雷公藤左旋咪唑混悬液对表皮内Langerhans'cells的影响

目的探讨雷公藤左旋咪唑混悬液对皮肤表皮内Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ＇ｃｅｌ（ＬＣ）的影响。方法室温下经雷公藤左旋咪唑混悬液浸泡人和大鼠皮片３ｈ，采用ＡＴＰ酶法显示表皮片中的ＬＣ。结果显微镜下见：ＬＣ数量减少，胞体浓缩或崩溃变形，树突状结构明显减少。ＬＣ数减少与生理盐水对照有显著性差异。结论雷公藤左旋咪唑混悬液体外浸泡皮片对表皮内ＬＣ的数量和结构均有影响，从而使ＬＣ功能受抑，同种异体皮肤移植排斥延迟。

三种叶下珠属植物在体外细胞培养中抗HBV作用的初步研究

对３种叶下珠属植物的水提物在２２１５细胞培养中抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用进行了初步观察。结果显示：３种药物在６．２５ｇ／Ｌ加药后第５天，苦味叶下珠对２２１５细胞ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ分泌的抑制率分别为５７．７９％和５５．００％，黄珠子草为６４．６２％和６１．５１％，新发现的珠子草延益亚种为４４．３２％和２．９８％。提示苦味叶下珠和黄珠子草在体外细胞培养第５天中对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的分泌均有较好的抑制作用。

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用。方法:选用5μmol/L或10μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用。结果:5μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%。Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC50)的浓度约为2μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后IC50约0.2μmol/L,5μmol/L木犀草素与0.1μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC50>30μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后IC50约3μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC50>100μmol/L,对A549细胞的IC50约为100μmol/L,与5μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC50约为1μmol/L,与10μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC50约为10μmol/L。木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小。结论:木犀草素在低于10μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小。低浓度(5μmol/L^10μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著。

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的 :探讨L 精氨酸 (L arginine ,L Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 :将 17只Wistar大鼠随机分为对照组 (n =7)、低氧组 (n =5 )和低氧 +L Arg组 (n =5 )。对大鼠肺血管进行显微形态学观测。通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法 (TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡 ,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达。结果 :低氧 2周后出现大鼠肺血管结构重建。同时 ,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,平滑肌细胞Fas表达明显降低。然而 ,L Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成。低氧 +L Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组 (P均 <0 .0 5 )。L Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强。 结论 :L Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调 ,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡 。

糖萜素对小鼠NK细胞活性影响的研究

目的 :探讨糖萜素对机体 NK细胞活性的影响。方法 :1体外试验 ,不同浓度糖萜素体外直接作用小鼠脾细胞和 YAC-1细胞 ,用 MTT法测定细胞生长代谢和 NK细胞活性 ;2体内试验 ,以糖萜素饲料和普通饲料分别喂养正常和免疫抑制 (环磷酰胺抑制 )小鼠 ,在不同时间段检测 NK细胞活性。结果 :1体外 <5μg/ ml的糖萜素浓度 ,对小鼠脾细胞生长和 NK细胞活性无明显影响 ( P>0 .0 5) ;2以糖萜素饲料喂养的正常小鼠和免疫抑制小鼠 ,各时间段 NK细胞活性明显高于喂养普通饲料的对照小鼠 ( P<0 .0 5)。结论 :口服糖萜素能明显增强小鼠 NK细胞活性 ,且使其稳定维持在高水平。

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。

褪黑素对结肠黏膜上皮细胞氧化应激的影响

目的 探讨褪黑素对大鼠结肠黏膜上皮细胞氧化应激的影响。方法 在分离培养正常大鼠结肠黏膜上皮细胞基础上 ,利用FeSO4+H2 O2 产生·OH攻击制备结肠黏膜细胞氧化损伤模型 ,同时预先加入褪黑素并观察损伤减轻程度。实验设正常对照组、模型对照组、5 氨基水杨酸给药组(0 1mmol/L) ,褪黑素给药组 (0 0 1、0 1、1 0mmol/L)。培养一定时间后 ,取上清测乳酸脱氢酶 (LDH )、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHPx)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)和黏液含量。结果 模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞MDA、LDH和NO水平增高 ,CAT、GSHPX、SOD和黏液含量减少。不同剂量褪黑素呈剂量依赖性的减少LDH释放 ,抑制MDA和NO的形成 ,恢复黏液、CAT、GSHPX及SOD水平。结论 褪黑素对大鼠结肠黏膜氧化损伤具有保护作用。

三氧化二砷对肝癌细胞系HLE的影响

目的 观察不同浓度的三氧化二砷 (AT)在不同时间对肝癌细胞的影响 ,并探讨其作用机制。方法 应用不同浓度的AT作用后观察肝癌细胞HLE的存活、形态学改变及细胞凋亡的情况。结果 不同浓度的AT作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性 ,发生作用后细胞生长有明显的凋亡特征性改变 :细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;琼脂糖凝胶电泳显示肝癌细胞存在G2 /M期阻滞 ,在G1峰前出现明显的凋亡峰 ;且出现明显的凋亡特征性梯状条带。结论 AT可明显抑制肝癌细胞的生长 ,其机制主要是诱导肝癌细胞凋亡。

针灸对肿瘤患者化疗后血细胞和消化道反应的影响

目的 :对比针灸与药物对肿瘤患者化疗后血细胞和消化道反应的作用。方法 :将 10 2例化疗患者按 2∶1随机分为针刺治疗组 (穴取内关、中脘、足三里等 )和服药对照组 (口服VitB6 、吗丁啉等 )进行研究。结果 :治疗组和对照组均可升高化疗患者的血细胞水平 ,但治疗组作用明显好于对照组 (P <0 0 5 ) ;在改善化疗后主要症状和体征方面 ,治疗组总有效率为 82 3% ,对照组为 6 7 6 %(P <0 0 5 )。结论 :针灸可拮抗化疗药的副作用 ,对化疗机体具有良好的保护作用。其作用与取穴、刺激量、治疗方法及治疗时机密切相关。

三萜类化合物对化学损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究三萜类化合物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法:两步灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,评价积雪草酸(asiaticacid,AA)和β-甘草次酸(β-glycyrrhetinicacid,GA)对D-GalN和CCl4损伤原代培养肝细胞的保护作用。光镜评价细胞生长形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞上清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);并以荧光分光光度法测定细胞中活性氧(ROS),细胞上清活性氮终产物(NOx)和细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;用JC-1法测定细胞线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:AA和GA均可显著抑制D-GalN所致的AST和LDH升高(P<0.05),AA尚能提高细胞存活率(P<0.05);AA和GA也能显著抑制CCl4所致的LDH释放(P<0.05)。AA和GA均显著减少两种化学损伤细胞ROS生成和NOx释放,明显改善D-GalN所致细胞线粒体ΔΨm的降低;AA尚显著抑制两种化学损伤细胞内GSH降低。结论:三萜类化合物对D-GalN和CCl4致原代培养大鼠肝细胞损伤有保护作用,其机制与抑制细胞ROS、NOx生成和GSH降低相关,对D-GalN损伤尚有改善线粒体膜电位作用。

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8+8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。

雷帕霉素协同去甲氧柔红霉素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用

目的:探讨去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞株的效应及机制。方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P70S6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达。结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50)值。Isobologram法示两药联合指数小于1。免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活。IDA联用Rapa后能使mTOR信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平。结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应。其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关。

金属硫蛋白——心血管细胞保护剂

金属硫蛋白 (MT)是一类富含半胱氨酸的小分子非酶蛋白 ,在生物界中广泛存在 ,具有重金属解毒、清除氧自由基、稳定生物膜等多种生物学功能。其合成可被多种因素诱导 ,在炎症、感染、休克、组织损伤等病理状态下表达增加。近年来对MT转基因动物的研究发现 ,MT是一种强的内源性细胞保护物质 ,在心血管系统抗损伤保护中发挥着重要的作用。

不同抗癌药物对乳癌MCF-7细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的 研究乳癌细胞MCF 7在不同抗癌药物存在的情况下端粒酶活性的变化规律。方法 运用细胞记数、台盼蓝染色和MTT法测定细胞增殖能力及其活性 ,同时用TRAP法测定细胞端粒酶活性。观察细胞在不同情况下端粒酶活性变化及其影响因素。结果 在无药物存在时 ,细胞增殖与端粒酶活性增加呈正相关 (r=0 .90 1)。阿霉素、紫杉醇和顺铂都能有效抑制细胞生长 ,以剂量依赖方式和时间依赖方式降低端粒酶活性 ,这种降低与活性细胞减少密切相关。结论 阿霉素、紫杉醇和顺铂抑制MCF 7细胞生长 ,其机制可能与降低端粒酶活性及细胞活性有关。

淫羊藿素抗Aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡作用

目的:探索淫羊藿素(icaritin,ICT)对Aβ25-35肽致大鼠原代培养神经细胞的损伤保护作用及潜在机制。方法:制备d17胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,支持培养7d后,与ICT预孵育24h并加入Aβ25-35肽,作用72h后以细胞形态、MTT值、培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平作为细胞的损伤指标;并以线粒体膜电位(ΔΨm)改变作为凋亡早期指标,AO/EB染色差异作为凋亡后期指标。结果:0.1μmol·L-1ICT预孵育24h能显著改善10μmol·L-1Aβ25-35肽所致的原代培养神经细胞的损伤,MTT、LDH及形态学结果显示:ICT能提高Aβ25-35肽损伤神经细胞的存活率,JC-1染色结果显示:ICT能防止Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体ΔΨm下降,AO/EB染色结果显示:ICT能够改善神经细胞凋亡。结论:ICT经抗凋亡机制对Aβ25-35肽损伤大鼠原代培养神经细胞发挥保护作用。该作用与ICT干预Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体膜电位下降和核损伤有关。

台湾细叶油柑体内外抗乙肝病毒作用研究

为研究叶下珠属植物台湾细叶油柑体内外抗乙肝病毒的作用 ,应用 2 115细胞株及雏鸭乙型肝炎模型 ,对台湾细叶油柑水提取物和醇提取物进行了体内外抗乙肝活性实验。结果 :台湾细叶油柑水提取物和醇提取物对HBsAg分泌均有一定抑制作用 ,但其醇提物对HBeAg的分泌无抑制作用。在体内抗鸭乙肝病毒实验中 ,台湾细叶油柑水提物 10g·kg- 1·d- 1和 5g·kg- 1·d- 1剂量组于给药 5d、给药 10d和停药 3d时有显著体内抑制DHBV -DNA作用 ,而其醇提物则无抑制DHBV -DNA作用。

丁胺卡那霉素诱发豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡的实验研究

目的 探讨氨基糖苷类抗生素作用于耳蜗时外毛细胞凋亡现象及其凋亡发生特点。方法 用一定剂量的丁胺卡那霉素对 15只豚鼠行耳蜗造模后利用光镜、TUNEL标记技术 (teminal-deoxynucleotidytransferasemediatedd -UTPnick -endlabeling)原位检测凋亡发生。结果 肌注丁胺卡那霉素 1d后即可诱发豚鼠耳蜗底转外毛细胞发生凋亡 ,随着用药时间延长 ,其余各转外毛细胞亦发生凋亡 ,甚至出现部分外毛细胞丢失现象。结论 氨基糖苷类抗生素作用于耳蜗系统时可引起外毛细胞凋亡 ,细胞凋亡是豚鼠耳蜗听毛细胞损伤的一条途径 ;

一氧化氮抑制单核-内皮细胞粘附的机制

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）抑制单核内皮细胞粘附的机制。方法：以硝普钠作为ＮＯ的供体，用细胞粘附实验、流式细胞仪荧光强度测定、细胞ＥＬＩＳＡ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等方法分别从细胞、蛋白表达、基因表达方面研究ＮＯ对内皮细胞粘附分子（ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＶＣＡＭ１）表达的影响。结果：ＮＯ抑制ＩＬ１α诱导的单核内皮细胞粘附，抑制ＩＬ１α诱发的ＶＣＡＭ１的表达并呈时间依赖性及浓度依赖性，ＮＯ在粘附分子ＶＣＡＭ１的基因表达水平上亦呈现抑制作用。结论：ＮＯ抑制ＶＣＡＭ１的表达是其抑制单核内皮细胞粘附及抗动脉粥样硬化的机制之一。

槐耳清膏治疗肝癌的实验研究

目的 探讨槐耳清膏对人胎脐静脉内皮细胞的作用 ,以及其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌的抑制作用及其可能机制。方法 用不同浓度的槐耳清膏作用于人胎脐静脉血管内皮细胞 ,观察其对细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成的影响 ,同时观察其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌过程的影响。结果 槐耳清膏≥ 2mg/ml时可显著降低肿瘤组织的血管内皮细胞增殖能力 ,减少血管形成 ,抑制血管内皮细胞的迁移、黏附 ,从而降低微血管密度。槐耳清膏 ( 3g/kg) +MMC( 5 0 0 μg/kg)同时作用于裸鼠的肝癌组织 ,其抑瘤作用最强 ,后依次为MMC组 ,槐耳清膏 ( 3g/kg)组。结论 槐耳清膏对肝癌有抑制作用 ,其可能机制是作用于血管内皮细胞 ,影响血管内皮细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成 ,从而抑制肝癌组织的血管生成 。

VEGF在HaCaT细胞中的自分泌作用

目的:检测VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞中可能的自分泌作用。方法:用MTT法,检测不同浓度外源性VEGF165(0,1,5,10,25,50,100 ng/ml)和不同浓度VEGF特异性抑制剂阿瓦斯丁(0,0.063,0.125,0.25,0.50,1.0,2.0 mg/ml)作用下HaCaT细胞增殖的变化;用细胞迁移实验,检测不同浓度VEGF165和0.5 mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞迁移的变化;蛋白免疫印迹检测10 ng/ml VEGF165和0.5mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化情况。结果:VEGF165剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖和迁移能力;而阿瓦斯丁剂量依赖性地抑制其增殖能力,0.50 mg/ml阿瓦斯丁可以显著性降低其迁移能力;10 ng/ml VEGF165显著性促进HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化,而对0.5 mg/ml阿瓦斯丁预处理过的HaCaT细胞的ERK1/2磷酸化没有促进作用。结论:VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT中存在着自分泌作用。