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A Primary Study of the Proliferation Sti mulation Effect by Pyrroloquinoline Quinone (PQQ) on Cultured Schwann Cells
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作者 Hao-Huan LI~1 Shi-Qing LIU~1 Jing-Ping OU YANG~2 Hao PENG~1Yi XU~2 Hai-Lu YANG~2 Fei ZENG~3 1(Orthopedic Department of Renmin Hospital,Wuhan University, Wuhan 430060, China)2(Pathophysiology Department, School of Medicine, Wuhan University, Wuhan 430071, China)3(Neurology Department of Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, China) 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期79-80,102,共3页
关键词 PQQ A primary Study of the proliferation Sti mulation Effect by Pyrroloquinoline Quinone on cultured Schwann cells
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Expression and Significance of LRIG1 Gene in Human Astrocytomas 被引量:1
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作者 易伟 叶飞 +2 位作者 郭东升 薛德麟 雷霆 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2005年第4期225-228,共4页
Objective: LRIG1 gene is a newly found human gene that displays homologies to the Drosophila Kek-1 gene. Previous researches have shown that the LRIG1 gene almost expressed in all human tissues. However, its function... Objective: LRIG1 gene is a newly found human gene that displays homologies to the Drosophila Kek-1 gene. Previous researches have shown that the LRIG1 gene almost expressed in all human tissues. However, its functions, particularly its functions in human tumors, are still unknown. The goals of the present study are to magnify the expression spectrum of the LRIG1 gene and determine their roles in the oncogenesis. Methods: A triphasic oligonucleotide probe was designed and used to detect the expression level of the LRIG1 gene in 16 astrocytomas and the corresponding tissues around the tumors by in situ hybridization. 11 primary astrocytoma cells were cultured. Among these, the expression level of the LRIG1 gene was checked by in situ hybridization and the expression of the Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) protein was detected by immunohistochemistry. Results: The expression of LRIG1 protein was detected in different degree in all the tumors and the surrounding tissues. Compared to the surrounding tissues, the expression of the tumors was lower. The decrease extends from the surrounding tissues to the tumors were correlation to the tumors' grades. The primary cultured cells also expressed LRIG1 to various extent and the expression of LRIG1 in the cultures was negatively correlated with the intensity of the PCNA staining. Conclusion: The LRIG1 protein may inhibit the growth of tumors of glial cells and the down-regulation of the LRIG1 gene may be involved in the development and progression of the tumor. 展开更多
关键词 LRIG1 ASTROCYTOMA in situ hybridization primary cell culture proliferating cell nuclear antigen (PCNA)
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Effect of Jinmaitong (筋脉通) Serum on the Proliferation of Rat Schwann Cells Cultured in High Glucose Medium 被引量:24
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作者 屈岭 梁晓春 +3 位作者 张宏 吴群励 孙连庆 顾蓓 《Chinese Journal of Integrative Medicine》 SCIE CAS 2008年第4期293-297,共5页
Objective: To investigate the effect of Jinmaitong (筋脉通,JMT) serum on the proliferation of rat Schwann cells (SCs) primarily cultured in high glucose medium. Method: SOs were primarily cultured in Dulbecco's... Objective: To investigate the effect of Jinmaitong (筋脉通,JMT) serum on the proliferation of rat Schwann cells (SCs) primarily cultured in high glucose medium. Method: SOs were primarily cultured in Dulbecco's minmum essential medium (DMEM control), 50 mmol/L glucose medium (50 mmol/L Glu), 75 mmol/L glucose medium (75 mmol/L Glu), as well as 50 mmol/L glucose medium, with different concentrations of JMT serum (undiluted, 1:2 diluted and 1:8 diluted) and Neurotropin (Ntp), respectively. The proliferation of SCs under different conditions was detected by MTT. Result: SCs grew exuberantly in DMEM within 24-72 h, but slowed down at 96 h. The proliferation of SCs was inhibited in 50 mmol/L Glu and 75 mmol/L Glu after cultures of 48, 72 and 96 h, which showed that both were significantly different compared to the control group (P〈0.01). The inhibition was more significant in 75 mmol/L Glu than in 50 mmol/L Glu (P〈0.05). Spearman's rho analysis revealed that the proliferation of SCs had a negative correlation with the concentration of glucose (r=-0.471, P〈0.01). Excluding the time factor, partial correlation showed similar results (r =-0.679, P〈0.01). After 48 h, the proliferation of SCs increased significantly in JMT 1:2 and Ntp compared with 50 mmol/L Glu (control 0.437±0.019, 50 mmol/ L Glu 0.367±0.035, JMT1:2 0.426±0.024, Ntp 0.422±0.013; P〈0.01), and there were no statistically significant differences among the JMT groups, the Ntp group and the control group (P〉0.05). Conclusions: The proliferation of SCs was inhibited in high glucose medium, and the inhibition was reduced by different concentrations of JMT serum, especially at JMT1:2. 展开更多
关键词 Schwann cells high glucose primary culture Jinmaitong proliferation Chinese herbs' serum pharmacology
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大菱鲆鳍细胞系的建立 被引量:21
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作者 樊廷俊 耿晓芬 +7 位作者 丛日山 姜国建 于秋涛 付永锋 王晶 于苗苗 杨秀霞 吴建东 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期759-766,共8页
建立大菱鲆(Scophthalus maximus)鳍细胞系,文中采用胰蛋白酶、透明质酸酶和Ⅱ型胶原酶消化法启动大菱鲆鳍组织的原代培养,并通过培养液配方和培养条件的优化成功进行大菱鲆鳍细胞的继代培养。研究结果显示,在pH=7.0-7.4、温度20-24... 建立大菱鲆(Scophthalus maximus)鳍细胞系,文中采用胰蛋白酶、透明质酸酶和Ⅱ型胶原酶消化法启动大菱鲆鳍组织的原代培养,并通过培养液配方和培养条件的优化成功进行大菱鲆鳍细胞的继代培养。研究结果显示,在pH=7.0-7.4、温度20-24℃的培养条件下,培养于含有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐的Leibovitz-15培养液(20%胎牛血清)中的大菱鲆鳍细胞,其生长分裂状况最好,细胞形态为成纤维细胞样。经继代培养后,细胞生长分裂依然十分旺盛,第60代大菱鲆鳍细胞系的群体倍增时间为62.4 h,虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体仍为44条。该细胞系细胞经液氮冻存后仍保持有原有形态和较高存活率。现已成功建立了连续性大菱鲆鳍细胞系,目前已传至第65代。该细胞系的建立对于查清病毒对大菱鲆细胞的感染途径与感染机理等具有重要的理论意义,对于病毒疫苗研制具有重要应用价值。 展开更多
关键词 大菱鲆 鳍细胞 原代培养 传代培养 细胞系
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金钱鱼肾细胞系的建立及生长特性研究 被引量:10
5
作者 张莹莹 梁雪梅 +1 位作者 曾文刚 张俊彬 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期213-218,651,共6页
金钱鱼(Scatophagus argus)是一种重要的广盐性海水养殖鱼类,可直接在海水、淡水、咸淡水等不同环境中正常生长。为研究金钱鱼独特的渗透调节机制,本文研究了金钱鱼肾细胞的原代和传代条件及其生长特性,结果表明:原代肾细胞在含有20%胎... 金钱鱼(Scatophagus argus)是一种重要的广盐性海水养殖鱼类,可直接在海水、淡水、咸淡水等不同环境中正常生长。为研究金钱鱼独特的渗透调节机制,本文研究了金钱鱼肾细胞的原代和传代条件及其生长特性,结果表明:原代肾细胞在含有20%胎牛血清(FBS)的L-15培养基里贴壁和生长较好,添加10ng/mL的碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor)bFGF能明显促进细胞增殖,传代细胞采用含有10%胎牛血清的L-15培养基,细胞生长迅速,3—4d即可传代。金钱鱼肾细胞为成纤维样细胞,命名为SK细胞,目前已传至22代。扩增第11代SK细胞的细胞色素氧化酶I(COI)基因,比对结果证明此细胞系来源于金钱鱼。采用CCK-8法检测第12代细胞在低渗(95,137,200mmol/kg),等渗(330mmol/kg)和高渗(430,550mmol/kg)中的增殖情况,结果发现肾细胞在137—430mm/kg的渗透压范围内均可增殖,说明金钱鱼肾细胞对渗透压的耐受性较强。本试验首次建立了金钱鱼肾细胞系,并初步证明了肾细胞对盐度有较强的耐受性,为今后渗透压调节的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 金钱鱼 肾细胞 培养基 血清渗透压 细胞增殖 鳃细胞系 传代细胞 原代细胞培养 原代培养 渗透压调节
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体外原代培养人视网膜色素上皮细胞(英文) 被引量:17
6
作者 徐国兴 杨娟 +3 位作者 孙堂胜 胡建章 谢茂松 郭健 《国际眼科杂志》 CAS 2004年第1期12-15,共4页
目的:探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(RPE)技术。为研究溶血磷脂酸(lysophos-phatidic acid, LPA)对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法:取自愿者贡献的意外事故成年眼球,用2.5g/L胰酶消化获取人RPE... 目的:探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(RPE)技术。为研究溶血磷脂酸(lysophos-phatidic acid, LPA)对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法:取自愿者贡献的意外事故成年眼球,用2.5g/L胰酶消化获取人RPE细胞、150mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养,细胞接近融合状态时进行传代培养。取自愿者贡献的眼球并游离其视网膜色素上皮细胞,用DMEM加100mL/L血清及MEM氨基酸和庆大霉素,进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸、转移因子β2(TGF-β2)及LPA+TGF-β2进行视网膜色素上皮细胞增殖试验,用细胞染色法进行细胞计数,提取视网膜色素上皮细胞DNA,用Spectrophotometer进行DNA定量测定。结果:RPE原代细胞镜下为圆形,大小不一,内含较多的色素颗粒,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后3d增殖速度明显加快,至4~5d即可基本融合,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛,细胞质内细胞器丰富,线粒体量多,体积较小,内外膜分界清晰,嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内,多数细胞质内数量较少呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。含有和/或缺乏10mL/L小牛血清的两种LPA(10μmol/L雪均明显刺激视网膜色素上皮细胞? 展开更多
关键词 体外原代培养 人视网膜色素上皮细胞 LPA 溶血磷脂酸 原代培养 细胞增殖
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圆斑星鲽连续性鳃细胞系的建立 被引量:5
7
作者 樊廷俊 郭雪阳 +3 位作者 姜国建 徐晓辉 孙爱 徐彬 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期69-74,共6页
为建立圆斑星鲽(Verasper variegatus)鳃细胞系,本文采用胰蛋白酶消化法启动了圆斑星鲽鳃组织的体外培养,并通过对培养液配方和培养条件的优化成功地进行了圆斑星鲽鳃细胞的原代培养和继代培养。结果显示,圆斑星鲽鳃细胞的最适培养液为... 为建立圆斑星鲽(Verasper variegatus)鳃细胞系,本文采用胰蛋白酶消化法启动了圆斑星鲽鳃组织的体外培养,并通过对培养液配方和培养条件的优化成功地进行了圆斑星鲽鳃细胞的原代培养和继代培养。结果显示,圆斑星鲽鳃细胞的最适培养液为含有20%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12培养液,培养液最适pH值为7.2,最适培养温度为22℃;通过向20%FBS-DMEM/F-12培养液(pH=7.2)中添加N-乙酰葡萄糖盐酸盐、羧甲基壳寡糖、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及I型胰岛素样生长因子(IGF-I),在22℃成功启动了圆斑星鲽鳃细胞的原代培养,细胞的贴壁、生长和分裂状态良好,为典型的成纤维样细胞形态,30 d即可形成汇合的细胞单层;经连续继代培养后,已成功建立了连续性圆斑星鲽鳃细胞系,现已继代培养至第76代;该细胞系细胞经液氮冻存复苏后仍保持其原有的成纤维样细胞形态,其贴壁生长状态和增殖速度也与冻存前无差异;生长特性鉴定结果显示,第60代圆斑星鲽鳃细胞系细胞的群体倍增时间为43.6 h,表明细胞的生长分裂依然十分旺盛。染色体分析结果显示,圆斑星鲽鳃细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有其典型的二倍体核型特征(46 t),表明所建立的细胞系确为圆斑星鲽鳃细胞系。该细胞系的建立对于病毒与宿主相互作用机理的研究及病毒疫苗的开发具有重要的理论和应用价值。 展开更多
关键词 圆斑星鲽 原代培养 继代培养 细胞系
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体外培养对骨髓间充质干细胞凋亡的影响 被引量:4
8
作者 董海 陆骅 +3 位作者 汤亭亭 周之德 陈晓东 史桂英 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2004年第9期686-688,共3页
目的 :研究成人骨髓间充质干细胞在体外培养条件下 ,传代次数与细胞凋亡的关系。方法 :采用An nexinV/PI双染色法 ,在流式细胞仪上检测不同传代数的成人骨髓间充质干细胞的凋亡情况。结果 :传代次数越多 ,骨髓间充质干细胞的凋亡率及死... 目的 :研究成人骨髓间充质干细胞在体外培养条件下 ,传代次数与细胞凋亡的关系。方法 :采用An nexinV/PI双染色法 ,在流式细胞仪上检测不同传代数的成人骨髓间充质干细胞的凋亡情况。结果 :传代次数越多 ,骨髓间充质干细胞的凋亡率及死亡率越高 ,存活的正常细胞越少。结论 :第 4代以内的细胞增殖能力强 ,凋亡率低 。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓 细胞培养 细胞凋亡 传代培养 增殖 组织工程
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胰岛素样生长因子-Ⅰ、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响 被引量:6
9
作者 李莹莹 夏小静 +5 位作者 吴云娣 何伯萍 闫新武 高媛媛 王玉平 雷连成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期37-42,共6页
本试验应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞,免疫荧光鉴定正确后MTT法评价不同浓度的胰岛素样生长因子-I(insulin-like growth factor-I,IGF-I)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、转化生长因子-... 本试验应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞,免疫荧光鉴定正确后MTT法评价不同浓度的胰岛素样生长因子-I(insulin-like growth factor-I,IGF-I)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF—β1)、干扰素-y(interferon-y,IFN-y)对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖的影响。结果表明,IGF-I、HGF分别在10~200和0.1~100ng/mL对乳腺上皮细胞的增殖呈正相关,而TGF-β1(2.5~100ng/mL)、IFN-y(5~160ng/mL)则剂量依赖性地抑制乳腺上皮细胞增殖。提示,IGF—I、HGF均能促进奶牛乳腺上皮细胞的体外增殖,该作用在一定浓度范围内有剂量依赖性;TGF-β1、IFN-y对乳腺上皮细胞的增殖作用出现剂量抑制效应。 展开更多
关键词 细胞因子 乳腺上皮细胞 原代培养 细胞增殖
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人胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养 被引量:3
10
作者 侯敏 陈元方 +2 位作者 柯杨 孔燕国 陆国钧 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期180-182,I010,共4页
目的 完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养 ,建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。 方法 用含有胶原酶 IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种 ,接种的细胞团用含10 %胎牛血清、4.0 m mol/L谷氨酰... 目的 完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养 ,建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。 方法 用含有胶原酶 IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种 ,接种的细胞团用含10 %胎牛血清、4.0 m mol/L谷氨酰胺、0 .0 1%大豆胰酶抑制剂、0 .0 2 %牛血清白蛋白、5 .0 m g/L牛脑垂体提取物、2 .5× 10 - 3m g/L表皮生长因子、2 5 .0× 10 - 2 m g/L霍乱毒素、5 .0 mg/L胰岛素、10 .0 mg/L转铁蛋白、1.0 m g/L地塞米松、5 0 m g/L庆大霉素的完全培养基培养 2 4h后 ,换含 2 %胎牛血清的完全培养基继续培养 ,在细胞团达到 80 %~ 90 %的细胞汇合时 ,1∶ 2传代培养。 结果 获得的原代培养细胞不含有淀粉酶 ,表达细胞角蛋白 ,可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞已传代培养到第 3代。 结论 我们的原代培养和传代培养的方法、条件适宜于胰腺导管上皮体外细胞培养。 展开更多
关键词 原代培养 传代培养 胰腺导管 上皮细胞
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黄鳍鲷肝细胞体外培养研究 被引量:4
11
作者 吴国平 纪荣兴 +1 位作者 李丽美 邹文政 《动物医学进展》 CSCD 2003年第3期102-103,共2页
以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9~ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生... 以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9~ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生长良好 ,3~ 5 d长满单层 ,细胞主要为成纤维细胞状 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1~ 2代为适应期 ,3~ 5代为旺盛期 。 展开更多
关键词 黄鳍鲷 肝细胞 体外培养 原代培养 传代培养
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IL-10对大鼠原代肝细胞增殖的影响 被引量:4
12
作者 林羡屏 黄月红 +3 位作者 郑伟达 陈运新 陈治新 王小众 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1150-1153,共4页
目的:探讨IL-10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响。方法:胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,RT-PCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况,对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果,进行细胞纯度鉴定;RT-PCR法检测原代肝细胞IL-1... 目的:探讨IL-10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响。方法:胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,RT-PCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况,对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果,进行细胞纯度鉴定;RT-PCR法检测原代肝细胞IL-10和IL-10受体α(IL10Rα)的表达情况;原代肝细胞分3组培养:正常组(N组)、对照组(C组)和IL-10干预组(I组);通过MTT分析、台盼兰细胞计数以及流式细胞术检测DNA含量等方法,了解外源性IL-10对肝细胞增殖的影响。结果:细胞鉴定结果显示,所有的标志基因在肝组织都可检测到有较高的表达,原代肝细胞虽高表达肝细胞标志基因,而肝内其他细胞的标志基因则不表达或低表达。RT-PCR检测显示原代肝细胞可表达IL-10和IL10Rα。台盼兰细胞计数提示IL-10干预48h,I组平均细胞数仅为C组的71.96%(P<0.05);MTT检测亦显示IL-10干预24、48h,I组吸光度值分别为C组的88.41%与90.24%(P<0.05);流式细胞术检测结果表明IL-10干预24h,I组肝细胞峰DNA含量是C组的59.06%,I组较C组降低(P<0.01),甚至低于N组(P<0.01)。结论:分离的原代肝细胞纯度较高,大鼠原代肝细胞表达IL-10/IL10R mRNA,IL-10抑制大鼠原代肝细胞增殖。 展开更多
关键词 原代肝细胞 IL-10 IL10R 细胞增殖
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肿瘤相关成纤维细胞对胆囊癌细胞生长和侵袭的影响 被引量:4
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作者 陈晨 慎浩鑫 +4 位作者 陶杰 宋虎伟 马丽 王林 耿智敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1149-1154,共6页
目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光... 目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞(CAFs)的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细胞免疫荧光进行鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测CAFs对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测CAFs对癌细胞侵袭能力的影响。结果酶消化法及组织块法均可获得人胆囊癌CAFs,以酶消化法更为简便、高效;MTT及Transwell侵袭实验证实CAFs可促进胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力(P<0.05),差距具有统计学意义。结论通过酶消化法可较为简便地获得人胆囊癌CAFs,CAFs可显著增强胆囊癌细胞增殖、侵袭能力,表明其在胆囊癌发生、发展中起重要作用。 展开更多
关键词 胆囊癌 原代培养 肿瘤相关成纤维细胞 增殖 侵袭
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不同培养基对皮肤来源的成纤维细胞增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响 被引量:6
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作者 喇文军 林孝发 +4 位作者 蒋伟 王妍 尹卫民 林嘉欢 林峰 《中国美容医学》 CAS 2017年第2期68-72,共5页
目的:探讨不同培养基组成对皮肤成纤维细胞的增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响。方法:采用两步酶消化法从健康人耳后皮肤中获得成纤维细胞,依据培养基种类不同分为A组(FM无血清培养基)、B组(DMEM+10%FBS)、C组(RPMI-1640+10%FBS)、D组(DM... 目的:探讨不同培养基组成对皮肤成纤维细胞的增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响。方法:采用两步酶消化法从健康人耳后皮肤中获得成纤维细胞,依据培养基种类不同分为A组(FM无血清培养基)、B组(DMEM+10%FBS)、C组(RPMI-1640+10%FBS)、D组(DMEM+F12(1∶1)+10%FBS),采用MTT法、细胞划痕实验、酶联免疫吸附实验、β-半乳糖苷酶试验、软琼脂克隆形成试验比较不同培养基对细胞增殖、迁移、胶原分泌、老化、变异的影响。结果:采用酶消化法在2d^4d内即可从组织块中获得大量成纤维细胞;其中B、D组较A、C组细胞增殖较快,且趋势与MTT细胞增殖相同;划痕实验显示B、D组较A、C组向缺损部位迁移更为明显;此外,D组胶原蛋白分泌量高于其余三组(P<0.05),且连续传代30次后,细胞无明显衰老及瘤变迹象。结论:两步酶消化法可快速高效的从人组织块中获得成纤维细胞,且采用DMEM+F12(1∶1)完全培养基有利于促进细胞增殖、分泌胶原蛋白及延缓细胞衰老。 展开更多
关键词 成纤维细胞 培养基 胶原蛋白 细胞增殖 原代培养
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原代培养人脐动脉内皮细胞的生长与增殖 被引量:5
15
作者 王瑞绵 严四新 +1 位作者 孟扬 戎诚兴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期294-298,共5页
在未用贴附基质和生长因子情况下,成功地培养了人脐动脉内皮细胞(human umbilicalartery endothelial cell,HUAEC)。接种密度为1×10~5/cm^2。采用HE染色、显微计量法及透射电镜术研究了内皮细胞的形态、生长行为与增殖。(1)接种后... 在未用贴附基质和生长因子情况下,成功地培养了人脐动脉内皮细胞(human umbilicalartery endothelial cell,HUAEC)。接种密度为1×10~5/cm^2。采用HE染色、显微计量法及透射电镜术研究了内皮细胞的形态、生长行为与增殖。(1)接种后24h已出现岛状细胞团;48h细胞团增大,可区分出细胞密集的中央区及细胞密度较小的周边区;72h大部分细胞团已汇合;216h内皮细胞衰退、脱落。(2)HUAEC呈较长的多边形,相邻细胞间以短突相连,内胞质呈颗粒状弱嗜碱性,外胞质扁薄。(3)一个细胞团所含平均细胞数,24h为17.39±3.79个;48h为131.14±22.83个,72h为454.16±111.39个,表明在接种后72h内细胞倍增9次。(4)在细胞呈指数生长的24~72h时出现许多无丝分裂像,但未见有丝分裂像;至120h细胞生长缓慢时才出现有丝分裂像。(5)电镜下可见内皮细胞含Weibel-Palade小体。 展开更多
关键词 细胞生长 细胞增殖 内皮细胞 脐动脉 原代培养
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人脑胶质瘤细胞的原代培养及生长活性观察 被引量:9
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作者 易伟 牛洪泉 +3 位作者 陶胜忠 叶飞 雷霆 薛德麟 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2005年第3期245-247,共3页
目的研究人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,观察培养细胞的生长活性与肿瘤级别之间的关系。方法用消化培养法原代培养24例人脑胶质瘤细胞,酶消化法+振荡贴壁法+机械划除法纯化,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色及甲基噻唑基四唑(MTT)法观... 目的研究人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,观察培养细胞的生长活性与肿瘤级别之间的关系。方法用消化培养法原代培养24例人脑胶质瘤细胞,酶消化法+振荡贴壁法+机械划除法纯化,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色及甲基噻唑基四唑(MTT)法观察培养细胞的生长活性。结果20例原代培养成功,第4代以后肿瘤细胞纯度达98%以上,PCNA、MTT法显示肿瘤细胞的生长活性与肿瘤级别成正比。结论采用消化培养法可成功培养原代胶质瘤细胞,酶消化法+振荡贴壁法+机械划除法的纯化方法可获得较高的肿瘤细胞纯度;肿瘤细胞的生长活性与肿瘤的恶性程度有关,离体细胞的生长活性可作为判断肿瘤恶性程度的一个指标;检测细胞生长活性MTT法比PCNA染色更具敏感性。 展开更多
关键词 胶质瘤 原代培养 增殖细胞核抗原(PCNA) MTT试验
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水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定 被引量:3
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作者 高亚可 陆凤花 +3 位作者 马帆 乔树叶 陈施蓓 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期140-144,共5页
研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%... 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24h后开始零星增殖,3~5d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。 展开更多
关键词 水牛 卵巢颗粒细胞 原代培养 培养基 增殖 凋亡
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雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响 被引量:5
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作者 茆文杰 陈龙 +7 位作者 杨春欣 姚明辉 赵子琴 沈忆文 周月琴 薛爱民 徐红梅 张明昌 《中西医结合学报》 CAS 2010年第6期562-567,共6页
目的:研究雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响。方法:将SD大鼠30只随机分成对照组、泼尼松组和低、中、高剂量雷公藤内酯醇组,相应药物灌胃7d制备药物血清。分离正常大鼠肾上腺皮质细胞,分别加入药物血... 目的:研究雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响。方法:将SD大鼠30只随机分成对照组、泼尼松组和低、中、高剂量雷公藤内酯醇组,相应药物灌胃7d制备药物血清。分离正常大鼠肾上腺皮质细胞,分别加入药物血清常规培养48h后,采用免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,并计算PCNA阳性细胞数;透射电子显微镜观察肾上腺皮质细胞的超微结构;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中皮质酮水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾上腺皮质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroi ddehydrogenase,3β-HSD)mRNA表达水平。结果:各个浓度雷公藤内酯醇药物血清组肾上腺皮质细胞培养上清液中皮质酮水平及细胞中3β-HSDmRNA表达水平较对照组明显升高;中、高剂量雷公藤内酯醇组PCNA阳性细胞比率高于对照组(P<0.05),泼尼松组上清液中皮质酮水平、细胞中3β-HSDmRNA表达水平和PCNA阳性细胞比率均低于对照组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞有刺激作用,可以促使肾上腺皮质细胞分泌皮质酮。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 中药化学成分 原代培养 肾上腺皮质细胞 增殖细胞核抗原 3-羟甾类脱氢酶类大鼠
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3-羟基丁酸对体外培养大鼠皮质神经干细胞增殖分化的影响 被引量:2
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作者 卢晓云 杨志倩 +5 位作者 吕海侠 焦倩 王媛媛 冯敏娟 张雅利 刘勇 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期689-692,共4页
目的研究体外条件下3-羟基丁酸(3-HB)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法分离培养孕14.5d大鼠胚胎大脑皮质NSCs,分别以不同质量浓度3-HB(0.1、0.05、0.02、0.01g/L)处理培养至第3代的NSCs,以未加药组作为对照。CCK-8试剂盒检测... 目的研究体外条件下3-羟基丁酸(3-HB)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法分离培养孕14.5d大鼠胚胎大脑皮质NSCs,分别以不同质量浓度3-HB(0.1、0.05、0.02、0.01g/L)处理培养至第3代的NSCs,以未加药组作为对照。CCK-8试剂盒检测细胞增殖、活力,免疫细胞化学染色观察NSCs的分化情况。结果与对照组相比,3-HB对NSCs的增殖、活力没有显著影响,但3-HB处理组NSCs分化为β-tubulinⅢ阳性细胞(神经元)的比例增加,而分化为GFAP阳性细胞(胶质细胞)的比例没有显著变化。结论 3-HB不影响NSCs的增殖,但可促进其向神经元方向分化。 展开更多
关键词 3-羟基丁酸 神经干细胞 原代培养 细胞增殖 细胞分化
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LRIG1基因在人星形细胞瘤中的表达与意义 被引量:7
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作者 易伟 叶飞 +2 位作者 郭东升 薛德麟 雷霆 《中国临床神经外科杂志》 2006年第1期29-31,共3页
目的探讨LRIG1在人星形细胞瘤中的表达与意义。方法设计、制作LRIG1mRNA寡核苷酸探针,用原位杂交检测LRIG1mRNA在16例不同级别人星形细胞瘤组织及11例原代培养的人脑星形细胞瘤细胞中的表达,同时用免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表... 目的探讨LRIG1在人星形细胞瘤中的表达与意义。方法设计、制作LRIG1mRNA寡核苷酸探针,用原位杂交检测LRIG1mRNA在16例不同级别人星形细胞瘤组织及11例原代培养的人脑星形细胞瘤细胞中的表达,同时用免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,分析肿瘤LRIG1表达和PCNA表达之间的关系。结果人星形细胞瘤组织和培养的星形细胞瘤细胞中均有一定程度的LRIG1表达,其表达的程度与PCNA表达呈显著负相关(P<0.05)。结论LRIG1蛋白具有抑制星形细胞瘤增殖的作用,可能参与了肿瘤的发生和发展过程。 展开更多
关键词 LRIG1 星形细胞瘤 原位杂交 原代培养 增殖细胞核抗原(PCNA) 免疫组化
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