夜香树提取物体外抗肿瘤作用的实验研究

为探讨夜香树(CN)不同提取物体对体外培养的肿瘤细胞的作用,采用系统溶剂法提取CN皂苷和多糖,采用MTT法、细胞集落形成法、生长曲线法观察CN皂苷和多糖对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404的生长抑制情况,结果发现CN皂苷和多糖对人胃癌细胞株SGC7901、宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株Bele7404、等3种肿瘤细胞均有明显的抑制作用:在终浓度为62.5μg/mL范围,CN皂苷和多糖对上述3种肿瘤细胞的抑制率均大于80%,细胞抑制率均有明显的剂量依赖性,IC50均小于20μg/mL。CN皂苷和多糖对宫顶癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404细胞有显著的抗增殖作用,其抗增殖作用呈明显的剂量依赖关系。

夜香树提取物体内抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察夜香树提取物小鼠体内抗肿瘤作用。方法:以S180肉瘤H22肝癌作为实验瘤株,观察夜香树提取物中正丁醇部位、多糖部位对S180小鼠肉瘤抑瘤率,对H22腹水型肝癌进行肿瘤生存期试验。结果:夜香树提取物正丁醇部位和多糖部位明显抑制S180和H22小鼠体内肿瘤的发生和发展,剂量30、20、15 mg/kg的抑瘤率分别为52.30%、46.75%、42.28%和43.19%、37.96%、31.82%;夜香树提取物正丁醇部位和多糖部位能显著提高H22腹水瘤小鼠的生命延长率,生命延长率分别达到116.43%、44.52%、20.54%和109.52%、112.61%、115.01%。夜香树提取物正丁醇部位抑瘤作用与剂量呈正相关关系,而多糖部位抑瘤效果与剂量关系不明显。结论:夜香树提取物体内试验能延缓荷瘤小鼠的瘤体生长,明显延长荷瘤小鼠的生存期。

夜香树花甾体皂苷诱导K562细胞凋亡机制研究

目的研究夜香树花甾体皂苷对人白血病细胞K562的增殖抑制作用和凋亡诱导影响。方法用MTT法检测夜香树花甾体皂苷对K562细胞的增殖抑制作用;Wright's染色观察细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。Annexin V/PI双标记法、TUNEL法检测细胞凋亡特点;采用Western blotting法检测Caspase-3、线粒体和胞浆中细胞色素C表达。结果夜香树花甾体皂苷对K562细胞生长具有显著的抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,夜香树花甾体皂苷可阻滞K562细胞周期于G0/G1期,经夜香树花甾体皂苷处理后的K562细胞Annexin V+/P-细胞显著增加,TUNEL细胞涂片可见强烈荧光效应。夜香树花甾体皂苷可诱导K562细胞线粒体细胞色素C释放和Caspase-3活化。结论夜香树花甾体皂苷可有效抑制K562细胞增殖,诱导K562细胞凋亡,与作用剂量和作用时间呈正相关,这一过程可能与夜香树花甾体皂苷损伤线粒体和激活Caspase-3有关。

夜香树叶甾体皂苷的体外抗肿瘤活性

目的分离并鉴定夜香树叶的甾体皂苷并测试其抗肿瘤活性。方法运用反复硅胶柱层析的方法对夜香树叶正丁醇部位进行分离纯化,以LC-MS光谱数据确定其结构;采用MTT法评估分离物对3种肿瘤细胞株的毒性。结果从夜香树叶的正丁醇部位中分得3个化合物,化合物1为spirost-5-ene-23-diol[2α,3β,25R]3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl{(3→1)-β-D-xylopyranosyl}(1→4)-β-D-galactopyranoside;化合物2为spirost-5-ene-3-diol[3β,25R]3-O-[{α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)}-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside;化合物3为spirost-5-ene-23-diol[2α,3β,25R]3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-xylopyr-anosyl}(1→4)-β-D-galactopyranoside。3种皂苷均可以抑制肿瘤细胞BEL7404、HeLa和A549细胞的生长,并呈现一定剂量依赖关系和时间依赖关系。结论夜香树甾体皂苷体外对3种肿瘤细胞的抑制作用强度可能取决于鼠李糖苷和吡喃葡萄糖苷的数量与甾体皂苷3号碳上的连接方式。

夜来香SAMT基因的分离与原核表达

为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。

夜香树均一化全长cDNA文库的构建及EST分析

为构建高质量的夜香树(Cestrum nocturnum)均一化全长c DNA文库,以其花朵为材料,采用DSN均一化技术与改进的SMART技术相结合,将连接产物进行脱盐浓缩后电转化进行构建。结果表明,未脱盐连接产物的转化效率为1μL连接产物有7000个菌落,理论重组率为96%;脱盐后,提升为4.1×106个菌落,理论重组率为98%;蓝斑也有插入片段,实际重组率应为100%;插入片段大小平均为1.6 kb。随机挑取500个单克隆(含50个蓝斑)测序,共获得464条EST,单一序列(unigene)为426条,占91.8%,其中片段重叠群26个,单基因400个,冗余率仅为8.1%,表明构建文库的均一化效果较好,可满足后续功能基因的筛选和基因信息的研究。

夜香树鲜花香气挥发物成份研究

夜香树(Cestrum nocturnum L.)是茄科夜香树属植物,又名洋素馨,夜来香,为热带植物,主要分布于南美洲,我国福建,广东。

夜香树DXS2基因的克隆与表达分析

[目的]克隆夜香树(Cestrum nocturnumL.)萜类香气物质代谢途径关键限速酶DXS2(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase 2)基因全长cDNA,并对该基因进行生物信息学分析,检测该基因在开花不同时间及叶片中表达量的动态变化。[方法]采用RTPCR与RACE相结合的技术,获得夜香树DXS2的全长核苷酸序列,并进行生物信息学分析,qRT-PCR分析其在盛花期不同时间花和叶中的表达量。[结果]获得CnDXS2基因全长序列2 370 bp,其中ORF 2 145 bp,编码714个氨基酸,含DXP-synthase-N、TPP-PYRDXS-TK-like和Transketolase-C等保守结构域,与绒毛状烟草(Nicotiana tomentosiformis L.)DXS2蛋白同源性达93%,推测属于Ⅱ类DXS蛋白;qRT-PCR分析表明,CnDXS2在叶中表达量总体高于花,花中22∶00表达量最高,14∶00表达量最低,具有节律性。[结论]萜类MEP代谢途径基因CnDXS2的克隆与表达分析为从分子方面揭示CnDXS2基因在萜类香气代谢途径中的功能提供了依据,有助于夜香树花香萜类代谢途径基因功能和花香基因工程的研究。

夜香树花期荧光定量PCR内参基因的筛选

为筛选夜香树(Cestrum nocturnum L.)香气释放、生物钟等相关基因表达研究适用的内参基因,本研究采用夜香树盛花期叶片和花为实验材料,利用同源克隆和RACE技术,获得了夜香树6种经典的内参基因序列,分别为:Actb7、EF-1A、GAPDH、TUA、TUB2、UBQ;采用荧光定量PCR方法对18s rRNA和这6个内参基因的表达模式进行了分析,并通过Bestkeeper、ge Norm、Norm Finder 3种程序分析了内参基因的稳定性。结果表明,在花中,Actb7表达最稳定;在叶片中,EF-1A和UBQ的表达比较稳定;在2种组织中,EF-1A的表达相对稳定。3组稳定性分析中,ge Norm程序确定的最佳内参基因数目均为2,最佳内参基因组合均为Actb7/EF-1A。本研究通过对稳定内参基因的筛选,以期为准确检测夜香树盛花期花瓣节律运动、香气释放、生物钟变化等相关基因的表达研究奠定基础。

夜来香根茎水提取液局部麻醉作用的研究

目的 :研究夜来香 (CN)根茎水提取液的局部麻醉作用及其作用机制。方法 :采用蟾蜍离体坐骨神经动作电位法、豚鼠皮丘法、椎管麻醉法、表面麻醉法。结果 :2 0 %的CN水提取液对蟾蜍离体坐骨神经动作电位可完全消失 ,但较 1%的普鲁卡因稍弱。豚鼠皮丘实验表明 ,2 0 %CN提取液有浸润麻醉作用 ,其浸润麻醉效果与 1%的普鲁卡因相似 ,而且盐酸肾上腺素可增强其麻醉强度和明显延长局麻作用时间 ;家兔椎管麻醉实验表明CN提取液有明显的椎管麻醉作用 ;CN提取液对家兔角膜也有一定的表麻作用 ,只是作用强度及持续时间比 1%的普鲁卡因稍弱或稍短。结论

夜来香Dof基因及其启动子的克隆

为探究夜来香生物钟的调控机制,本研究从花瓣均一化cDNA文库EST序列中获得Dof基因的部分cDNA序列,通过RACE获得Dof基因的全长cDNA,命名为CnDof,在此基础上,采用APA-Genomic walking技术,分离获得该基因的启动子,启动子长度为2 054 bp,通过在线软件PlantCare分析顺式作用元件。结果表明:该基因全长cDNA为2 087 bp,ORF为1 530 bp,编码一条含510个氨基酸的多肽链,在该多肽链的N端有典型Dof结构域,可初步推断,该基因是Dof的同源基因;所获得的启动子中含有大量与光反应相关的元件,可初步推测,Dof基因可能参与夜来香生物钟的调控。

对夜来香生物活性的研究

[目的]为研制和开发夜来香源绿色农药、夜来香多功能产品提供依据。[方法]采用超声波提取获得夜来香乙醇提取液,研究提取液对果蝇的熏蒸作用、驱避作用和触杀作用。[结果]果蝇在夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液中经过1 h的熏蒸,全部死去,说明夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液对果蝇有较好的驱避作用,30 min内驱避效果达100%。夜来香稀溶液和夜来香乙醇提取液对果蝇的触杀作用都很弱,触杀效果仅为10%。在受到夜来香乙醇提取液和夜来香稀溶液的熏蒸时,果蝇有局促不安的症状,并渐渐失去活力直至死亡,30 min内熏蒸效果达100%。[结论]夜来香对果蝇有较好的熏蒸作用和驱避作用,但触杀作用较弱。

两种香花植物叶、花提取物抑菌活性的研究

研究桂花、夜来香两种校园常见香花植物叶、花乙醇提取物对不同微生物的抑菌作用,结果表明:桂花、夜来香花提取样品的抑菌效果均要比叶的好,它们对不同微生物种类的抑菌能力强弱不同。总体上,夜来香叶、花不同提取样品对不同菌种的抑菌效果要强于桂花。

夜来香正丁醇提取物的中枢抑制作用

目的 :研究夜来香正丁醇提取物的中枢抑制作用。方法 :观察夜来香正丁醇提取物对小鼠自发活动和戊巴比妥钠阈上和阈下催眠剂量对小鼠睡眠时间的影响。结果 :夜来香正丁醇提取物对小鼠自发活动有明显抑制作用 ,能加速戊巴比妥钠的入睡和延长其睡眠时间 ,与戊巴比妥钠有协同的中枢抑制作用。结论 :夜来香正丁醇提取物有明显的中枢抑制作用。

夜香树提取物Nocturnoside B对阿霉素诱导的大鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的观察夜香树提取物Nocturnoside B对阿霉素诱导大鼠心肌损伤的的保护作用及可能的作用机制。方法从夜香树叶和嫩枝用正丁醇提取、分离并鉴定化合物Nocturnoside B。用阿霉素诱导建立大鼠的心肌损伤模型后,把大鼠分为4组,分别为对照组、阿霉素组、Nocturnoside B大、小剂量组。通过观察大鼠一般状态、腹水以及大鼠死亡率情况,观察Nocturnoside B对大鼠血清心功酶的影响,用透射电镜观察各组大鼠心肌的超微结构;用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率、ELISA法检测心肌组织中凋亡相关基因蛋白激酶B(Akt)和糖原合成激酶3β(GSK-3β)的表达。结果 Nocturnoside B可以改变阿霉素致心肌损伤的一般状态。Nocturnoside B组动物死亡率和腹水量明显减少,高剂量组血清乳酸脱氢酶(LDH)水平比阿霉素组明显降低,电镜下Nocturnoside B组大鼠心肌细胞结构基本完好,肌节排列基本正常,心肌细胞凋亡指数明显减少(P<0.01),与对照组相比,阿霉素组Akt明显增高,GSK-3β明显降低;与模型组组相比,Nocturnoside B组Akt明显降低,GSK-3β明显增高。结论 Nocturnoside B对阿霉素致心肌损伤具有保护作用,其机理可能通过作用于Akt/GSK-3β信号通路抑制心肌细胞凋亡来实现的。

夜香树提取物对小鼠白血病L1210细胞生长的抑制作用

目的探讨夜香树不同提取物对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、平板集落法和Hoechst33258荧光染色法观察夜香树提取物对L1210细胞的生长抑制和凋亡的影响。结果夜香树提取物中正丁醇提取物和多糖提取物对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用,在终浓度为62.5μg.ml-1范围,其正丁醇提取物和多糖提取物对L1210细胞的抑制率大于90%,IC50均小于10μg.ml-1,夜香树正丁醇和多糖提取物能抑制L1210细胞集落形成,并可诱导L1210细胞发生凋亡。结论夜香树提取物对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制可能通过诱导L1210细胞发生凋亡而发挥作用。

用薄层层析法测定洋素馨中香精油含量

用硅胶 GF2 54薄层板进行层析 ,用薄层层析扫描仪以紫外吸收扫描方式进行扫描 。

夜来香花提取物对肝癌H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长及凋亡的影响

【目的】研究夜来香花提取物对肝癌H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长及凋亡的影响。【方法】接种H_(22)瘤细胞悬液于小鼠左前支腋窝皮下进行造模,设生理盐水为阴性对照组、环磷酰胺为阳性对照组,治疗组为夜来香花提取物小剂量组、中剂量组、大剂量,共设5个组,连续灌胃给药,处死荷瘤小鼠,剥出小鼠右腋下的瘤块,称量瘤块重量,计算瘤块抑制率;采用流式细胞检测仪检测其对肝癌H_(22)细胞周期和细胞凋亡的影响。【结果】夜来香花提取物小剂量组、中剂量组、大剂量组的抑瘤率分别达到29.10%、40.17%、50.85%,差异均有统计学意义,抑制肿瘤生长作用与剂量呈正相关;大剂量组对肝癌H_(22)细胞周期影响明显,凋亡率较高,为33.5%,可能是通过阻断H_(22)细胞由G_(0)/G_(1)期进入S期,从而诱导细胞凋亡。【结论】夜来香花提取物可有效抑制小鼠肝癌H_(22)细胞的生长增殖,并诱导其凋亡。

夜香树CnDXR与CnDXS1基因的克隆与表达分析

本研究从转录水平和生化水平,阐明夜香树释香过程中萜类物质的变化规律和生物合成的分子机制,为夜香树萜类生物合成途径和夜香树花香基因工程的研究提供借鉴。结果如下:(1)采用RT-PCR与RACE相结合的技术克隆并筛选了2个夜香树花香萜类物质代谢途径关键限速酶基因的全长cDNA,分析CnDXR和CnDXS1在花和叶中24 h内相对表达量变化规律,结果表明:在花中,2个基因的表达均具有一定的节律性,18:00后,花中2个基因相对表达量均呈现上升趋势,接近6:00时,相对表达量呈现下调趋势;在叶中,CnDXR相对表达量变化较小,CnDXS1夜间相对表达量总体高于白天。(2)利用已克隆的部分萜类代谢途径关键限速酶基因ORF区构建植物过表达载体,用农杆菌介导的叶盘法获得过表达k326植株,初步验证这些基因在萜类物质代谢中的功能:CnDXS1基因过表达植株叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素合成量偏低,CnDXR过表达烟草生长状况好于对照,叶绿素a、类胡萝卜素高于对照。

夜香树3种甾体皂苷对人肝癌细胞株BEL-7404增殖抑制作用机制研究

目的:探讨夜香树3种甾体皂苷(SSCN)对肝癌细胞株BEL-7404增殖抑制作用及其机制。方法:夜香树叶用有机溶剂提取并鉴定3种SSCN,体外培养BEL-7404细胞,采用细胞集落形成法体外测定SSCN对人肝癌细胞株BEL-7404增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率变化;单细胞凝胶电泳(SCGE)分析细胞DNA损伤;用质粒PBR322解旋反应观察SSCN对肿瘤BEL-7404细胞拓扑异构酶Ⅱ的影响。结果:3种SSCN对肝癌细胞BEL7404有明显的抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,流式细胞仪分析结果显示,G0/G1和G2/M期细胞数增多,S期减少,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。SSCN可以引起DNA损伤,对TopoⅡ活性有抑制作用,可抑制TopoⅡ介导的质粒DNA超螺旋的解旋。结论:SSCN对BEL-7404细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能是:①阻滞细胞于G2/M期,最终导致细胞死亡。②损伤DNA,造成DNA双链断裂。③抑制Topo II的催化活性,使DNA超螺旋增加。