苦瓜皂苷L调控PI3K/AKT通路促进内皮祖细胞增殖能力和内皮功能的实验研究

目的:探讨苦瓜皂苷L对内皮祖细胞(EPC)增殖能力和内皮功能的作用及机制。方法:体外分离、培养、鉴定外周血EPC。使用不同浓度苦瓜皂苷L处理EPC 24 h后,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞活力。使用AutoDock Tools 5.6软件,分别以磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)为受体,以药物分子苦瓜皂苷L为配体采用盲对接法进行分子对接。使用PI3K/AKT抑制剂LY294002和最佳使用浓度的苦瓜皂苷L单独或同时处理EPC 24 h后检测各组细胞活力和磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)表达水平。结果:与对照组比较,苦瓜皂苷L呈剂量依赖性地促进EPC增殖,且40μmol/L的苦瓜皂苷L是最佳药物浓度。与对照组比较,LY294002可下调EPC细胞活力,苦瓜皂苷L可上调细胞活力。与苦瓜皂苷L组比较,共同使用苦瓜皂苷L和LY294002可降低细胞活力。分子对接结果显示,苦瓜皂苷L与PI3K和AKT均存在直接作用,形成稳定的锁钥结构。与对照组比较,LY294002可显著下调p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平;苦瓜皂苷L可上调p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平。与苦瓜皂苷L组比较,使用苦瓜皂苷L和LY294002可降低p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平。结论:苦瓜皂苷L通过PI3K/AKT信号通路靶向调节EPC的增殖能力,进而上调内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活化水平以促进EPC内皮功能。

EEF1A1对急性心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及Notch/AKT转导途径的影响

目的:探讨人类真核翻译延长因子(EEF1A1)对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠心肌细胞凋亡及Notch/蛋白激酶B(AKT)转导途径的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,模型组、干预组于冠状动脉左前降支结扎建立AMI大鼠模型,对照组仅手术穿线处理不结扎。建模后24 h干预组于心肌梗死区原位注射EEF1A1腺病毒,模型组、对照组注射等量生理盐水。干预72 h后,心脏彩超测定大鼠心功能,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法评估心肌细胞凋亡,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TCC)染色法评估心肌梗死面积,采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定EEF1A1 mRNA表达量,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织EEF1A1蛋白以及Notch/AKT信号通路相关蛋白表达情况。结果:干预前,模型组、干预组左室射血分数(LVEF)明显低于假手术组(P<0.05),而左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显高于假手术组(P<0.05);干预后3 d后,干预组LVEDD、LVESD明显降低,而LVEF明显增加,模型组LVEDD、LVESD明显增加,而LVEF明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预组心肌组织EEF1A1蛋白及mRNA表达水平高于假手术组、模型组(P<0.05),而模型组心肌组织EEF1A1蛋白及mRNA表达水平高于假手术组(P<0.05)。干预组心肌梗死面积小于模型组(P<0.05)。干预组心肌细胞凋亡率明显高于假手术组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05)。干预组Notch1、Hes1、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT相关蛋白表达明显高于模型组、假手术组,模型组Notch1、Hes1、p-AKT/AKT相关蛋白表达均明显高于假手术组(P<0.05)。结论:EEF1A1可抑制AMI大鼠心肌细胞损伤、凋亡,缩小心肌梗死面积,改善心脏功能,其作用机制可能与上调Notch/AKT转导途径有关。

红景天苷对AD模型小鼠大脑线粒体功能和海马细胞增殖的影响

目的:探讨红景天苷对D-半乳糖联合亚硝酸钠注射所致AD模型小鼠大脑组织线粒体功能和海马齿状回细胞增殖的作用。方法:将45只小鼠随机分为正常组、模型组、红景天苷组,每组15只。红景天苷组、模型组小鼠每日腹腔注射亚硝酸钠(50 mg/kg)和皮下注射D-半乳糖(150 mg/kg),连续造模60 d,正常组则进行腹腔和皮下注射等体积生理盐水。造模期间,红景天苷组小鼠同时皮下注射红景天苷(40 mg/kg),正常组和模型组小鼠注射等体积生理盐水。给药结束后,检测小鼠大脑组织线粒体功能和海马齿状回神经干细胞增殖水平。采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,采用Clark-type氧电极法测定线粒体呼吸控制率(RCR),采用荧光素酶生物化学发光法检测腺苷三磷酸(ATP)含量,以BrdU标记增殖细胞并采用BrdU免疫组化技术检测海马干细胞增殖水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠大脑线粒体膜电位水平、RCR和ATP含量明显降低,BrdU阳性细胞计数明显减少,差异有显著性意义(P<0.05);与模型组比较,红景天苷组小鼠大脑线粒体膜电位水平、RCR和ATP含量明显升高,BrdU阳性细胞计数明显增加,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:红景天苷对AD模型小鼠脑组织线粒体功能具有一定程度的保护作用,能改善海马齿状回颗粒下层细胞增殖水平,提示其可能具有促进神经发生的作用。

CD4^+CD25^+调节性T细胞移植对实验性自身免疫性神经炎大鼠的保护作用

目的观察CD4+CD25+调节性T细胞对实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠周围神经传导功能及Caspase-3表达的影响。方法 18只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及移植组。采用P0多肽诱导建立自身免疫性神经炎大鼠模型。应用免疫磁珠技术分选Wistar大鼠脾脏的CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪鉴定其纯度,体外培养3d。移植组用培养的CD4+CD25+调节性T细胞干预。造模后2周检测运动神经传导速度(MCV)、感觉神经传导速度(SCV),并采用免疫组化法检测坐骨神经Capase-3的表达。结果移植组和模型组MCV和SCV低于假手术组,移植组MCV和SCV高于模型组;移植组和模型组Caspase-3表达高于假手术组,移植组Caspase-3表达低于模型组(P均<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞能改善实验性自身免疫性神经炎大鼠周围神经电传导,减少坐骨神经Caspase-3的表达,对EAN大鼠的周围神经炎性脱髓鞘损伤有保护作用。

原电池电动势测定热力学函数实验结果原因分析及其实验方法改进

现行的电池电动势法测定反应Ag/AgCl与Hg/Hg2Cl2所组成的多相反应体系的热力学函数变化值的实验,存在实验结果波动大,数据不理想等问题。通过缩小温度间隔以利于更好地分析其中的原因。同时提出我们的改进方法,发现改进后测得的热力学函数变化值△rGm(298 K),△rHm(298K),△rSm(298 K)与文献值的相对误差分别为8.1%,0.03%,9.1%,并且实验重现性较好。所得实验结果的准确性也较高。经过多轮的本科学生实验证明,实验效果较好。

祛风活血丸对EAU大鼠模型Fas／FasL表达的影响

目的探讨祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠血清Fas、FasL水平的影响。方法将70只Lewis大鼠随机分为空白组(A组),模型对照组(B组),阳性对照组(C组),以及祛风活血丸低、中、高剂量组(D、E、F组)。采用大鼠右后足垫注射含IRBP(光感受器间维生素A类结合蛋白)的PBS溶液+完全弗氏佐剂制作EAU模型,A组大鼠注射无菌生理盐水。造模后各组大鼠灌胃给药,A、B组予生理盐水,C组予熊胆开明片,D、E、F组分别予低、中、高剂量的祛风活血丸。观察大鼠眼部情况变化,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测给药后第7天、14天、21天、28天时各组大鼠的Fas、FasL血清浓度。结果 1.成功诱发Lewis大鼠的EAU模型,在免疫后不同时间发生临床可见的炎症,造模成功率91.7%(55/60),空白组大鼠无临床可见葡萄膜炎表现。2.空白组各时间点的Fas、FasL血清浓度始终位于较低水平,模型对照组各时间点的Fas、FasL水平均为最高,明显高于空白组(P<0.01),并有随时间延长逐渐下降的趋势。中、高剂量组各时间点的Fas、FasL水平较为接近,低于同期低剂量组及阳性对照组,与模型组比较下降更为明显(P<0.05)。结论Fas/FasL介导的细胞凋亡对EAU发病具有重要意义,祛风活血丸能使大鼠血清中Fas、Fas L含量明显降低。

人脐带间充质干细胞对2型糖尿病小鼠胰岛功能的影响及其对NLRP3炎性体的调节作用

目的观察人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对2型糖尿病(T2DM)小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体和自噬过程的调节作用。方法实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为正常对照组(n=5)和高脂喂养建模组(n=15);T2DM建模成功的小鼠进一步分为糖尿病组(n=7)和UC-MSCs治疗组(n=7)。UC-MSCs治疗组每周给予1次UC-MSCs(1×106/0.2 ml磷酸盐缓冲液)尾静脉输注治疗,共治疗4周;糖尿病组注射等量生理盐水,正常对照组不予处理。治疗结束后1周各组小鼠行腹腔糖耐量和胰岛素耐量试验检测糖耐量和胰岛素敏感性变化;采用免疫荧光染色法观察胰岛结构改变并检测胰岛中白细胞介素1β(IL-1β)和胰十二指肠同源框因子1(PDX-1)的表达。体外用脂多糖和三磷酸腺苷对小鼠骨髓诱导的原代巨噬细胞进行刺激(处理组)后,与UC-MSCs进行Transwell共培养实验24 h(治疗组),采用酶联免疫吸附法检测各组上清液中IL-1β的分泌水平,采用免疫荧光染色检测NLRP3炎性体和自噬相关蛋白的表达。统计学分析采用单因素方差分析及重复测量方差分析。结果体内实验表明,与糖尿病组相比,UC-MSCs治疗组小鼠胰岛结构部分修复,糖耐量和胰岛素敏感性均改善(均P<0.05),共聚焦显微镜下观察胰岛中PDX-1表达增高,IL-1β的表达水平降低。体外实验表明,相较于处理组,治疗组中巨噬细胞分泌的IL-1β水平降低[(85.9±74.6)比(883.4±446.2)pg/ml,P=0.001],共聚焦显微镜下观察NLRP3炎性体的表达降低,自噬底物蛋白P62表达降低,微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、自噬效应蛋白Beclin-1表达增高。结论UC-MSCs可降低T2DM小鼠胰岛炎症水平,保护胰岛功能,可能与UC-MSCs抑制巨噬细胞NLRP3炎性体的活性,增强自噬水平有关。

自拟心衰还阳丸对慢性心力衰竭模型大鼠心脏功能的影响

目的观察自拟心衰还阳丸对慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠心脏功能的影响。方法将90只Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组,模型组,阳性对照组,自拟心衰还阳丸高、中、低剂量组6组,每组15只。采用结扎冠状动脉法建立CHF模型,造模后第3天,各组分别灌胃生理盐水及相应药物,连续灌胃8周。分别在给药第2,8周观察各组大鼠的一般情况和体质量(BW);给药8周后处死大鼠,检测各组大鼠心率(HR)、左心室收缩末压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室最大压力上升和下降速度(±dp/dtmax)、全心质量(THW)、左心室实际质量(LVW)、心脏质量指数(HMI)及左心室质量指数(LVMI);HE染色后观察心肌细胞和间质的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠BW明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药第8周自拟心衰还阳丸高剂量组及阳性对照组BW均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与自拟心衰还阳丸低剂量组比较,给药第8周自拟心衰还阳丸高、中剂量组及阳性对照组BW均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);自拟心衰还阳丸高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显降低,HR、LVEDP、HMI及LVMI均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,自拟心衰还阳丸高、中剂量组及阳性对照组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显升高,HR、LVEDP、HMI及LVMI均明显降低,差异有统计学意义(P <0.05);与自拟心衰还阳丸低剂量组比较,自拟心衰还阳丸高、中剂量组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显升高,HR、LVEDP、HMI及LVMI均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。自拟心衰还阳丸高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞间隙正常,无水肿和空泡形成;模型组大鼠心肌细胞间隙增宽,细胞排列紊乱,间质呈纤维化趋势,间质血管扩张和充血;阳性对照组和自拟心衰还阳丸高剂量组大鼠心肌细胞水肿和空泡程度较轻,细胞排列尚整齐,可见少量炎性细胞浸润;自拟心衰还阳丸中、低剂量组大鼠心肌细胞排列紊乱,间质血管有少量充血。结论自拟心衰还阳丸可改善CHF模型大鼠心脏功能、血流动力学、心肌细胞及间质改变。