CHAC1在膀胱尿路上皮癌恶性进展中的潜在作用

目的 探究CHAC1在膀胱尿路上皮癌(BLCA)中的生物学特征及其临床相关性。方法 从肿瘤基因组图谱和人类蛋白质图谱等数据库获取CHAC1的原始数据,应用R软件、MEXPRESS平台和TISIDB平台,对CHAC1在BLCA中的潜在作用进行基因表达分析、生存分析、基因拷贝数变异及甲基化分析、基因富集分析、免疫浸润分析。结果 与正常组织相比,CHAC1在多种肿瘤组织中异常表达(P<0.05),尤其在BLCA中呈现高表达(P<0.001);CHAC1高表达预示着BLCA的不良预后,且与CHAC1低甲基化水平有关;CHAC1富集分析发现其参与了包括氨基酸代谢、GSH代谢等多种代谢相关的生物学过程;CHAC1在BLCA中的表达水平与多种免疫细胞的过度浸润有关,包括树突状细胞,活化的树突状细胞,中性粒细胞,巨噬细胞,调节性T细胞,Th1细胞,Th2细胞,B细胞和NK CD56dim细胞。结论 CHAC1可能成为评估BLCA预后和调节免疫浸润水平的潜在生物标志物和治疗靶点。

斑马鱼chac1基因的表达特征及其在髓系造血中的功能研究

为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能,本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3 dpf(days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量;qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示:chac1是母源基因,在受精后0~3 hpf(hours post fertilization)时其表达量较高,之后随着母本基因的影响逐渐变小,chac1的mRNA表达量下降;在斑马鱼成鱼中,其在肌肉、卵巢、脑中高表达;此外,突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比,其苏丹黑染色阳性信号更多;chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上,chac1为母源基因,其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。

CHAC1对肺癌细胞铁死亡的调控及其机制研究

目的本研究旨在探讨CHAC1对肺癌细胞铁死亡的调控及其作用机制。方法以人肺癌A549细胞为研究对象,通过外源性转染CHAC1的过量表达载体,调控CHAC1的表达,同时给予铁死亡诱导剂Erastin,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)法检测细胞铁死亡情况;通过细胞平板集落形成实验检测细胞铁死亡情况;通过流式细胞仪分析细胞周期。结果上调CHAC1的表达,可使肺癌细胞生长能力下降,与对照组细胞相比,具有统计学意义(P<0.05)。与转染空载体的对照细胞系相比,转染小干扰RNA细胞其克隆形成数明显下降(P<0.05)。与对照A549/对照细胞[G_0/G_1期(51.2±1.1)%;S期(36.4±0.8)%;G_2/M期(11.4±1.4)%]相比,稳定转染A549/CHAC1过表达和Erastin处理过的A549细胞G_1期的DNA含量明显增加,S期DNA含量明显减少(均P<0.05)。结论上调CHAC1的表达可显著增加肺癌细胞的铁死亡,抑制其增殖,其分子机制与上调CHAC1可使肺癌细胞停滞在G1期,阻止细胞进入S期有关。

谷胱甘肽胞质降解酶ChaC1的生物学特征与功能

谷胱甘肽是一种神奇的小分子活性肽,在生物体内发挥着重要的抗氧化与解毒排毒功能。目前,对谷胱甘肽代谢的了解主要集中在合成代谢,对于其分解代谢的了解知之甚少。谷胱甘肽的分解代谢长期以来被认为不会发生在细胞质内。随着谷胱甘肽特异性γ-谷氨酰环转移酶ChaC1的发现和研究,谷胱甘肽在细胞质中分解代谢逐步揭开神秘面纱。ChaC1是γ-谷氨酰环转移酶家族的一员,可特异性将还原型谷胱甘肽(GSH)分解成半胱氨酰甘氨酸和5-氧脯氨酸,而不作用于氧化型谷胱甘肽(GSSG)。人源和鼠源ChaC1的氨基酸序列高度相似。人源ChaC1的第115位谷氨酸或鼠源ChaC1第116位谷氨酸突变会导致ChaC1丧失降解谷胱甘肽的活性。ChaC 1基因的敲除会导致小鼠和斑马鱼死亡,提示ChaC1在个体发育中发挥着极其重要的生理作用。另一方面,在不同的肿瘤类型中均发现ChaC 1基因高表达,并且与预后差成正相关。这提示ChaC1同样有着重要的病理生理作用。本文从结构特征、催化活性及表达调控等几个方面对近年来ChaC1的研究进展进行综述,同时概述了ChaC1在个体发育及疾病发生中的作用,为解析相关疾病的发病机制及寻找治疗策略提供了新思路。

CHAC1基因沉默SU-DHL-8细胞株的构建及其对青蒿素细胞毒活性的影响

应用慢病毒短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染的方式构建了阳离子转运蛋白样蛋白1(cation transport regulator-like protein 1,CHAC1)基因沉默SU-DHL-8细胞株模型,用于研究CHAC1基因对青蒿素细胞毒活性的影响.研究了青蒿素对弥散性大B细胞淋巴瘤SU-DHL-8细胞增殖的抑制作用及作用后CHAC 1基因及蛋白的表达情况.应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默SU-DHL-8细胞株内的CHAC1基因.采用慢病毒转染的方法构建CHAC1基因沉默的SU-DHL-8细胞株.采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)活性测定法和蛋白免疫印迹(Westen blot)的方法检测沉默效果以及CHAC1基因对青蒿素细胞毒活性的影响.成功构建了稳定沉默CHAC1基因的稳转细胞株,并初步探讨了CHAC1基因对青蒿素抑制弥散性大B细胞淋巴瘤SU-DHL-8细胞增殖的影响.

鸡肠神经胆碱乙酰转换酶和多巴胺羟化酶细胞的免疫组织化学

应用SABC法免疫组织化学技术,探索鸡肠神经内胆碱乙酰转换酶(ChAc)和多巴胺羟化酶(DβH)神经元的形态及其分布。结果显示,肠神经内含有52%的ChAc神经元和36%的DβH神经元,2种神经元胞体或为多突起的多边形,或为一端有长突起的椭圆形,它们分布于神经内的神经纤维之间。DβH神经元在节间束也有个别分布。部分神经纤维呈ChAc或DβH阳性。这表明鸡肠神经系混合神经,既含副交感节后神经元,也含交感节后神经元。

补肾中药对肾虚质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶含量的影响

目的探讨补肾中药对肾虚体质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶(CHAc)含量的调节作用。方法采用"猫吓鼠"方法制作先天不足加后天失养复合型肾虚模型。造模大鼠随机分为模型组、左归丸组和右归丸组,空白组大鼠产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃给药,药物组给予左归丸和右归丸混悬液,空白组和模型组予等量生理盐水,每日1次,连续3个月。观察大鼠生长发育一般状况,记录5~8周龄各组大鼠体质量和平均食物利用率,ELISA检测大鼠脑组织CHAc含量。结果仔鼠5~8周龄时,模型组较空白组体质量明显减少(P<0.01),左归丸组和右归丸组体质量较模型组明显增加(P<0.05,P<0.01),平均食物利用率与体质量呈正相关;模型组脑组织CHAc含量较空白组明显降低(P<0.01),左归丸组、右归丸组较模型组明显升高(P<0.01)。结论补肾中药可改善肾虚质大鼠生长发育落后状态并调节脑内CHAc含量,从而提高肾虚质大鼠学习记忆能力。

豚鼠肠道肌间神经丛内胆碱能神经元的分布

应用免疫组织化学技术，研究了不同肠段胆碱乙酰化酶（ＣｈＡｃ）免疫反应性（ＩＲ）神经元的分布，拟阐明胆碱能神经元分布与肠道运动功能的相互关系。结果发现：十二指肠、空肠、回肠、结肠及直肠的ＣｈＡｃ阳性细胞占总细胞数的百分比分别是：２６％，２９％，３２％，１４％和１６％。小肠胆碱能神经元胞体密度明显高于其他肠段，小肠胆碱能神经元分布密度较高与肠动力密切相关。

基于混沌压缩感知的稀疏时变信号在线估计

混沌压缩感知是一种利用混沌系统实现非线性测量的压缩感知理论。针对稀疏时变信号的混沌压缩感知,该文提出稀疏时变信号的在线估计架构,构建一种递归最小二乘准则下的稀疏约束目标函数;通过利用迭代加权非线性最小二乘算法求解目标函数最小化问题,实现稀疏时变信号的参数估计。以Henon混沌系统为例仿真分析了频域时变稀疏信号的估计性能,数值模拟证明了该方法的有效性。

VPS13A基因突变致舞蹈病-棘红细胞增多症的诊断及家系研究

目的:探讨舞蹈病-棘红细胞增多症(Ch Ac)的诊断方法及家系特点,为Ch Ac的精准诊断提供可行合理的策略。方法:选取1例临床疑似Ch Ac患者(先证者)作为研究对象,收集其临床资料和家系资料并绘制遗传家系图;采用扫描电镜检测棘红细胞,利用全外显子目标序列捕获2代测序技术筛查Ch Ac易患性基因及其突变类型。结果:先证者主要临床表现为不自主伸舌、磨牙、扮鬼脸、头部及四肢舞蹈动作及口唇自噬动作,外周血肌酶和转氨酶均增高,头颅MRI可见尾状核轻度萎缩;其兄生前具有与先证者同样的临床表现,其父母及姐姐均体健;先证者外周血检测到典型棘红细胞,检测出液泡蛋白分类同源物13A(VPS13A)基因,且VPS13A基因存在c. 9403C> T纯合突变,引起氨基酸改变p. R3135X,为无义突变;先证者的父亲和母亲均为c. 9403C> T杂合突变。结论:结合临床表现及扫描电镜检查可以高度怀疑Ch Ac,但全外显子目标序列捕获2代测序技术可准确检测VPS13A基因突变,并可结合遗传家系特点,作为Ch Ac首选确诊手段。

为了被遗忘的过去:《查克·莫尔》的叙事策略研究

墨西哥作家卡洛斯·富恩特斯的短篇小说《查克·莫尔》采用双重叙事的策略。两个叙事的声音对应小说中事件发展的两条时间线:一条是"我"将菲利韦托的尸体运回墨西哥城,另一条是菲力韦托在日记中记叙的与查克·莫尔的奇异经历。双重叙事的策略使读者能够从多角度获得信息,在故事发展的参与度和明晰度之间达到一个恰当的平衡,从而赋予作品更神秘的色彩,这是作品的表层文本。作品通过象征手法,折射出墨西哥在步入现代化进程后,在现代工业文明社会里,迷失在资本的商业化中,逐渐丢失了本民族原有的东西,揭示出墨西哥正面临的严重的民族文化意识危机和确立自我身份的紧迫性,这是作品的深层文本。通过双重叙述以及象征性的表现手法,作品的表层文本和深层文本得到巧妙呈现,达到表层结构与深层结构的有机统一。