三萜类化合物对化学损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究三萜类化合物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法:两步灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,评价积雪草酸(asiaticacid,AA)和β-甘草次酸(β-glycyrrhetinicacid,GA)对D-GalN和CCl4损伤原代培养肝细胞的保护作用。光镜评价细胞生长形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞上清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);并以荧光分光光度法测定细胞中活性氧(ROS),细胞上清活性氮终产物(NOx)和细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;用JC-1法测定细胞线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:AA和GA均可显著抑制D-GalN所致的AST和LDH升高(P<0.05),AA尚能提高细胞存活率(P<0.05);AA和GA也能显著抑制CCl4所致的LDH释放(P<0.05)。AA和GA均显著减少两种化学损伤细胞ROS生成和NOx释放,明显改善D-GalN所致细胞线粒体ΔΨm的降低;AA尚显著抑制两种化学损伤细胞内GSH降低。结论:三萜类化合物对D-GalN和CCl4致原代培养大鼠肝细胞损伤有保护作用,其机制与抑制细胞ROS、NOx生成和GSH降低相关,对D-GalN损伤尚有改善线粒体膜电位作用。

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8+8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。

三氧化二砷对肝癌细胞系HLE的影响

目的 观察不同浓度的三氧化二砷 (AT)在不同时间对肝癌细胞的影响 ,并探讨其作用机制。方法 应用不同浓度的AT作用后观察肝癌细胞HLE的存活、形态学改变及细胞凋亡的情况。结果 不同浓度的AT作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性 ,发生作用后细胞生长有明显的凋亡特征性改变 :细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;琼脂糖凝胶电泳显示肝癌细胞存在G2 /M期阻滞 ,在G1峰前出现明显的凋亡峰 ;且出现明显的凋亡特征性梯状条带。结论 AT可明显抑制肝癌细胞的生长 ,其机制主要是诱导肝癌细胞凋亡。

针刺血清降低大鼠培养心肌细胞内Ca^(2+)含量的研究

目的:探讨针刺作用的机理中是否存在着体液因素。方法:取新生大鼠心肌细胞进行原代培养。5天后应用荧光分子探针Fluo3AM染色。激光共焦扫描显微镜动态扫描观察,加入正常血清和电针刺“内关”“间使”的血清后,观察心肌细胞内Ca2+含量的变化。结果:加入正常血清后,细胞内的Ca2+含量会有一定程度的升高,经过一段时间后升高的Ca2+含量会趋向平稳;而再加入针刺血清后,可明显降低心肌细胞Ca2+的含量(P<0.01)。结论:针刺腧穴后的大鼠血清可使心肌细胞内Ca2+含量明显降低,为针刺效应的血清学机制提供了直接证据。

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。

淫羊藿素抗Aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡作用

目的:探索淫羊藿素(icaritin,ICT)对Aβ25-35肽致大鼠原代培养神经细胞的损伤保护作用及潜在机制。方法:制备d17胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,支持培养7d后,与ICT预孵育24h并加入Aβ25-35肽,作用72h后以细胞形态、MTT值、培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平作为细胞的损伤指标;并以线粒体膜电位(ΔΨm)改变作为凋亡早期指标,AO/EB染色差异作为凋亡后期指标。结果:0.1μmol·L-1ICT预孵育24h能显著改善10μmol·L-1Aβ25-35肽所致的原代培养神经细胞的损伤,MTT、LDH及形态学结果显示:ICT能提高Aβ25-35肽损伤神经细胞的存活率,JC-1染色结果显示:ICT能防止Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体ΔΨm下降,AO/EB染色结果显示:ICT能够改善神经细胞凋亡。结论:ICT经抗凋亡机制对Aβ25-35肽损伤大鼠原代培养神经细胞发挥保护作用。该作用与ICT干预Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体膜电位下降和核损伤有关。

VEGF在HaCaT细胞中的自分泌作用

目的:检测VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞中可能的自分泌作用。方法:用MTT法,检测不同浓度外源性VEGF165(0,1,5,10,25,50,100 ng/ml)和不同浓度VEGF特异性抑制剂阿瓦斯丁(0,0.063,0.125,0.25,0.50,1.0,2.0 mg/ml)作用下HaCaT细胞增殖的变化;用细胞迁移实验,检测不同浓度VEGF165和0.5 mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞迁移的变化;蛋白免疫印迹检测10 ng/ml VEGF165和0.5mg/ml阿瓦斯丁作用下HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化情况。结果:VEGF165剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖和迁移能力;而阿瓦斯丁剂量依赖性地抑制其增殖能力,0.50 mg/ml阿瓦斯丁可以显著性降低其迁移能力;10 ng/ml VEGF165显著性促进HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化,而对0.5 mg/ml阿瓦斯丁预处理过的HaCaT细胞的ERK1/2磷酸化没有促进作用。结论:VEGF在皮肤角质形成细胞系HaCaT中存在着自分泌作用。

顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的 :研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株 (OS- 732 )细胞毒性的影响 ,探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法 :OS- 732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、4 3℃热疗 +顺铂联合作用各 1h,采用体外细胞毒性试验 (MTT法 )、流式细胞仪 (FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响 ,以及诱导细胞凋亡的情况。结果 :4 1℃、4 3℃、4 5℃热疗对 OS- 732细胞株有明显的细胞毒性作用。在 37℃恒温条件下 ,细胞株单独与不同浓度的顺铂作用 1h,随着顺铂浓度的升高 ,其细胞毒性作用明显增加。 4 3℃热疗 +顺铂共同作用 1h,其细胞毒性作用进一步增加 ,细胞毒性指数最高达 72 .37% ;FCM分析显示对细胞周期有明显的影响 ,S期细胞比例明显增加 ,G2 与 M期细胞比例明显减少。 4 3℃热疗、4 3℃热疗 +顺铂联合作用各 1h均出现凋亡细胞峰(亚 G1峰 ) ,细胞凋亡比例最高达 5 6 .4 7% ;透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论 :顺铂热化疗有明显的增强 OS- 732细胞株的细胞毒性作用。 4 3℃热疗、4 3℃热疗 +顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。 4 3℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。

阿仑膦酸盐促进体外培养鼠破骨细胞凋亡

目的：研究阿仑膦酸盐通过凋亡抑制破骨细胞性骨吸收的作用。方法：通过光镜、透射电子显微镜和原位末端标记显示形态学特征的方法确证阿仑膦酸盐可诱导体外培养破骨细胞凋亡。结果：破骨细胞和其前体细胞在阿仑膦酸盐处理后呈现凋亡的形态学特征。结论：阿仑膦酸盐导致破骨细胞量的减少可能和细胞凋亡有关。

γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas,Bcl-2表达的影响

目的 观察γ 干扰素 (γ IFN)对肝癌细胞株Hep G2细胞 (Hep G2 )表达Fas ,Bcl 2的影响。方法 应用γ IFN预处理Hep G2 ,用阿霉素诱导凋亡 ,MTT法分析细胞死亡率 ,电镜观察凋亡 ,免疫组织化学法研究γ IFN作用于Hepp G2细胞过程中Fas ,Bcl 2的表达情况。结果 γ IFN预处理的Hep G2表达Fas增强 ,表达Bcl 2减弱 (P <0 .0 5 ) ;γ IFN预处理后Hep G2细胞对阿霉素的敏感性提高 (P <0 .0 5 )。结论 γ IFN对肝癌细胞株Hep G2Fas ,Bcl 2表达有影响 ,并可提高肝癌细胞对阿霉素的敏感性。

Aβ_(1-40)诱导皮层神经元凋亡和人参二醇的保护作用

目的:研究β-淀粉样肽(Aβ1-40)对原代培养的小鼠大脑皮层神经细胞凋亡的诱导和人参二醇(panoxadiol)的保护作用。方法:通过形态学观察,MTT法检测,DNA琼脂糖凝胶电泳,Western-blot等方法研究Aβ1-40对皮层神经元的损伤及人参二醇(由浙江省中医院提供)的保护作用。结果:原代培养的小鼠大脑神经细胞经12μmol/LAβ1-40作用48h后,Aβ1-40损伤组神经细胞出现明显的凋亡特征,OD值降低,DNA电泳出现DNA片段,凋亡细胞数目增多。Western-blot显示Aβ1-40损伤组bcl-2表达下降(P<0.05),而40mg/L人参二醇预处理24h后可明显改变上述凋亡特征。结论:40mg/L人参二醇可减缓12μmol/LAβ1-40诱导培养皮层神经元凋亡,对凋亡细胞有一定的保护作用。

小檗胺对慢性粒细胞白血病细胞抑制作用的机制研究

目的:探讨小檗胺诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制。方法:体外培养K562细胞株细胞,经8μg/ml小檗胺处理不同时间后用Western blot检测细胞内总NF-κB、核内NF-κB和IκBα、pIκBα、IKKα、A20蛋白表达。结果:随着小檗胺处理时间的延长,细胞内总NF-κB无变化,但核内的NF-κB表达下降,半定量比值从处理前的59.2%,随着作用时间的延长,逐步下降为31.4%,19.7%,4.1%,0%。同时出现pIκBα、IKKα表达下调,A20表达增高。结论:小檗胺通过NF-κB途径诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制,可能涉及抑制NF-κB的核转位和转激活,推测其作用与小檗胺降低K562细胞bcr-abl基因的表达有关。

钆离子对巨噬细胞和癌细胞生长过程的影响——微量量热法研究

探讨Gd3+对大鼠和小鼠腹水巨噬细胞、小鼠腹水肝癌H2 2 细胞和人肝癌细胞BEL 740 2的生长过程的影响。方法 :用LKB 2 2 77量热活性检测仪测定 37℃时细胞在加和不加Gd3 +的介质中的产热过程的差异。结果 :1.0× 10 -4 mol·L-1Gd3+对 4种细胞的代谢开始都有明显促进 ,70min时达到产热高峰。虽然总热效应都有增加 ,但是癌细胞增加的比值明显小于巨噬细胞的。结论 :本实验中 ,在初始时Gd3 +可以促进 4种细胞的产热 ,从热效应曲线变化推测Gd3 +离子可能在后期使癌细胞损伤 ,活性降低。

抗p185^(erbB2)单抗的制备及其生物学活性

目的 :制备抗 p185 erbB2 单克隆抗体 ,并研究其对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的结合及生长抑制作用。为后续工作奠定基础。方法 :用NIH3T3 erbB2细胞免疫BALB/c小鼠 ,制备抗p185 erbB2 单克隆抗体。经ELISA、免疫沉淀、Westernblot及免疫组化检测单抗的结合特异性。并用MTT比色法检测所获抗体对表达 p185 erbB2 肿瘤细胞的生长抑制作用。结果 :经筛选获得 1株对表达 p185 erbB2 细胞反应阳性 ,不表达 p185 erbB2 细胞反应阴性的单克隆抗体1H3 ;免疫沉淀、Westernblot均表明 1H3可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;免疫组化结果显示 1H3对c erbB2阳性的乳癌组织呈特异性着染 ;MTT比色法检测表明 1H3对不同的 p185 erbB2 阳性肿瘤细胞均有不同程度的生长抑制作用。结论 :单克隆抗体 1H3能与p185 erbB2 特异结合 ,并可不同程度地抑制NIH3T3 erbB2或SKBR3细胞的生长 ,除可应用于临床对 p185 erbB2 的检测外 ,尚具有肿瘤生物治疗的潜在应用开发价值。

人硫氧还蛋白及其变异体对TF-1和NFS60细胞的凋亡抑制和促增殖效应

目的 :比较rhTRX与rhTRXδ3对细胞因子依赖株TF 1细胞、NFS6 0细胞撤除细胞因子所诱导凋亡的抑制及促细胞增殖作用。方法 :在大肠杆菌中克隆并表达重组hTRX和hTRXδ3,纯化rhTRX与rhTRXδ3蛋白 ,FACS检测凋亡细胞 ,MTT法检测细胞增殖。结果 :在依赖IL 3、GM CSF生长的TF 1细胞 (人红白血病细胞 )和依赖G CSF生长的NFS6 0细胞 (小鼠白血病细胞 )撤除细胞因子后 ,加入rhTRXδ3比加入rhTRX能更有效地抑制这两种细胞的凋亡并有促增殖的作用。结论 :重组hTRX和hTRXδ3有着不同的生物活性 。

反义核酸hTERT对大肠癌细胞的抑制作用

目的 :构建人端粒酶逆转录酶组分 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)反义cDNA逆转录病毒载体 ,观察其对大肠癌细胞HT2 9端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用 ,探讨以hTERT为靶的大肠癌基因治疗的可行性。方法 :RT PCR扩增hTERTmRNA 5′起始端 835bp的cDNA ,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体 pLXSN质粒中 ,转染包装细胞PT6 7后获得重组病毒 ,病毒感染大肠癌HT2 9细胞。处理前后采用Westernblot检测hTERT蛋白表达 ,TRAP法检测端粒酶活性 ,倒置显微镜观察细胞形态变化 ,绘制细胞生长曲线 ,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况。结果 :反义hTERT作用大肠癌HT2 9细胞后hTERT表达下降 ,端粒酶活性被抑制 ,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡。结论 :反义hTERT对大肠癌细胞HT2 9端粒酶活性具有明显的抑制作用 ,抑制细胞生长 ,促进细胞凋亡 ,hTERT有可能成为大肠癌基因治疗靶点。

针灸对荷瘤小鼠瘤细胞和红细胞膜脂流动性的影响

目的:探讨针灸抗肿瘤的机理。方法:针刺、艾灸荷瘤小鼠的“气海”“足三里”穴,检测处理后各组瘤细胞和红细胞膜脂流动性。结果:处理后各治疗组腹水瘤细胞膜脂流动性明显低于模型组（P<0.01）;各治疗组红细胞膜脂流动性明显高于模型组（P<0.01）。结论:针灸治疗使肿瘤细胞生物学活性降低,使机体生物学活性升高,从而在一定程度上揭示了针灸抗肿瘤的生物学机制。

甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞和人肝癌Bel 7402细胞生长具有抑制作用

目的 :研究甲硫氨酸脑啡肽对体外培养的NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞增殖的影响。方法 :MTT微培养染色法检测不同质量浓度的甲硫氨酸脑啡肽对NIH3T3细胞、人肝癌Bel740 2细胞的作用以及一定质量浓度的纳洛酮、阿片δ受体单克隆抗体、5 氟脲嘧啶对这种作用的影响。结果 :(1) 10mg·L-1至 80mg·L-1的甲硫氨酸脑啡肽对这 2种细胞均有不同的抑制效应 (NIH3T332 %～ 6 6 %与Bel740 2 36 %～ 6 4% ) ;(2 )纳洛酮能阻断甲硫氨酸脑啡肽对细胞抑制效应 ,阿片δ受体单克隆抗体没有这种阻断能力 ;(3) 5 氟脲嘧啶 (10mg·L-1)和甲硫氨酸脑啡肽 (5 0mg·L-1)有协同作用。结论 :甲硫氨酸脑啡肽能抑制细胞增殖。提示NIH3T3细胞和Bel 740 2细胞胞膜上可能存在阿片 ζ受体介导。

黄芩有效成分对四氯化碳致伤的原代培养大鼠肝细胞的作用

作者采用原代培养大鼠肝细胞研究黄芩有效成分的护肝作用，并对其中含量较多的结晶单体进行结构鉴定。结果表明：黄芩的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（１．０～２．５ｍｇ／ｍｌ）均可使四氯化碳致伤的肝细胞培养液中ＡＬＴ活性显著降低（Ｐ＜０．００１）。从黄芩乙酸乙酯萃取物分离出来的晶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在所试浓度下均有显著护肝作用；晶Ⅰ则主要为直接抑制酶活性作用。经理化鉴别和光谱分析，晶Ⅰ、Ⅱ分别为汉黄芩素和黄芩素。

喹唑啉类化合物的合成及抗肿瘤活性

目的：合成亲脂性叶酸拮抗剂２，４二氨基５甲基６取代苄胺基喹唑啉类化合物，并研究其对肿瘤细胞的抑制作用。方法：以邻甲苯胺为原料设计并合成喹唑啉类化合物；用四甲基偶氮唑蓝比色法和磺酰罗丹明Ｂ法测定其对肿瘤细胞的抑制作用。结果：该类化合物对Ｌ１２１０白血病细胞有较强的抑制作用。在已测定的部分化合物的药理结果中化合物Ｄ１、Ｄ３、Ｄ５和Ｄ６对人结肠癌ＨＣＴ８细胞，化合物Ｄ１～５对人红白血病Ｋ５６２细胞均有较强的抑制作用；化合物Ｄ１～６对人ＨＬ６０白血病细胞和人胃癌ＢＧＣ细胞均有一定的抑制作用。结论：该喹唑啉类化合物具有较强的抗肿瘤作用。