一色齿毛菌对活性染料的脱色研究

为进一步鉴定试验菌株及明确一色齿毛菌CB1（Cerena unicolor CB1）对活性染料的脱色效果，在对该菌株ITS序列克隆的基础上，进行了其对活性黑和活性红2种活性染料脱色条件的研究。结果表明，C.unicolorCBl与17个同种其他菌株的ITS序列相似性为93％～99％，说明试验菌株为一色齿毛菌。染料脱色结果表明，250mg／L的活性黑对C．unicolorCBl的脱色产生明显的抑制，而500mg／L的活性红对该菌株的脱色抑制不明显。C．unicolorCBl对活性黑和活性红的脱色最适碳源分别是果糖和葡萄糖；最适氮源分别是尿素和硝酸铵；最适Cu^2＋和Mn^2＋添加浓度都为0．1mmol／L；最适pH为5；最适接种量为直径d=8mm的新鲜菌丝7片。

一色齿毛菌锰过氧化物酶(MnP)活性检测与MnP1基因的克隆

锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,一色齿毛菌MnP最大酶活为18.4 U·L-1。在酶活检测的基础上,为了深入研究MnP降解木质素的功能,根据已知的MnP基因保守区序列设计引物,以一色齿毛菌菌株CB1的基因组DNA为模板,采用染色体步移技术,克隆到该菌株一个编码MnP1蛋白的全长DNA基因(GenBank登录号JQ782578.1),命名为Cu-mnp1。该基因DNA全长4 268 bp,含有16个外显子和15个内含子;其启动子区域含有TATA-Box,CAAT-Box,SP1,AP1,HSE,XRE等多个顺式作用元件;其cDNA基因(GenBank登录号JQ782579.1)编码区长度为1 092 bp,编码363个氨基酸。BLAST比对分析表明,在cDNA水平上Cu-mnp1与猴头菇菌株CB1的mnp2基因的相似性最高为70%。蛋白结构分析表明,Cu-MnP1含有4个二硫键属于短MnP。