利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制,为临床化疗提供有效的依据。方法:①通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中,分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异,并筛选出高表达基因和低表达基因;使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。②利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。③利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。④利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:①两组数据集的高表达共同耐药基因共37个,低表达共同耐药基因共2个。②GO分析结果显示:生物学过程(BP)分析结果表明,耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等;细胞组成(CC)分析表明,耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面;分子功能(MF)分析表明,耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示,耐药基因主要在细胞因子与细胞因子受体相互作用的信号通路、趋化因子信号通路上发挥作用。③PPI网络及Hub基因筛选结果显示:CCR5、POSTN、LOX、DACT1、RTN1、CCR1、CXCL6、PITX2、SNCA、AREG是核心耐药基因。④Hub基因中POSTN、LOX、DACT1、RTN1、PITX2的高表达与卵巢癌的不良预后有关(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株A2780中顺铂耐药基因的异常表达,在卵巢癌化疗耐药中发挥着重要的作用,需要进一步的体外实验研究来证实其在临床化疗耐药中的作用。

HDAC抑制剂TSA增强卵巢癌细胞株A2780对腺病毒基因转染效率的体外研究

背景与目的:腺病毒感染依赖于靶细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的表达,肿瘤细胞CAR表达的缺失和下调是造成腺病毒为载体基因治疗效果不佳的根本原因。本研究通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂TrichostatinA(TSA)对卵巢癌细胞株A2780CAR表达水平的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性。方法:分别在TSA作用A2780细胞前后检测CARmRNA和蛋白水平的表达,同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(ADV/TK)的体外抗瘤效应。结果:TSA处理后,A2780细胞内CARmRNA和蛋白表达明显增高。通过流式细胞仪分析GFP/ADV转染后GFP的表达发现,未处理组细胞转染率为(1.24±0.14)%;5nmol/L和100nmol/LTSA处理48h后,细胞的转染效率分别为(7.58±0.32)%和(7.94±0.28)%。MTT结果表明,ADV/TK介导的体外杀伤作用在5nmol/L和100nmol/LTSA处理组较未处理组增强了4～10倍。结论:TSA可以增强针对卵巢癌细胞的腺病毒基因转染效率,为增强卵巢癌基因治疗效果提供可能的方法。

COX-2在上皮性卵巢肿瘤的表达及塞来昔布对卵巢癌A2780细胞株凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在上皮性卵巢肿瘤的表达及环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)在体外对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法 (1)采用免疫组化SP法检测COX-2在65例上皮性卵巢癌,18例交界性、18例良性上皮性卵巢肿瘤,以及9例正常卵巢组织中的表达。(2)用流式细胞仪测定塞来昔布在体外对A2780细胞凋亡的影响。结果 (1)COX-2在上皮性卵巢癌组(73.8%)及交界性卵巢肿瘤组的表达(66.7%)显著高于良性卵巢肿瘤组(16.7%)及正常卵巢组(11.1%),P均<0.05。(2)流式细胞仪测定结果显示,塞来昔布呈剂量依赖方式诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡(P<0.05)。结论 (1)COX-2在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达明显增强,COX-2可能在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤的发生发展中起一定作用。(2)体外特异性COX-2抑制剂塞来昔布能够诱导人卵巢癌A2780细胞株凋亡,可能成为上皮性卵巢癌化疗的有效药物。

川芎嗪对人卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的探讨川芎嗪(TMP)逆转卵巢癌A2780/ADM细胞对阿霉素(ADM)的耐药作用及机制。方法应用MTT法测定细胞的药敏性;用荧光分光光度法测定细胞内阿霉素浓度的变化;采用流式细胞术检测耐药细胞凋亡率的变化。结果非细胞毒性剂量川芎嗪能显著降低卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM的IC50,逆转倍数为2.07倍;非细胞毒性剂量川芎嗪能显著增加耐药细胞内ADM的浓度和耐药细胞的凋亡百分率,显著降低P-gp的表达。结论川芎嗪具逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制可能与增加细胞内ADM浓度和抑制该细胞P-gp的表达有关。

新藤黄酸诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用研究

目的研究新藤黄酸对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法采用MTT检测新藤黄酸对卵巢癌A2780细胞存活率的影响,采用fluo-3AM染色荧光显微镜观察新藤黄酸对A2780细胞钙离子水平的影响,采用Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的凋亡率,采用PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞周期的影响,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测新藤黄酸对细胞凋亡率的影响,采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果表明,新藤黄酸对卵巢癌细胞A2780的增殖具有抑制作用,且抑制作用具有明显的剂量依赖性;fluo-3AM染色荧光显微镜下观察,可见各浓度新藤黄酸均能升高A2780细胞内钙离子水平,且呈现浓度依赖关系;PI染色流式细胞仪检测结果表明,新藤黄酸能阻滞A2780细胞于G0/G1期;Hoechst 33342染色和AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞仪检测结果表明,随着新藤黄酸浓度的增加,A2780细胞凋亡率呈现增高的趋势;Western blot检测结果表明,新藤黄酸可以促进凋亡相关蛋白p53、细胞色素C以及Caspase-9表达水平升高。结论新藤黄酸具有抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导肿瘤细胞发生线粒体凋亡的作用。

卵巢癌细胞PCDGF的表达与意义

目的 研究人卵巢癌细胞PCDGF的表达 ,探讨其与卵巢癌恶性表型的关系。方法 应用半定量RT PCR和Westernblot分别检测 3株卵巢癌细胞中PCDGFmRNA和蛋白表达水平。单层细胞增殖实验测定 3株卵巢癌细胞的增殖能力 ;Boy den小室体外侵袭实验测定不同细胞株的侵袭能力。结果 3株卵巢癌细胞PCDGF转录和翻译水平呈同步变化 (P <0 .0 5 ) ,均为SW 6 2 6最高 ,A2 780稍低 ,Skov 3最低。而其增殖、侵袭能力亦为SW 6 2 6最强 ,A2 780次之 ,Skov 3最弱。结论 3株卵巢癌细胞PCDGFmRNA和蛋白表达水平与其增殖、侵袭能力呈正相关 (前者r1=0 .97,r2 =0 .89,后者r1=0 .85 ,r2 =0 .84 ) ,提示PCDGF在卵巢癌发生演进中可能作为独立因素起多种作用 ,有望成为治疗的新靶点。

COX-2转录抑制作用逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的研究

目的:探讨COX-2转录抑制对卵巢癌细胞MDR1/P-gP表达及紫杉醇敏感性的影响。方法:用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测抑制COX-2促进子活性对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/PTX的COX-2和MDR1 mRNA表达水平;用免疫细胞化学方法检测A2780/PTX细胞P-gP的表达;用MTT法测定紫杉醇作用A2780/PTX细胞的生长抑制作用。结果:抑制COX-2促进子明显下调A2780/PTX细胞的COX-2和MDR1 mRNA的表达(P<0.05)及其P-gP蛋白表达,以及显著增加了紫杉醇对A2780/PTX细胞的生长抑制作用。Pearson分析显示,MDR1 mRNA与COX-2 mRNA的表达存在明显的依赖关系(R=0.748,P<0.01);结论:A2780/PTX细胞存在COX-2依赖的MDR1/P-gP共表达现象;抑制或沉默COX-2转录可显著逆转COX-2介导的MDR1/P-gP依赖的MDR和增加紫杉醇的敏感性。

ATP-生物荧光法在筛选卵巢癌化疗药物中的应用

为了探讨ATP -生物荧光法在临床体外化疗药敏试验中应用的可行性 ,本文以卵巢癌细胞株A2 780为实验模型 ,建立稳定和适宜的实验条件 ,并对卵巢癌临床化疗药物体外筛选进行了初步研究。结果表明该方法稳定性好 ,能检测出不同药物浓度对细胞作用的剂量 -效应关系 ,最小检出细胞数为 4 0个 ,实验变异系数小于 8.2 % (0 .2 % - 8.2 % ) ,预测准确率高 (90 .6 % )。ATP -生物荧光法稳定性、重复性和敏感性均较好 。

基于开放数据的卵巢癌细胞铂类耐药机制分析和治疗药物选择研究

目的探索卵巢癌细胞系耐药基因表达改变及其生物学机制,为卵巢癌细胞系铂类耐药成因及治疗提供生物信息学依据。方法从基因表达数据库(GEO)下载A2780耐铂类化疗和原始细胞株相关基因芯片数据集并分组,应用R软件筛选差异表达基因,使用clusterProfiler R包对差异基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析和可视化,找出相关高度表达的基因通路。通过STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白互作网络,分析网络的hub基因。通过Cytoscape软件构建蛋白互作网络并分析生物过程。利用CMap网站,通过差异基因在细胞株内导致的药物反应区别,识别与耐药相关的药物。结果卵巢癌铂类耐药的形成在基因表达层面的关键变化基因数量较少,不同研究芯片同样高表达的基因仅有32个,低表达的基因仅有126个,细胞外基质信号通路和MAPK信号通路相关基因表达升高,外泌体分泌相关蛋白增加,胆固醇储存的正向调控过程增强,生长板软骨细胞分化,单核细胞分化等生物学过程增强,说明卵巢癌细胞耐铂类机制可以沿着上述2个机制探索。而Cycloheximide、Emetine、Cephaeline、Homoharringtonin、Verrucarin-A、Puromycin等6种药物可以在铂类耐药的生物学研究中有所侧重。结论本研究对人卵巢癌细胞铂类耐药成因及治疗进行了探索及分析,对人卵巢癌细胞铂类耐药的进一步研究提供了生物信息学理论依据。

人卵巢癌耐药细胞株的放射敏感性研究

为了研究具有耐药性的卵巢癌细胞系对放射线治疗的影响,以人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/Taxol为研究对象,以MTT法检测细胞的药物敏感性并评判分析细胞放射敏感性;克隆形成实验分析细胞放射抗拒性;实时荧光定量PCR分析照射前后细胞耐药基因MDR1的变化。实验结果显示:A2780/Taxol的耐药指数为43.96;随着放射剂量增大,A2780细胞和A2780/Taxol细胞的相对存活率明显下降,以A2780细胞明显(p<0.05);A2780细胞及其耐药A2780/Taxol细胞D0值分别为4.90和6.06,D0越大,放射抗拒性越强,表明耐药A2780/Taxol细胞的放射抗性强于A2780细胞(p<0.01);照射前及不同剂量照射作用后,耐药基因MDR1在A2780/Taxol细胞中的表达均明显高于A2780细胞(p=0.000)。这些结果揭示耐药卵巢癌细胞株A2780/Taxol对辐射具有耐受性,表明卵巢癌细胞系具有放化疗交叉耐受性,并且射线和药物诱导卵巢癌细胞耐药基因MDR1的过表达,可能是引起放化疗交叉耐受性的原因之一。

积雪草诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡机制研究

目的:观察积雪草对人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响并探讨相关机制。方法:用10μmol·L^(-1)、25μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)的积雪草处理人卵巢癌细胞A2780 24 h,用MTT法检测细胞活性;用流式细胞术检测卵巢癌细胞A2780凋亡;用qRT-PCR检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2 mRNA的表达;用western blot法检测卵巢癌细胞A2780中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)的积雪草作用于细胞后,乳腺癌细胞A2780细胞形态发生明显改变,细胞皱缩、变圆。与对照组比较,75μmol·L^(-1)积雪草对卵巢癌细胞A2780抑制效果最明显。与对照组比较,50μmol·L^(-1)、75μmol·L^(-1)积雪草能够有效升高Bcl-2 mRNA的表达,降低Bax mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。不同浓度积雪草均能有效升高Bax的表达并降低Bcl-2的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:积雪草可抑制肿瘤的生长,其作用可能是通过诱导卵巢癌细胞A2780凋亡来实现的。

尖吻蝮蛇毒对人卵巢癌A2780细胞的抑制作用研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒对人卵巢癌A2780细胞(后简称A2780细胞)形态学特征、细胞增殖活力及粘附能力的影响。【方法】采用倒置荧光显微镜观察在不同质量浓度和时间条件下,尖吻蝮蛇毒对A2780细胞形态学特征的影响;采用CCK-8法检测细胞增殖率的变化,使用细胞计数法检测尖吻蝮蛇毒对细胞粘附能力的影响。【结果】当尖吻蝮蛇毒质量浓度为3.125μg·mL-1时,A2780细胞出现少量皱缩、变圆、凋亡的现象;随着尖吻蝮蛇毒质量浓度增加,细胞凋亡的现象愈加明显。当用50μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞1h后,被处理细胞出现少量皱缩、变圆现象;12h后,被处理细胞粘连成团,出现大量凋亡现象。在3.125~200μg·mL-1范围内,随着尖吻蝮蛇毒质量浓度的增加,A2780细胞增殖活力逐渐减弱,且呈明显剂量依赖关系。当用3.125μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞时,细胞粘附率降为78.26%;当蛇毒质量浓度为25μg·mL-1时,细胞粘附率降为不足10%。【结论】尖吻蝮蛇毒可明显影响A2780细胞的形态学特征,抑制该细胞的增殖活力以及粘附能力。