛇藤提取物处理,分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡水平,并检测细胞内上皮间充质转化标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)和PI3K/AKT信号通路的蛋白表达。结果:与vector组相比,cisplatin、low、medium和high组细胞增殖率均显著降低,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。与vector组相比,cisplatin、low、medium和high组细胞迁移和侵袭能力均被显著抑制,且随着南蛇藤提取物剂量的增加,迁移、侵袭抑制效果更明显(P<0.05)。与vector组相比,cisplatin、low、medium和high组细胞凋亡率均增加,且随着南蛇藤提取物剂量的增加,细胞凋亡率随之上升(P<0.05)。与vector组相比,cisplatin、low、medium和high组E-cadherin的表达显著上调,N-cadherin和Vimentin的表达显著下调,且呈剂量依赖性。与vector组相比,cisplatin、low、medium和high组PI3K、AKT的蛋白表达被显著下调,且随着南蛇藤提取物剂量的增加,下调幅度更大。结论:南蛇藤提取物通过抑制PI3K/AKT信号通路的活化,抑制胃癌细胞体外增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化,诱导细胞凋亡,发挥显著的抗肿瘤效应。