传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测。结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChIL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物。

鸡IL-15基因的克隆及序列分析

目的利用基因工程的方法,将鸡白细胞介素15(ChIL-15)基因在原核表达系统中进行表达,为ChIL-15的应用提供科学依据。方法根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank中已发表的ChIL-15基因,设计引物,用PCR方法扩增目的基因片段。结果成功从鸡的脾脏中扩增出含编码区的ChIL-15基因,ChIL-15基因为581bp,通过测序进行比对,表明ChIL-15基因克隆成功。提取的质粒经酶切鉴定、PCR鉴定、测序比对以及编码成氨基酸进行比对均与GenBank中登录号AF139097.1基本符合,核苷酸的同源性为99.82%。结论通过使用PCR方法成功扩增出来的ChIL-15基因片段,具有较高的同源性,并与已发表的基因序列相符。这为进一步研究ChIL-15基因的功能和应用提供了科学依据。

鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从ConA刺激20h的白莱航鸡脾脏T淋巴细胞中扩增出鸡白细胞介素15(ChIL-15)全基因片段。将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-T-ChIL-15。阳性克隆质粒经鉴定正确后将ChIL-15亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15。阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了ChIL-15蛋白在293T细胞中的表达。