宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组分基因表达在宫颈病变中的临床价值

目的:研究宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组分(hTERC)基因的表达,探讨其在宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状上皮细胞癌(SCC)筛查与诊断中的价值。方法:采用宫颈液基细胞学(LCT)、高危型人乳头瘤病毒DNA(HC-Ⅱ)检测及组织病理学的检测,并以组织病理学为金标准,分级盲法使用荧光原位杂交(FISH)方法检测人端粒酶RNA(hTERC)基因的表达。结果:hTERC基因扩增在细胞病理学HSIL及以上病变组扩增率显著升高(P<0.05)。hTERC基因的扩增率与组织病理学级别、HC-Ⅱ阳性率均显著正相关(均P<0.01)。HC-Ⅱ阳性率与细胞学、组织病理学级别均显著正相关(均P<0.01)。结论:在宫颈病变组织中可见hTERC基因的表达、扩增与宫颈细胞学和组织学异常以及HPV病毒感染正相关,hTERC基因的扩增与否可能作为判断有无宫颈高度病变及估计预后的指标之一。

RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究

目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。

hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用

目的探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制。方法将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013pfu/L)、Ad-hTR-siRNA(1013pfu/L)或顺铂(1.20g/L),以后每隔3d注射1次,连续15d。观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用。治疗结束后间隔7d处死动物,剥离出肿瘤组织称重。切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数。结果将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%。与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂。结论hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义

目的：探讨人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义。方法选取2012年10月～2014年10月新疆医科大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者627例，先行液基细胞学检查，后行阴道镜检查并取活检，同时行人乳头状瘤病毒L1壳蛋白检测和人端粒酶RNA基因检测。分析不同病症间临床指标的变异情况。结果未见上皮病变或恶性改变（NILM）、意义不明的不典型鳞状细胞与不典型腺细胞（ASC-US）、不除外高度鳞状上皮内病变的的不典型鳞状细胞（ASC-H）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）、腺癌（AC），人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、42.9%、51.0%、80.6%、47.4%、5.9%、0.0%，差异有高度统计学意义（χ2=93.770，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在LSIL达到最高点，在AC降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、19.9%、36.3%、51.6%、94.7%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=279.564，P〈0.01），呈持续升高趋势，在SCC与AC达到最高点。依正常、炎症、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈癌顺序，人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、46.1%、80.6%、53.3%、25.0%、3.6%，差异有高度统计学意义（χ2=93.015，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在CINⅠ期达到最高点，在宫颈癌降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、26.4%、51.6%、93.3%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=269.582，P〈0.01），呈持续升高趋势，在CINⅢ期达到最高点。结论人乳头状瘤病毒L1壳蛋白联合人端粒酶RNA基因检测，在宫颈癌前病变中具有较高的指导价值。

PSA启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒的构建及生物学活性

目的构建前列腺特异抗原（PSA）启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒，研究其对前列腺癌的特异性抗肿瘤作用。方法EcoRV和Xba1分别酶切pZD55-hTERT-shRNA和pZXC2-PSA-E1A，将目的片段连接重组，获得质粒pPSA-ZD55-hTERT，将其与质粒pBHGE3共转染293细胞。PCR鉴定正确者即为条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT。结晶紫染色观察其对前列腺癌细胞毒性。RT-PCR、Westernblot检测前列腺癌细胞中hTERT基因沉默效果。Westernblot检测E1A在前列腺癌细胞中的表达。结果成功构建PSA启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT，初步证实PSA-ZD55-hTERT复制具有前列腺癌靶向性和特异的hTERT沉默效果。结论成功构建条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT，为进一步体内外研究其对前列腺癌的治疗作用奠定基础。

RNA干扰下调hTERT表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的观察RNA干扰下调人类端粒酶反转录酶(h TERT)表达对宫颈癌He La细胞增殖及侵袭能力的影响。方法针对h TERT基因设计两对siRNA片段,瞬时转染人宫颈癌He La细胞;采用RT-PCR、Western印迹法检测转染后He La细胞h TERT在mRNA水平和蛋白水平的表达变化;PCR-TRAP法检测细胞端粒酶活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;transwell实验检测细胞运动侵袭能力。结果 RT-PCR及Western印迹法结果显示,h TERT-siRNA能有效下调h TERT在mRNA和蛋白水平的表达,抑制效率分别为(85.8±3.26)%、(97.5±3.72)%;RNA干扰下调h TERT基因表达后,He La细胞端粒酶活性抑制效率为75.5%,增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,处于G0/G1期细胞增多,由(58.18±3.76)%上升到(68.97±4.01)%(P<0.05);未处理组细胞凋亡(4.14±0.79)%,h TERT-si-RNA组细胞凋亡(8.1±1.22)%,细胞凋亡率增加(P<0.05)。transwell实验检测结果显示,细胞运动侵袭能力下降约30%(P<0.05)。结论 h TERT-siRNA可有效下调h TERT在人宫颈癌He La细胞中的表达,抑制He La细胞生长并降低其侵袭能力。

人端粒酶RNA组分基因检测在宫颈病变中的应用

目的:研究宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组分(hTERC)基因的表达,探讨其在宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状上皮细胞癌(SCC)诊断中的价值。方法:以2007年12月～2008年12月在中日友好医院行子宫颈癌筛查的138例妇女为研究对象,进行宫颈液基细胞学及组织病理学的检测,以组织病理学不同级别分组,荧光原位杂交方法检测其hTERC基因的表达。结果:病理学确诊为正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌例数分别为20、28、31、34、25例,宫颈脱落细胞hTERC基因的扩增在不同组织病理级别中存在差别:hTERC基因扩增随细胞学级别的升高而升高,随组织病理学级别的增加而升高。结论:hTERC基因的扩增与宫颈细胞学和组织病理学级别密切相关,其扩增率随宫颈病变程度的加重而增加;检测hTERC基因的扩增,可为判断是否发展为宫颈高度病变提供依据。

人宫颈癌基因RNA干扰真核表达载体的构建及其稳定转染胰腺癌细胞株的建立

目的:构建针对人宫颈癌基因2(HCCR2)有效靶点的RNA干扰真核表达载体,鉴定获得干扰质粒稳定转染的人胰腺癌PANC1细胞株.方法:设计并合成多个针对HCCR2基因的RNA干扰序列,并将其插入真核表达慢病毒载体pGCsi-H1/Hygro/NEGative,通过测序和与HCCR过表达载体共转染293T细胞后行Western blot检测,筛选出有效干扰质粒;通过脂质体转染法将该有效干扰质粒pGCsi-HCCR2稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1.抗生素G418筛选获得稳转细胞株;Western blot检测稳转细胞株中HCCR2蛋白表达水平.结果:HCCR2干扰载体和过表达载体共转染293T细胞后Western blot检测结果表明干扰质粒3具有最佳干扰效果,选其作为最终干扰质粒.将该质粒稳定转染至胰腺癌PANC1细胞后,Western blot检测显示,干扰组的PANC1细胞株与空载体组比较,HCCR2蛋白表达水平下调,表明获得HCCR2的RNA干扰质粒稳定转染的PANC1细胞株.结论:成功构建了HCCR2的RNA干扰真核表达载体及其稳定转染的人胰腺癌PANC1细胞株.

靶向hTERT的RNAi载体的构建及其对大肠癌SW-480细胞增殖的影响

目的:构建靶向人大肠癌细胞端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的RNAi载体,探讨其对人大肠癌SW480细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向hTERT的shRNA序列和阴性对照序列,分别克隆入pGPU6/GFP/Neo载体,构建RNAi载体pGPU6-hTERT-1、2、3和阴性对照载体pGPU6-hTERT-NC,转染SW480细胞。RT-PCR检测各组载体对hTERT mRNA表达的影响,MTT法检测下调hTERT mRNA表达对SW480细胞增殖的影响。结果:成功构建3个携带hTERT mRNA序列的重组载体,3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞hTERT mRNA的表达,pGPU6-hTERT-3组SW480细胞hTERT mRNA表达水平较空白对照组下调最为显著(0.347±0.028 vs 0.513±0.032,P<0.01)。转染3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞增殖,pGPU6-hTERT-3组细胞增殖抑制率较空白对照组、脂质体对照组和pGPU6-hTERT-NC组升高最为显著[(50.08±0.43)%vs(4.11±0.39)%、(3.88±0.35)%、(3.38±0.35)%,P<0.05]。结论:转染RNAi载体pGPU6-hTERT-3能够抑制SW480细胞的增殖,其机制可能与降低hTERT基因的表达从而抑制端粒酶活性有关。

纳米板转导HPV18 E7siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的通过纳米板转导HPV18 E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤组织,探讨纳米板转导siRNA的效率及转导的siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法纳米板转导FITC标记的寡聚DNA(代替siRNA)进入小鼠皮肤,观察荧光变化,判断DNA是否被转导进入皮肤细胞中;纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA复合物进入小鼠皮肤,测定转导前后和残留在皮肤上的荧光强度,计算纳米板转导siRNA进入组织细胞的效率;纳米板转导E7 siRNA和脂质体的复合物于转基因鼠皮肤中后,BrDU免疫组化检测siE7对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。结果纳米板转导寡聚DNA后绿色荧光逐渐分散变多,表明DNA已逐渐进入小鼠皮肤细胞中。纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA进入小鼠皮肤后,通过荧光强度计算得出转染率为50.23%。纳米板转导E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤后,能有效抑制宫颈癌细胞增殖。结论纳米板能高效的转导siRNA进入组织细胞,并且转导进入细胞的siE7能有效抑制宫颈癌细胞增殖。

溶瘤腺病毒介导RNA干扰人端粒酶逆转录酶抑制HeLa细胞生长

目的观察表达人端粒酶逆转录酶siRNA(hTERT-siRNA)的溶瘤腺病毒ZD55-TERT-siRNA对体外培养人宫颈癌HeLa细胞生长及hTERT基因表达的影响。方法以溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒AD-TERT-siRNA和增殖缺陷腺病毒AD-EGFP作为对照组。不同滴度四种病毒分别感染HeLa细胞,结晶紫法检测细胞毒作用,MTT法测定细胞生长抑制率;RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学(ICC)法分别检测hTERT的mRNA、蛋白质及抗原表达,Western blot和ICC法分别测定腺病毒E1A蛋白及抗原表达。结果对HeLa细胞的生长抑制作用和细胞毒作用ZD55-TERT-siRNA>AD-TERT-siRNA和ZD55-EGFP>AD-EGFP;ZD55-TERT-siRNA和ZD55-EG-FP感染的HeLa细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD55-TERT-siRNA>AD-TERT-siRNA>ZD55-EGFP、AD-EGFP。结论溶瘤腺病毒介导RNA干扰hTERT能有效抑制HeLa细胞生长及hTERT基因表达。

RNA干涉技术在宫颈癌相关HPV及RARβ2研究中的应用

宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤,其发生与发展是多因素共同参与的结果。除高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的关系密切外,肿瘤抑制基因的表达沉默是十分重要的参与因素,且多为表观调节引起。其中维甲酸受体β2(RARβ2)的表达沉默相当普遍,但上述二者致病的关系不明。RNA干扰(RNAi)是近年来发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术,可以通过在细胞内引入设计的外源双链RNA诱导细胞内特定基因的沉默,从而观察相关生物因子的变化。该文就在有关宫颈癌细胞系中通过RNAi干扰HPV表达观察RARβ2表达及其表观遗传学改变的最新结果进行综述,旨在了解HPV与RARβ2之间的关系,进一步探索对宫颈癌发生机制的认识。

TCT、HPV、h-TERC基因和c-MYC基因联合检测在宫颈疾病筛查中应用价值研究

目的:研究TCT、HPV、h-TERC及c-MYC基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值,借此寻找更为有效且实用的宫颈癌筛查方案。方法:2010年8月至2011年12月就诊于上海交通大学医学院附属仁济医院妇科门诊的患者共1000例,分别进行TCT、HPV、h-TERC、c-MYC基因检测。对以上4种检测结果任一阳性行阴道镜配合宫颈活检,评价4种筛查方案的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数,分析4种检查手段单独或不同排列组合应用于宫颈癌筛查的诊断价值。结果:1000例患者中,TCT异常者占10.6%,HPV异常者占11.2%,h-TERC扩增异常者占6.4%,c-MYC扩增异常者占5.6%。以上4种检测任一阳性者行阴道镜病理活检(共213例),活检结果提示宫颈慢性炎、湿疣样变等良性病变共159例(74.6%),CINⅠ31例(14.5%),CINⅡ14例(6.6%),CINⅢ7例(3.3%),宫颈癌2例(0.9%)。一种筛查方案单独应用时,TCT灵敏度最高(87.0%),其次是HPV(74.1%),但两者的特异度均明显不及h-TERC及cMYC检测。任两种方案联合筛查时:(TCT+HPV)及(TCT+h-TERC)联合检测的灵敏度最高,分别达98.1%和100.0%。TCT异常病例再行h-TERC或c-MYC检测,筛查特异度分别升至88.1%和89.8%,与TCT的单独筛查比较,差异显著(P<0.05)。HPV阳性病例再行h-TERC或c-MYC检测,筛查特异度升至94.44%,差异显著(P<0.05)。结论:TCT和HPV单独筛查时灵敏度最高,h-TERC和c-MYC单独应用于宫颈癌筛查时灵敏度不高,但特异度较理想。TCT或HPV检测联合任一基因筛查方法均能不同程度提高筛查真实性。在TCT和HPV初筛的基础上附加基因筛查能明显降低假阳性率。

沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。

靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒,转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(转染组),设立正常培养乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(阴性对照组)和pSuper-retro-puro质粒转染的乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(空白对照组),利用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,MTT实验及琼脂糖细胞集落形成实验检测细胞增殖能力等。结果成功构建pSuper-retro-puro-TERTRNAi#1、#2质粒并转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,转染后细胞端粒酶活性较转染前明显下调,差异有统计学意义(P<0.005);MTT法检测细胞增殖能力显示,MCF-7及MDA-MB231转染组细胞增殖活性较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂集落形成实验表明MCF-7和MDA-MB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论通过RNAi技术特异性干扰hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性,并可导致细胞增殖能力的减弱,以端粒酶为靶点的基因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法。

Van-Clear和二甲苯在荧光原位杂交技术检测宫颈hTERC基因中的应用

目的:观察Van-clear(环保透明脱蜡液)替代二甲苯(传统透明脱蜡液)在荧光原位杂交技术检测宫颈组织中人端粒酶核糖核酸组分(human telomerase RNA component,h TERC)基因扩增中的结果,探讨其替代二甲苯的可行性。方法:收集2005年1月至2015年2月于中山市博爱医院妇科住院部送检的278例宫颈组织标本。包括正常组81例,宫颈上皮内瘤变(cer v ical intraepithelial neoplasia,CIN)1级组68例,CIN2级组57例,CIN3级/原位癌组42例,宫颈浸润癌组30例。同一病变部位取材2块,分两组,一组采用二甲苯透明制作切片278张;另一组采用Van-clear透明制作切片278张。采用荧光原位杂交技术检测两组宫颈活检标本中h TERC基因的扩增变化情况。结果:两组间对应的各级宫颈病变中,h TERC基因阳性表达率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:用VanClear替代二甲苯对荧光原位杂交技术检测宫颈组织h TERC基因阳性表达率无明显影响,Van-clear作为环保产品,在荧光原位杂交技术检测宫颈h TERC基因中有一定的推广应用价值。

维、汉妇女宫颈癌患者感染HPV亚型和TERC基因扩增的关系

目的探讨新疆地区维吾尔族、汉族妇女宫颈癌感染人乳头瘤病毒(HPV)不同亚型及人染色体端粒酶基因(TERC)扩增差异。方法采用导流杂交基因芯片技术检测维吾尔族和汉族各200例宫颈癌患者的21种HPV亚型感染的分布情况。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测23例维吾尔族和22例汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增的情况。结果①维、汉族宫颈癌的HPV感染谱不同。维吾尔族宫颈癌中HPV高危亚型感染排序由高到低主要是:HPV16、58、18、52和31等亚型;而汉族宫颈癌的排序是:HPV16、31、58、18和52等亚型。②维吾尔族宫颈癌中HPV亚型多重感染者为43例,占21.83%;汉族宫颈癌组织中多重感染者为27例,占13.78%(P<0.05)。③维、汉族宫颈癌TERC基因平均扩增倍数,在HPV各亚型感染组间差异无统计学意义,但在各族患者中HPV多重感染和单一感染其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论维吾尔族宫颈癌患者HPV高危亚型多重感染较汉族高;在各族患者中多重HPV高危亚型感染较单一亚型感染者有更多TERC基因扩增。

自然人群子宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组份基因的表达及临床意义

目的调查深圳市人群宫颈脱落细胞中人端粒酶RNA组份（hTERC）基因的表达，探讨其与人乳头瘤病毒（HPV）感染、宫颈脱落细胞学异常及宫颈上皮内瘤变（fiN）之间的关系。方法以深圳市某社区30—59岁智力正常的妇女388人为研究对象，同步进行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查、HC-Ⅱ法高危型HPV（HR-HPV）检测和荧光原位杂交（FISH）法hTERC基因检测。对于细胞学为ASCUS及以上病变，及／或HR—HPV阳性者，及／或hTERC有扩增者均行阴道镜下宫颈四象限多点活检并病理诊断。结果经病理确定CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌例数分别为55（14．18％）、4（1．03％）、9（2．32％）和1（0．26％），宫颈脱落细胞的hTERC扩增率为8．76％。hTERC扩增在有／无HPV感染及不同细胞、组织学类型者存在差别：（1）HPV阳性率为17．01％；hTERC扩增在HPV阳性与阴性组分别为19．70％与6．52％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）hTERC扩增在细胞学无宫颈上皮内瘤变（NILM）组为5．97％、ASCUS18．75％、LSIL10．00％、ASC—H66．67％、HSIL100．00％；在HSIL及以上病变组扩增率明显升高（P〈0．01）。（3）在宫颈活检组织学正常／炎症的妇女中无一例出现hTERC扩增（0／11），组织学为不同程度宫颈病变妇女的扩增率分别为CINⅠ5．45％、CINⅡ50．00％，CINⅢ77．78％、浸润癌100．00％；CINⅡ及以上病变妇女的扩增率明显升高（P〈0．01）。结论hTERC的扩增与宫颈细胞学和组织学异常密切相关，其扩增率随宫颈病变程度的加重而增加，hTERC扩增与否有可能作为判断有无高度宫颈上皮内瘤变及估计预后的指标之一。

RNA干扰沉默hTERT基因对大肠癌SW480细胞生物学特性的影响

目的观察人端粒酶催化亚单位（hTERT）基因对SW480细胞生物学特性的影响方法将重组质粒pGPU6／GFP／Neo—hTERT—shRNA（hTERT—shRNA）用脂质体转染法导人大肠癌自胞株SW480，实验分4组，每组设3个复孔，分别于转染后24、48、72h，逆转录一聚合酶链反压（RT．PCR）检测hTERTmRNA的表达，免疫细胞化学法检测hTERT蛋白表达，PCR—TRAP-ELISA{；检测端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞周期分布，终端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标自（TUNEL）法和透射电镜观察细胞凋亡变化及共聚焦显微镜观察线粒体膜电位（MMP）的改变。结；转染后48hhTERT．shRNA组hTERTmRNA相对表达量为0．32±0．03，hTERT蛋白表达的平均灰月值为209．604-17．10，端粒酶A450～A630值为2．242±0．284，较其他对照组均明显降低（P〈0．05P〈0．01）；G0／G1期细胞为（49．374-1．63）％，增殖指数为（50．60±1．57）％，凋亡指数为22．2％，莲其他对照组均明显增高（P〈0．05，P〈0．01）；凋亡细胞体积明显缩小，表面突起和微绒毛减少，甚!消失，线粒体Rhodamine123平均荧光强度为719．994-17．08，MMP水平显著下降（P〈0．01）。结tRNA干扰（RNAi）沉默hTERT基因能有效抑抑制SW480肿瘤细胞生长，并降低端粒酶活性，诱{肿瘤细胞凋亡。

宫颈病变中hTERC的表达

目的:探讨人类染色体端粒酶RNA(hTERC)在宫颈病变中的表达。方法:荧光原位杂交(FISH)法检测8例宫颈癌,28例CINⅢ,10例CINⅡ,6例CINⅠ及25例慢性宫颈炎组织中hTERC的表达情况。结果:hTERC在慢性宫颈炎组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.0%、16.7%、20.0%、71.4%和100.0%,与病变程度呈正相关(r=0.631,P<0.01),各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:hTERC的阳性表达率与宫颈病变程度密切相关,提示其在宫颈癌的发生发展中起着重要作用。