腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统在Cfos启动子调控下对胶质瘤细胞的杀伤作用

目的 构建人Cfos启动子调控的单纯疱疹病毒（HSV）-胸苷激酶（TK）自杀基因重组腺病毒载体,观察其介导的HSV-TK/更昔洛韦（GCV）系统对胶质瘤细胞的杀伤作用. 方法 构建重组腺病毒载体Ad-Cfos-TK-IRES-hr绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP,转染至HEK293细胞获得重组腺病毒Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP、Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP,荧光计数法检测病毒滴度;将病毒感染U251、U87细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达.将病毒感染U251、U87细胞,24 h后加入1000、100、10、1、0.1、0.01、0μmol/L GCV作用48 h,CCK-8法检测各组细胞抑制率. 结果 成功构建重组腺病毒载体pDC315-CMV-TK-IRES-hrGFP、pDC315-CFOS-TK-IRES-hrGFP.荧光计数法检测显示2种腺病毒滴度均达1＆#215;1010 PFU/mL.在病毒感染复数（MOI）为100、GCV浓度为1、10、100、1000 μmol/L时,转染Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP组U251细胞抑制率分别为（24.18±6.01）％、（30.39±9.67）％、（57.07±9.29）％、（94.50±3.48）％,转染Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP组U87细胞细胞抑制率分别为（9.78±2.24）％、（86.33±5.06）％、（98.48±0.79）％、（98.76±0.93）％. 结论 腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统在Cfos启动子调控下在体外可以有效杀伤胶质瘤细胞.