基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的:基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子A(VEGFA)信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的影响。方法:建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组(0.2 mg·kg^(-1)),柴胡桂枝汤低、中、高剂量组(10.62、21.23、42.46 g·kg^(-1)),每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中HIF-1αmRNA表达情况;免疫组化法(IHC)检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度(MVD);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达。结果:与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低(P<0.01),HIF-1αmRNA显著降低(P<0.01),HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低(P<0.01)。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低(P<0.01),HIF-1αmRNA显著降低(P<0.01),HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低(P<0.01),CD34表达及MVD显著降低(P<0.01),HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低(P<0.01)。结论:柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。

柴胡桂枝汤减轻慢性胰腺炎神经性腹痛机制的探讨

目的:探讨柴胡桂枝汤(CHGZT)减轻三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠慢性胰腺炎(CP)神经性腹痛的初步机制。方法:50只雄性SD大鼠随机均分为5组,分别为假手术组、模型组、CHGZT低、中、高剂量组(4、8、16 g·kg^(-1))。假手术组轻轻翻动胰腺后即关腹,模型组采用向胰管内逆行注射2%TNBS-10%乙醇。CHGZT在造模后4周开始灌胃给药,连续2周。5组大鼠分别于术后6周进行Von Frey疼痛阈值检测;苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺组织慢性炎症及纤维化病变;免疫组化法(IHC)检测PGP9.5蛋白表达,同时观察神经周围炎性改变;IHC及免疫荧光(IF)染色观察胰腺相关胸段脊髓后角离子钙结合蛋白-1(Iba-1)、嘌呤能受体P2X7(P2RX7)的定位及P2RX7和小胶质细胞的共表达。结果:与假手术组比较,模型大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分显著增高(P<0.01),大鼠在不同力值疼痛反应值均明显升高(P<0.05,P<0.01),PGP9.5周围炎性浸润评分显著升高(P<0.01),模型组大鼠脊髓后角Iba-1与P2RX7表达均显著增强(P<0.01);与模型组比较,CHGZT高、中剂量组明显降低大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分,明显降低疼痛反应值,明显降低PGP9.5周围炎性浸润评分(P<0.05,P<0.01),CHGZT高、中、低剂量组显著降低Iba-1及P2RX7表达(P<0.01)。结论:CHGZT可明显减轻CP模型大鼠腹痛程度,可能和通过抑制胰腺内神经炎症、降低相应脊髓后角小胶质细胞P2RX7活化有关。