三尖杉悬浮细胞的培养及抗癌生物碱的产生

建立三尖杉悬浮细胞培养系统（ＭＳ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．１ｍｇ／Ｌ＋庶糖 ３％）优化培养条件，产生更多的抗癌生物碱。方法：研究不同环境因子：接种量、摇床转速、激素、氮源、碳源、前体及诱导子调控对三尖杉悬浮细胞的生长及三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱产生的影响；以及细胞生长和产物积累的偶联反应。结果：三尖杉悬浮细胞的生长与三尖杉酯类碱的产生呈正相关；接种量、激素与Ｄ－剂（生长素）组合；碳源；前体苯丙氨酸有利于细胞生长及酯类碱的产生。摇床转速；氮源利于细胞生长。激素与ＢＲ（油菜内酯素）的组合；无机氮ＮＯ_３－；蛋白胨；诱导子能显著提高三尖杉酯类碱的含量。结论：择优筛选出有利于三尖杉酯类生物碱的生物、化学、物理因子，是提高悬浮细胞抗癌生物碱的有效途径。

不同培养方式对三尖杉培养细胞中生物碱组成和含量的影响

采用植物组织和细胞培养方法，研究固体和液体培养方式对三尖杉细胞生长及其有效成分组成与含量的影响。结果证实，在ＭＳ基本培养基上生长的三尖杉愈伤组织可以合成较多的三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱，分别为在Ｗｈｉｔｅ、Ｈｅｌｅｒ和６，７Ｖ培养基上生长组织的５６，１４６和２倍。液体培养方式培养的三尖杉细胞的生长速度比固体培养的增加３倍，总生物碱含量增加近１倍，其中具有生物活性的三尖杉酯碱增加５４倍。结论：液体培养方式有利于通过大规模培养技术生产三尖杉培养细胞和抗癌药物。

三尖杉悬浮培养细胞中hinokiol的定量分析

建立了高效液相色谱分析三尖杉悬浮培养细胞中次生代谢产物的方法,实现了次生代谢产物的分离以及hinokiol的定量分析。样品经甲醇提取后,再用氨水-氯仿萃取。采用Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为290 nm,流速为1 mL/min。在0.0125～0.2 g/L范围内,hinokiol的色谱峰面积与质量浓度之间具有良好的线性关系。采用该方法测定了实际样品中hi-nokiol的含量,并进行了3个水平的加标回收试验,其回收率为87.2%～94.7%,相对标准偏差(n=3)为0.9%～4.2%。该方法可靠、重现性好,适合对植物培养细胞中的hinokiol进行分析。

两种植物悬浮培养细胞生物转化青蒿酸的研究

目的:对青蒿酸(Ⅰ)进行生物转化研究,以获得具有新颖结构的青蒿酸衍生物。方法:将青蒿酸投入到对数生长期的三尖杉悬浮培养细胞和黄花蒿悬浮培养细胞中,共培养两天后终止转化,利用TLC及HPLC法对转化产物进行检测,利用硅胶柱,SephadexLH20以及ODS柱层析法分离纯化,利用波谱方法鉴定结构,最后利用HPLC考察共培养时间对转化率的影响。结果:青蒿酸在三尖杉与黄花蒿培养细胞中均发生了生物转化反应,分离鉴定出一个转化产物:3-α-羟基青蒿酸(Ⅱ)。三尖杉悬浮细胞和黄花蒿悬浮细胞转化Ⅱ的最佳共培养时间分别为2d与3d,总的摩尔转化率最高分别为8.42%与3.95%。结论:首次利用三尖杉悬浮细胞和黄花蒿悬浮细胞生物合成3-α-羟基青蒿酸。