01032 CeNeS将完成M6G的开发

CeNeS制药公司正计划筹集大约1140万英镑，这些资金中大约有1050万英镑被公司用于投入到治疗术后疼痛的化合物M6G(morphine-6-glucuronide，吗啡-6-葡萄糖苷酸)第二个Ⅲ期临床试验和其他中枢神经系统项目的进一步研究。

A new Euprox from the Late Miocene of Yuanmou, Yunnan Province, China, with interpretation of its paleoenvironment

The Yuanmou Basin of Yunnan Province is ahotspot for the research of early hominid evolution and its environmental background. During the implementation ofthe Program 揜esearch of the Origin and Evolution of Early Man and Its Environmental Background?from 1998 to 2001, a huge quantity of hominoid and mammal fossils were col-lected. The present report systematically describes an Eu-prox robustus sp. nov. identified during the recent laboratory work on the collected material. Euprox is a group of earliest cervids with true antlers. The new species is the third one of the genus discovered in China. Judged by its morphologiccharacteristics, the new species feed on juicy and tenderleaves of dicotyledon. It implies that the vegetation of itsepoch in the Yuanmou Basin is a kind of southern subtropi-cal evergreen forest and the climate is humid and temperate with evident seasonality. The latter is mostly influenced by the monsoon and secondly by the latitude.

渤中凹陷南部东二下段湖底扇储层控制因素及孔隙定量演化

渤中凹陷南部渐新统东二下段处于深水湖盆沉积环境,优质湖相烃源岩和大规模湖底扇广泛发育,是岩性油气藏勘探的有利区。基于录测井数据、岩石粒度、显微薄片、扫描电镜、流体包裹体等资料,开展渤中凹陷南部东二下段湖底扇储层特征与储层主控因素研究,建立孔隙定量演化模型。研究结果表明:东二下段湖底扇储层岩性以中—细粒岩屑石英长石砂岩为主,孔隙以溶蚀孔为主;湖底扇朵叶复合体内部的朵叶核部、分支水道等有利沉积相带是优质储层形成的基础;持续的压实作用和早晚两期胶结作用是导致孔隙不断损失的主因;有机酸溶蚀和异常高压保孔促溶是改善储层质量的关键。在埋藏过程中储层孔隙演化经历了早成岩A期快速压实减孔、早成岩B期快速压实-胶结减孔、中成岩A1期缓慢压实减孔-有机酸溶蚀增孔和中成岩A2期缓慢压实-胶结作用减孔等4个阶段,其中压实减孔总量为13.64%,早期胶结减孔量为8.24%,溶蚀增孔量为9.55%,尤其是发生在中成岩A1期末油气开始充注成藏之后的晚期胶结减孔量为7.12%,造成储层孔隙度显著降低。

北部湾盆地涠西南凹陷涠洲组断裂—岩性复合圈闭发育模式与勘探实践

为了解决北部湾盆地涠西南凹陷勘探目标搜索和油田可持续开发难度大的问题,对该区二号断裂带渐新统涠洲组三段构造圈闭发育层段开展了断裂—岩性复合圈闭研究。通过对控洼断裂演化与涠三段沉积特征关系的研究,发现涠三段沉积期二号断裂带活动性较弱,凹陷长轴方向辫状河三角洲水下分流河道向洼中持续推进;涠二段、涠一段沉积期区域构造活动强烈,产生一系列雁列式断裂,辫状河三角洲前缘形成的相对孤立的水下分流河道与呈雁列式断裂形成角度交错相互切割,从而形成了NE—SW向靠断层封堵、NW—SE向靠砂体尖灭的特色河道型构造—岩性圈闭群。研究表明:(1)涠三段发育“二号断裂带洼中断隆背景、低频摆动水道、雁列张扭断裂”三因素耦合的断裂—岩性型圈闭模式,辫状河三角洲水下分流河道主流线与二号断裂带的交会区是构造—岩性圈闭有利发育区带;(2)近物源交会区主要发育复合型构造—岩性圈闭,远物源交会区主要发育孤立型构造—岩性圈闭,建立了凹陷轴向河道控砂,断裂、砂体复合控藏的成藏模式。断裂—岩性型圈闭模式和成藏模式应用效果好,搜索了一批NE—SW向靠断层封堵、NW—SE向靠砂体尖灭的有利断裂—岩性复合圈闭群,并在涠B-E构造得到很好的应用,WB-E 1井钻遇油层近100 m,后续多口井钻探成功,新增油气探明地质储量超千万立方米,证实二号断裂带涠三段断裂—岩性复合圈闭是重要的勘探领域。

胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨

目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基 因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的 提取；心脏特异性引物的合成和ＲＴ－ＰＣＲ反应；探针标记、纯化和比放射活性测定；ＲＮＡ斑点杂交。结果：用最 适条件培养液对ＦＳＣ定向诱导分化，可使８０％以上的ＥＳＣ分化为心肌细胞。心肌细胞以同步的方式进行收缩。 反转录ＰＣＲ和斑点杂交的结果显示：心肌在早期发育就开始表达其特异性基因。结论：胚胎干细胞体外能诱导 分化为心肌细胞。胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同，对ＥＳ细胞定向诱导为心肌 细胞均有影响。最佳诱导条件是用２ｎｍｏｌ／Ｌ维甲酸、０．６％二甲基亚砜和２０％胎牛血清组成的条件培养液。

国内外乙丙橡胶技术进展 Ⅱ.生产技术及应用进展

概述了乙丙橡胶的生产技术(如溶液聚合法、悬浮聚合法和气相聚合法)以及所用催化剂(如钒系、钛系、茂金属以及非茂单中心催化剂)的研究进展,介绍了乙丙橡胶的应用研究现状,提出了乙丙橡胶的发展建议。

人角质细胞生长因子的克隆及表达

目的为获得高表达的重组人角质细胞生长因子生物工程菌。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人胚 胎肺成纤维细胞中，扩增出ＫＧＦ ｃＤＮＡ基因，并插入ｐＵＣ１８－Ｔ载体，构建成了重组人ＫＧＦ基因，经ＤＮＡ测序证实与 文献报道一致。将ＫＧＦ基因定向插入大肠杆菌表达载体ＰＥＴ１１ｂ内，转化大肠杆菌ＨＢ１０１。结果获得的重组子 经ＩＰＴＧ诱导，在相对分子质量为１９０００处表达重组蛋白，约占菌体蛋白的１０％。结论建立了制备重组人ＫＧＦ表 达系统，为今后进一步研究ＫＧＦ的生物学功能奠定可靠的物质基础。

C2基因对人胃癌细胞周期的影响

目的 探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因 (C2基因 )对细胞周期的影响及与细胞凋亡的关系。方法 构建C2基因真核表达载体 ,转染人胃癌细胞系SGC790 1,获得瞬时和稳定表达C2蛋白的人胃癌细胞株 ,应用流式细胞分析法检测C2蛋白在转染细胞上的表达和转染细胞细胞周期的改变并在电镜下观察转染细胞超微结构的改变。结果 成功构建了C2基因真核表达载体 ;流式细胞分析法检测转染细胞C2蛋白表达率为 32 .3% ,空白对照为 0 .9% ;细胞周期检测提示瞬时和稳定转染了C2基因的细胞均发生凋亡 ;电镜下可见转染了C2基因的胃癌细胞发生凋亡。结论 C2基因转染可引起胃癌细胞发生凋亡 。

RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:探讨用RNA干扰技术下调smad 4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:用DNA重组技术将针对人smad 4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil-smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con,三种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4 mRNA及smad4蛋白表达,筛选出的HeLa/shRNA2细胞增殖能力明显增强。结论:应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad 4基因表达及功能的shRNA,smad 4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长。

转化生长因子-β1基因T869C多态性与腔隙性脑梗死的关系

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)T869C基因多态性与腔隙性脑梗死(lacunar infarction,LI)的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测143例LI患者(LI组)及138例正常人(对照组)TGF-β1基因T869C的多态性。结果:LI组CC基因型频率(36.3%,52/143)显著高于对照组(21.0%,29/138,OR=2.18,P=0.002),LI组C等位基因频率显著高于对照组(58.1%vs 46.7%,OR=1.57,P=0.004)。结论:TGF-β1基因T869C位点的基因多态性与LI有关,C等位基因是LI的危险因素。

HIF-1α在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系

目的:研究HIF-1α在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系。方法:利用免疫组织化学检测了77例胃MALT淋巴瘤bcl-2及fas蛋白的表达。结果:在NHL中,HIF-1α中呈高表达,阳性率为89.6%,高度恶性组的阳性表达强度明显高于低度恶性组(P<0.01),但B细胞型与T细胞型之间比较无明显差异(P>0.05);Caspase-3阳性表达率为(79.2%),低度恶性组的阳性信号强度明显低于高度恶性组(P<0.05);PCNA的阳性率94.8%,高度恶性组的阳性表达强度明显高于低度恶性组(P<0.01);在B细胞型和T细胞型NHL中,低度恶性和高度恶性组中HIF-1α与Caspase-3及PC-NA的阳性信号强度均呈明显的正相关关系。结论:在NHL的发生发展过程中,HIF-1α通过调控肿瘤细胞的高增殖和高凋亡发挥作用,并在其恶性转化中可能起着重要作用。因此,检测HIF-1α有可能作为判断该肿瘤的生物学行为和临床预后的指标之一。

热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的杀伤作用

目的 探讨 5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC )热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶 (CD )基因的大肠癌细胞SW 480的作用。方法 采用脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列 (TRS )驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G 1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW 480 ,以G 418筛选阳性克隆扩增后 ,采用水浴加温法 ,43℃作用 3 0min共 3次 ,同时给予 5 FC进行敏感试验 ;RT PCR法检测目的基因在靶细胞的表达。结果 SW 480 CEACD细胞在 43℃作用 3 0min共 3次条件下 ,CD基因能稳定表达 ;热疗本身对SW 480细胞有一定的杀伤作用 ( P <0 .0 5 ) ,转CD基因后 ,SW 480细胞对 5 FC的敏感性明显提高 (P <0 .0 1) ,热疗与前药 5 FC合用 ,对SW 480 CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用 ( P <0 .0 1) ,亦大于单独应用 5 FC时对SW 480 CEACD细胞的杀伤作用(P <0 .0 5 ) ,热化疗增加了SW 480 CEACD细胞对 5 FC的敏感性 ,并可观察到明显的旁观者效应。结论 热疗与 5 FC联合应用 ,提高了CEA组织特异性CD /5 FC系统对结肠癌细胞SW 480的靶向性杀伤作用。

过氧化氢酶过度表达对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒转染人血管平滑肌细胞,采用Westernblot方法检测血管平滑肌细胞过氧化氢酶的表达,应用流式细胞术、TUNEL法等方法检测血管平滑肌细胞的凋亡。结果含过氧化氢酶基因的重组腺病毒转染后血管平滑肌细胞过氧化氢酶表达明显增多;流式细胞术显示含过氧化氢酶基因的重组腺病毒组与对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01)。经TUNEL分析显示,含过氧化氢酶基因的重组腺病毒组凋亡细胞明显多于对照组,两者之间有显著性差异(P<0.001)。结论腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染导致过氧化氢酶过度表达,促进人血管平滑肌细胞的凋亡,这可能是防治经皮腔内冠状动脉血管成形术后再狭窄的一种新方法。

传染性法氏囊病毒HN株的分离鉴定及应用免疫荧光检测IBDV

河南郑州地区某养鸡场的三黄肉鸡出现精神沉郁,拉水样白色粪便,剖检可见法氏囊水肿、出血;肾脏出血肿大,有尿酸盐沉淀,呈花斑状;腿肌、胸肌有出血斑点;腺胃与肌胃交界处出血。经病毒分离、鸡胚接种、琼脂扩散试验和细胞接种试验,最后确诊为传染性法氏囊病。同时,采集病料,制备冰冻切片,建立一种检测病料中的IBDV免疫荧光检测方法。

hREV3基因表达被反义阻断的人胚肾细胞系的建立及其某些生物学特性观察

目的：建立 ｈＲＥＶ３基因表达反义阻断的细胞系并观察其生长特性与对烷化剂 Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ’－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）敏感性的改变。方法：利用改良磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法分别将本室构建的持续和诱导表达反义ｈＲＥＶ３ ＲＮＡ的真核细胞重组表达质粒ｐＢＫ－ＲＳＶ－ｈＲＥＶ３和ｐＭＡＭｎｅｏ－ａｍｐ－－ｈＲＥＶ３转染人胚胎肾细胞（ＨＥＫ－２９３细胞），经Ｇ４１８筛选，建立相应的细胞系２９３－Ｂ－ｈＲＥＶ３－和２９３－Ｍ－ｈＲＥＶ３。通过细胞计数方法观察这些细胞系的生长速率和不同浓度ＭＮＮＧ对细胞的细胞毒作用。结果：持续或诱导阻断ｈＲＥＶ３基因的表达对细胞生长速率均无影响；反义阻断细胞系对ＭＮＮＧ的细胞毒作用比母本２９３细胞较为敏感。结论：ｈＲＥＶ３基因的编码产物并非细胞生长所必需而可能在细胞的ＤＮＡ损伤修复中起作用。

高压氧对大鼠短暂脑缺血降钙素基因相关肽和β-内啡肽的影响

目的观察大鼠缺血再灌注损伤时降钙素基因相关肽(CGRP)和β-内啡肽(β-EP)的动态变化,以及高压氧(HBO)治疗对其的影响,并探讨高压氧的治疗机制。方法按随机数字表将SD大鼠分为以下3组:缺血再灌注组(I/R)、高压氧处理组(HBO)及假手术组(sham-O)。除假手术组外,其余各组以四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型,缺血20min。I/R组和HBO组分别于再灌注6h、24h、48h、96h取血,用放射免疫测定法(RIA)测定血浆CGRP和β-EP的质量浓度。结果1)6hHBO组即出现CGRP应激性升高,其CGRP明显高于6hI/R组(P<0.001)和假手术组(P<0.05);HBO组血浆CGRP恢复比相应I/R时相点快(从24h起即恢复至正常);2)96hI/R组CGRP高于假手术组(P<0.01)和6h、24h、48hI/R组(分别为P<0.01或P<0.00001);3)6hHBO组血浆β-EP一过性增高,然后逐渐下降,96hHBO组和96hI/R组血浆β-EP均明显低于假手术组(P<0.05),但96hHBO组和96hI/R组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论早期HBO治疗可通过升高保护性神经肽CGRP和降低β-EP机制,减少缺血脑组织损伤;高压氧治疗的次数越多,疗效越好。

反向遗传学技术及其应用

反向遗传学是直接从遗传物质入手来研究生命现象与规律的,其相应的操作技术已在生命科学研究的各个领域显示出了广泛的应用前景。文章从拯救病毒和创造新型病毒、负股RNA病毒的研究、动植物基因功能的研究以及利用RNA干扰使基因沉默等方面,对反向遗传学技术的应用进行了评述,并对其前景进行了阐述。

应用基因微阵列技术筛选法乐四联症相关基因

目的:观察法乐四联症(TOF)相关基因的表达变化。方法:使用Biostar 80s型人类基因表达谱微阵列初步筛选TOF和室间隔缺损患者右心室心肌的差异表达基因。结合初筛实验、网上孟德尔人类遗传数据库及心脏基因表达数据库的查询结果,遴选补充至500条目标基因。应用3张定制的1000点人类基因微阵列,双重点样,分别筛选TOF(组)25例、不伴有先天心脏畸形的引产胎儿(FETAL组)5例、右室双出口(组)5例、室间隔缺损(组)15例患者,检测右心室流出道肌肉中的差异表达基因,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术验证微阵列结果。结果:用Biostar 80s微阵列发现186条差异表达基因,用定制微阵列则分别发现104条(TOF/FETAL)、13条(TOF/右室双出口)和315条(TOF/室间隔缺损)。剔除结果可能不可靠者(179条),根据差异表达特征,将剩余基因归入14个相关基因群。实时荧光定量聚合酶链反应证实,胰岛素样生长因子结合蛋白3、Ⅰ型胶原α_2链蛋白与Ⅲ型胶原α_1链蛋白3个基因的差异表达与微阵列结果相一致。结论:应用基因微阵列技术进行高通量并行分析,可确定与TOF相关的基因表达谱。胶原家族成员及胰岛素样生长因子结合蛋白3可能与TOF的发生发展过程密切相关。