ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控

背景:胆碱能抗炎通路广泛参与类风湿关节炎发生发展,然而胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)/烟碱型乙酰胆碱7受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控机制研究未见报道。目的:探究类风湿关节炎发病中ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径的免疫调控机制。方法:取32只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组,每组8只:除健康对照组外,关节炎模型组、迷走神经切断组和假手术组均采用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全/不完全佐剂构建关节炎大鼠模型,造模成功后,迷走神经切断组切断颈部左侧迷走神经,假手术组仅分离迷走神经。术后5周,检测各组大鼠体质量、关节炎评分和关节肿胀度、脾脏及关节病理变化,ELISA检测血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR及Western blot、免疫组化检测ChAT/α7nAChR/核因子κB通路核心基因mRNA及蛋白表达。结果与结论:①与健康对照组相比,关节炎模型组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.01),踝关节肿胀度加重,关节间隙减小伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大增多,血清白细胞介素、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;②与关节炎模型组和假手术组相比,迷走神经切断组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.05,P<0.01),踝关节肿胀度加重伴畸形,关节间隙消失伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大融合,血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;③结果提示,迷走神经通过调控胆碱能抗炎通路刺激ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径,进而参与类风湿关节炎的疾病进程,提示胆碱能抗炎通路可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标。

PNU-282987对颞叶癫痫模型大鼠认知功能的影响及机制

目的研究特异性α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU-282987对颞叶癫痫(TLE)模型大鼠认知功能的影响及机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、PNU-282987组(3 mg/kg)和甲基牛扁亭(MLA)+PNU-282987组(6 mg/kg MLA+3mg/kgPNU-282987),每组15只。除对照组之外,其余各组大鼠均制备TLE模型。造模成功后,各组大鼠腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续2周。观察大鼠癫痫发作行为并进行评分,记录发作持续时间;检测大鼠认知功能;观察海马组织CA1区神经元病理学形态;检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β水平;检测海马组织中离子钙接头蛋白1(IBA-1)阳性表达和α7nAChR、核因子κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。结果与模型组比较,PNU-282987组大鼠癫痫评分和发作持续时间,海马组织中IBA-1阳性细胞数量和TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著减少/降低(P<0.05);逃避潜伏期时间显著缩短(P<0.05),原平台象限停留时间及穿越平台次数均显著增加(P<0.05);海马组织CA1区神经元损伤明显减轻;海马组织中α7nAChR蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与PNU-282987组比较,MLA+PNU-282987组大鼠上述指标均显著逆转(P<0.05)。结论PNU-282987可改善TLE模型大鼠的认知功能障碍,其机制可能是通过激活α7nAChR/NF-κB信号通路,抑制小胶质细胞介导的炎症反应,进而减轻海马神经元损伤。

凉膈散经胆碱能信号通路拮抗LPS所致小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的作用机制研究

目的研究清热泻火经典方剂＂膈散（LGS）拮抗LPS所致小鼠巨噬细胞RAW 264.7损伤的作用机制.方法采用MTT法评价LGS对RAW 264.7细胞的毒性.用LPS（1mg·L^-1）刺激RAW 264.7细胞产生炎症,并用ELISA法检测LGS对LPS诱导产生的炎症因子TNF-α、IL-6的影响.采用Westernblot、免疫荧光、EM-SA法检测LGS对LPS刺激RAW 264.7细胞所致NF-κBp65入核的影响.采用Westernblot检测LGS对α7nAchR蛋白表达的影响以及α7nAchR抑制（α7nAchRsiRNA、α7nAchR抑制剂甲基牛扁碱）或激动（α7nAchR激活剂PUN282987）后,LGS对NF-κB相关蛋白表达的影响.结果LGS在非毒剂量（25～400mg·L^-1）下就可明显抑制LPS诱导产生的炎症因子TNF-α和IL-6、IκB-α和NF-κBp65的磷酸化、NF-κBp65入核以及提高α7nAchR蛋白表达.并且α7nAchR抑制或激动后,LGS对IκB-α、NF-κBp65磷酸化的抑制作用将减弱或增强.结论LGS经乙酰胆碱抗炎通路关键蛋白α7nAchR调控NF-κB相关蛋白表达,从而拮抗LPS诱导的炎症反应.

雷公藤多苷调节胆碱能抗炎通路改善胶原诱导性关节炎

目的:探索雷公藤多苷对胶原诱导性关节炎大鼠胆碱能抗炎通路及关节损伤的影响。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、激动剂组、抑制剂组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组、益肾蠲痹丸组。除正常对照组外其余各组均用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂制备类风湿关节炎模型,分别用生理盐水、PNU-282987、α-银环蛇毒素、甲氨蝶呤、雷公藤多苷、益肾蠲痹丸等药物进行干预。HE染色观察大鼠关节损伤情况,检测大鼠α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达,并评估大鼠NF-κB及JAK2/STAT3通路活性(检测NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65 DNA结合活性、JAK2、STAT3、磷酸化STAT3、TNF-α、IL-6、IL-17、HMGB1的水平)。结果:与正常对照组比较,模型组及抑制剂组大鼠关节存在明显病理损伤,α7nAChR蛋白表达显著降低(P<0.05),NF-κB及JAK2/STAT3通路过度激活(P<0.05)。与模型组比较,雷公藤多苷组大鼠关节破坏减轻,α7nAChR蛋白表达显著增加(P<0.05),NF-κB及JAK2/STAT3通路活性显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤多苷可调节胶原诱导性关节炎大鼠胆碱能抗炎通路,改善其关节损伤。