HPLC-DAD法同时测定鹅不食草中5种黄酮类成分的含量

目的:建立HPLC-DAD法同时测定中药鹅不食草中槲皮素、山奈酚、3-甲氧基槲皮素、芹菜素、蜜橘黄素5种黄酮类活性成分的含量。方法:采用Diamonsil C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.8 ml·min^(-1),检测波长360 nm,柱温30℃。结果:槲皮素、山奈酚、3-甲氧基槲皮素、芹菜素、蜜橘黄素的质量浓度分别在0.002 3~0.093 0μg·μl^(-1)(r=0.999 5)、0.002 2~0.087 0μg·μl^(-1)(r=0.999 6)、0.002 0~0.079 0μg·μl^(-1)(r=0.999 8)、0.000 9~0.037 0μg·μl^(-1)(r=0.999 8)和0.000 8~0.031 0μg·μl^(-1)(r=0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系。槲皮素、山奈酚、3-甲氧基槲皮素、芹菜素、蜜橘黄素的平均加样回收率分别为97.66%、98.33%、98.63%、98.40%和98.10%,RSD分别为1.17%、1.16%、1.10%、1.52%和1.36%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于鹅不食草的质量控制。

鹅不食草化学成分及其抗炎活性研究

目的:研究鹅不食草的化学成分及其抗炎活性。方法:采用柱色谱和制备液相色谱等方法对鹅不食草的80%乙醇提取物进行分离纯化,结合NMR、MS等现代波谱技术对化合物进行结构鉴定;通过检测化合物对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)释放炎症介质NO评价其抗炎活性。结果:从鹅不食草中共分离纯化得到22个化合物,分别鉴定为:蒲公英甾醇醋酸酯(1)、角鲨烯(2)、羽扇烯酮(3)、蒲公英甾醇(4)、无羁萜(5)、蒲公英甾酮(6)、伪蒲公英甾醇醋酸酯(7)、lupeol acetate(8)、β-谷甾醇(9)、9-羟基百里酚(10)、8-hydroxy-9-isobutyryloxy-10(2)-methylbutyryloxythymol(11)、8,10-dihydroxy-9-isobutyryloxythymol(12)、E-pcoumaryl-alcohol ethyl ether(13)、2-hydroxy-4-methy-lbenzoic acid(14)、3-deuteriomethyl-5-methyl-2,3-dihydrobenzofyran(15)、间苯二甲醚(16)、香草酸(17)、ethyl-2-(3,4-dihydroxyphenyl)acetate(18)、5-羟基-6,8-二甲氧基香豆素(19)、吲唑(20)、糙叶败酱碱(21)、5-(hydroxymethyl)-2,4,4-trimethyl-2-cyclohexen-1-one(22)。结论:其中,化合物2、3、5、6、13~22为首次从石胡荽属植物中分离得到,化合物10~15、17、19~22表现出较强的抗炎活性。

鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2生长抑制作用的实验研究

目的:观察鹅不食草不同提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:采用系统溶剂法制备鹅不食草不同提取物,MTT法观察不同浓度的各提取物对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测鹅不食草乙酸乙酯提取物对该细胞的凋亡作用。结果:鹅不食草石油醚和乙酸乙酯提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2有一定的抑制,其中乙酸乙酯提取物抑制作用最明显,呈现较好的剂量-效应曲线,其作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。结论:鹅不食草乙酸乙酯提取物可能是其抗鼻咽癌作用的有效部位之一。

鹅不食草醋酸乙酯部位化学成分的研究

目的研究鹅不食草全草的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、AgNO3硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱和葡聚糖凝胶ToyopearlHW-40F凝胶渗透进行分离、纯化。根据理化性质和现代波谱技术并辅以化学方法进行结构鉴定。结果从鹅不食草醇提取物的醋酸乙酯萃取层中得到9个化合物,分别鉴定为蒲公英甾醇(Ⅰ);β-谷甾醇(Ⅱ);β-胡萝卜苷(Ⅲ);2-(1-羟基丙烷)-4-甲酚(Ⅳ);短叶老鹳草素(Ⅴ);2β-羟基-2,3-二氢-6-O-当归酰多梗白菜菊素(Ⅵ);二氢堆心菊灵(Ⅶ);堆心菊灵(Ⅷ);豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)。结论化合物Ⅳ、Ⅵ为首次从石胡荽属植物中分离得到。

鹅不食草的生药鉴定研究

目的:对鹅不食草药材进行鉴别研究。方法:采用系统的中药鉴定的方法对鹅不食草的性状、组织显微进行研究,并以短叶老鹳草素为对照品对鹅不食草进行薄层鉴别。结果:确定了鹅不食草的药材性状、组织显微鉴别特征以及薄层色谱鉴定方法。结论:首次以短叶老鹳草素为对照品对鹅不食草进行薄层色谱鉴别,与性状、组织显微鉴别综合应用,提高了对鹅不食草鉴别的准确度,方法简单、快速。

鹅不食草总有机酸的提取与分析

目的优化鹅不食草总有机酸提取方法并测定其含量。方法分别采用超声提取法、碱提酸沉法、酸沉后有机溶剂萃取法、有机溶剂加酸水直接提取法等多种方法提取鹅不食草总有机酸,并用分光光度法测定总有机酸含量。结果碱提酸沉法为鹅不食草总有机酸最佳提取方法,总有机酸含量为67.3%。结论碱提酸沉法提取鹅不食草总有机酸的方法可行,分光光度法测定总有机酸含量简便、灵敏。

鹅不食草抗肿瘤活性的研究

[目的]研究鹅不食草的抗肿瘤活性成分。[方法]利用柱色谱和反相HPLC等手段进行分离纯化,应用NMR等方法鉴定结构及进行了MTT法抗肿瘤试验。[结果]从鹅不食草中分离鉴定了化合物1(Dihydrohelenalin)、化合物2(Helenalin)、化合物3(Brevilin-A)、化合物4(Arnicolide C)和化合物5(Arnicolide D),并且均具有一定的抗肿瘤细胞活性。[结论]5个化合物有一定抑制肿瘤细胞生长作用。

鹅不食草生育期矿质元素变化研究

研究鹅不食草生育期对营养元素的需求规律,以期为鹅不食草的施肥和规范化种植提供科学依据。采集8个生长时期的鹅不食草植株,测定各时期植株中9种矿质元素的含量,分析鹅不食草对矿质元素的需求规律。鹅不食草植株中各矿质元素含量在生育期内变化明显,植株中以K含量为最高,之后由高到低的顺序为N>P>Ca>Mg>Fe>Mn>Zn>Cu。鹅不食草生长初期,植株中N、Ca、Mg和Zn含量相对较高;盛花期,植株中P含量达到最大值;结果期,植株中P、Mg、Fe和Mn含量较高。另外,鹅不食草中K与P、N与Mn呈显著负相关(P<0.05),Zn与Mg、Zn与Ca之间呈显著正相关(P<0.05)。鹅不食草在不同时期对矿质元素的需求量不同,应根据生长时期进行施肥,同时,在施肥过程中还应注意元素间的协同、拮抗作用。

鹅不食草总皂苷提取工艺研究

目的研究鹅不食草总皂苷的提取工艺并测定其含量。方法对比微波、超声、回流等3种鹅不食草总皂苷提取方法,并采用正交实验优化所确定提取方法的最佳提取工艺条件,同时用分光光度法测定总皂苷含量。结果回流提取法为鹅不食草总皂苷最佳提取方法,正交实验确定总皂苷最优提取条件:80%乙醇提取2次,每次1.5h,溶剂用量为14倍量。分光光度法测定总皂苷含量达到69.7%。结论回流提取法提取鹅不食草总皂苷的方法可行,分光光度法测定总皂苷含量简便、灵敏。

鹅不食草植物蛋白的纯化与含量测定

目的提取、纯化鹅不食草植物蛋白,并测定其含量。方法采用硫酸铵沉降法提取鹅不食草植物粗蛋白,通过透析、离子交换层析、分子筛层析等方法分离纯化所得粗蛋白。同时利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析蛋白纯化情况,并应用Lowry法测定其含量。结果纯化后的鹅不食草蛋白电泳图谱条带多、清晰,Lowry法测定其蛋白含量高达85%以上。结论鹅不食草植物蛋白的纯化与含量测定方法简便、快捷、准确。为开发利用鹅不食草这一丰富的药用植物资源提供科学依据。

鹅不食草普通粉和超微粉挥发性成分研究

本文利用有机溶剂-水蒸气蒸馏法首次对鹅不食草普通粉和微粉挥发性成分进行对比研究，提取鹅不食草中的挥发成分，用GC-Ms进行测定，色谱柱为HP-5MS5％Phenyl Methyl Siloxane弹性石英毛细管柱（30m×0．25mm×0．25μm），结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定，应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。从鹅不食草普通粉中分离出79个化学成分，鉴定出55个化学成分，检出率为69．6％，其中相对百分含量大于2．0％有9种；微粉中分离出84个化学成分，鉴定出55个化学成分，检出率为65．5％，其中相对百分含量大于2．0％有9种。两种粉末挥发性成分中55种成分相同，其中含量最高的均为乙酸菊花烯酯（38．6％普通粉，39．5％微粉）。

鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖抑制和凋亡诱导作用

考察鹅不食草提取物对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,初步探讨其抗鼻咽癌分子机制。95%乙醇提取鹅不食草全草,噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度提取物在不同时间对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察CNE-1凋亡情况及形态学变化,Western Blot检测CNE-1细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果表明:鹅不食草醇提物能显著抑制CNE-1增殖(P<0.01),并呈现明显的时间-剂量依赖性,其中诱导48和72 h的IC50分别为30.0和25.0μg/mL。阳性对照药顺铂的IC50为0.79μg/mL。Hoechst 33258荧光染色观察发现给药组CNE-1细胞出现不同程度细胞核变圆变亮,核染色质浓缩,产生核小体等明显的凋亡特征。Bcl-2蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而下降,Bax蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而上升,二者与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。鹅不食草醇提物对体外人高分化鼻咽癌细胞CNE-1具有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,其分子作用机制可能与Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调有关。

鹅不食草中倍半萜内酯成分及其抗肿瘤活性的研究

目的从鹅不食草Centipeda minima(L.)A. Br. et Aschers.中分离鉴定具有抗肿瘤活性的倍半萜内酯成分,并评价其抗肿瘤生物活性。方法利用95%乙醇提取,应用正、反相硅胶(RP-C18)柱层析,葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析,制备高效液相等进行分离纯化;运用1H-NMR、13C-NMR和MS等波谱技术对化合物的结构进行鉴定;采用MTT法测试化合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果从鹅不食草中分离得到5个倍半萜内酯化合物,分别鉴定为:短叶老鹳草素(brevilin A)(1)、小堆心菊素C(microhelenin C)(2)、minimolide F(3)、山金车内酯C(arnicolide C)(4)、山金车内酯D(arnicolide D)(5)。化合物1～5对4种肿瘤细胞株[CNE-1(鼻咽癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hela(子宫颈癌)、HepG2(肝癌)]的增殖均有一定的抑制作用,而对正常肝细胞LO2抑制作用较小。其中化合物1、4、5对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2具有较明显的抑制作用,其IC50值均小于10μmol·L-1,与阳性药物顺铂接近。结论倍半萜内酯化合物是鹅不食草抗肿瘤的活性成分,化合物1、4、5对鼻咽癌细胞抑制作用明显,有望成为潜在的抗肿瘤先导化合物,其作用机制值得进一步探索。

鹅不食草总黄酮的提取及对S180实体瘤抑瘤作用的研究

目的研究鹅不食草总黄酮的提取精制工艺,并探讨其抑瘤活性。方法采用正交实验优化乙醇提取工艺条件,同时采用大孔树脂、有机溶剂萃取、聚酰胺色谱等方法对总黄酮粗提物进行精制。最后采用灌胃给药法研究鹅不食草总黄酮的抑瘤效果。结果正交实验确定总黄酮最优提取条件:70%乙醇提取2次,每次2h,溶剂用量为8倍量。精制后总黄酮含量达到76·2%。此外,鹅不食草总黄酮对S180实体瘤抑瘤率达到71·92%。结论鹅不食草总黄酮提取与精制工艺简便、安全、可行。鹅不食草总黄酮对S180实体瘤有明显的抑制作用。

鹅不食草正丁醇部位化学成分研究

[目的]对鹅不食草干燥全草乙醇提取物正丁醇部位的化学成分进行研究,为鹅不食草的系统研究和开发利用提供物质基础。[方法]通过大孔吸附树脂、Sephadex LH-20色谱、ODS柱色谱、薄层色谱和高效液相色谱等现代色谱分离手段对鹅不食草干燥全草的正丁醇部位化学成分进行系统分离,通过对其理化性质及谱学数据的分析,对分离所得化合物进行结构鉴定。[结果]从鹅不食草干燥全草95%乙醇和60%乙醇合并提取物中分离得到了化合物14个,分别鉴定为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(2),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(3),nudicaucins A(4),guaiacin D(5),绿原酸(6),4,5-二咖啡酰奎宁酸-甲酯(7),对羟基苯甲酸(8),水杨酸(9),芥子酸(10),芥子酸甲酯(11),阿魏酸(12),咖啡酸甲酯(13),丁香酸(14)。[结论]化合物1~14均为首次从石胡荽属植物中分离得到。

鹅不食草中抗肺癌活性成分筛选及异戊酸心菊内酯单体的体外作用研究

目的在32个鹅不食草单体化合物中筛选具有抗肺癌活性的有效成分,并探究其单体异戊酸心菊内酯的体外抗肺癌作用。方法 MTT比色法检测化合物对5种人肺癌细胞系的增殖抑制作用,筛选出活性较好的化合物,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测p-ERK、ERK、p-AKT、AKT、NF-κB表达。结果有10种(31.3%)成分在20μmol/L浓度下能使H460、A549细胞的增殖活性抑制15%以上。阿里二醇、6-氧-当归酰多梗白菜菊素、异戊酸心菊内酯在2.5~20μmol/L浓度范围内对肺癌细胞具有较明显的抑制作用,随着化合物浓度的升高,细胞增殖抑制作用增强,诱导肺癌细胞凋亡的作用也增强(P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组比较异戊酸心菊内酯能以浓度依赖性的方式活化caspase-3、caspase-8,使其活化片段表达增高(P<0.01),而caspase-3底物PARP被降解,同时显著抑制了H1975细胞增殖相关蛋白p-ERK、p-AKT及核转录因子NF-κB的表达(P<0.05)。结论鹅不食草含有多种具有抗肺癌活性的成分,能显著抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制p-ERK、p-AKT及NF-κB的表达有关。

鹅不食草氯仿部位的GC-MS分析

用75%乙醇回流提取鹅不食草,滤液浓缩后用氯仿萃取,得到氯仿萃取相,采用气质联用色谱法(GC-MS)对鹅不食草氯仿萃取相进行分离测定,结合计算机检索技术及NIST化合物谱库检索进行鉴定,再用面积归一化法确定其相对含量。鹅不食草氯仿萃取相的成分共分离出36个色谱峰,共鉴定出其中29个化合物,已鉴定出化合物的含量占总含量的82.35%,主要化学成分是2,2-二甲基-4,5-二苯基-2H-吡咯啉,六乙苯,(1-甲基乙基)[甲基(1-甲基乙基)环己基]氯化磷,2-甲基-2-[3-[(乙酰氧基)甲基]-2-环氧乙基]-5-甲苯基丙酸酯,环己基三氯硅烷等。

鹅不食草挥发油研究进展

鹅不食草化学成分复杂,以挥发油的含量所占比例最高。鹅不食草挥发油具有抗炎,抑菌,抗肿瘤,平喘,抗过敏性鼻炎等多种药理作用,本文对鹅不食草挥发油的成分及药理作用研究进展进行了总结,以为进一步的科研和临床新药研究提供依据。

鹅不食草中三萜类化学成分及其抗炎活性研究

目的研究鹅不食草Centipeda minima乙醇提取物中的三萜类化学成分及其抗炎活性。方法运用反复硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、ODS、MCI柱色谱及制备HPLC等多种色谱方法对其化学成分进行系统的分离,利用NMR、MS等现代波谱技术对化合物结构进行鉴定;采用Griess法测定化合物对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)释放炎症介质NO的抑制活性,进而评价化合物的抗炎活性。结果从鹅不食草乙醇提取物中分离得到三萜类化合物17个,结构分别鉴定为20-oxo-30-nortaraxastan-3β-yl acetate(1)、3β-acetoxytaraxaster-20-en-30-al(2)、3β-hydroxytaraxaster-20-en-30-al(3)、蒲公英甾醇(4)、阿里二醇(5)、3β,21β-dihydroxy-20(30)-en-taraxastane(6)、款冬二醇(7)、伪蒲公英甾醇乙酸酯(8)、taraxast-20-ene-3β,30-diol(9)、18α-齐墩果-12-烯-3,11-二酮(10)、马尼拉二醇(11)、3β-羟基-齐墩果-12-烯-11-酮(12)、coflodiol(13)、羽扇豆醇(14)、3β,16β-羟基-羽扇豆二醇(15)、16β-羟基-羽扇豆-20(29)-烯-3-酮(16)、garcinielliptoneQ(17)。化合物2、5~6、8~10、12~13、15~17的抗炎活性筛选结果表明,化合物5、15~17具有较明显的抗炎活性,其半数抑制浓度(IC50)值在11.9~27.1μmol/L。结论化合物1为新天然产物,并首次对其氢谱和碳谱数据进行归属,化合物2~3、6、8~10、12~13、15~16首次从鹅不食草中分离得到,为鹅不食草的临床应用提供理论依据。