柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NLRP3通路的免疫调节作用

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路的作用及其机制。方法:60只雄性SD大鼠随机平均分为6组,分别为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组,NLRP3抑制剂(MCC950)组。除正常组外,其余采用孤养联合慢性不可预见性应激(CUMS)21 d,制备抑郁大鼠模型。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低组分别灌胃13,6.5,3.25 g·kg^(-1)柴胡加龙骨牡蛎汤溶液,MCC950组腹腔注射1 mg·kg^(-1),正常组、模型组灌胃等体积生理盐水,给药21 d期间持续追加造模。采用糖水偏好实验(SPT)和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测海马组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马中NLRP3,凋亡相关微粒蛋白(ASC)及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组糖水偏好率显著降低(P<0.01),新奇摄食时间显著延长(P<0.01);海马组织中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著增强(P<0.01),IL-1β和IL-18水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤高、中组糖水偏好率显著提高(P<0.01),新奇摄食时间显著缩短(P<0.01);海马中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),IL-1β和IL-18水平显著降低(P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可减轻CUMS诱导的抑郁行为,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体通路有关。

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg-1;氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg-1;正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P<0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P<0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P<0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P<0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P<0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P<0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P<0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P<0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P<0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。

柴胡加龙骨牡蛎汤对帕金森病伴发抑郁模型大鼠的神经保护作用及对AMPK/mTOR信号通路的影响

目的:观察柴胡加龙骨牡蛎汤(CLMT)对帕金森病伴发抑郁(PDD)模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用,并基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/m TOR)信号通路探讨其作用机制。方法:80只雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常组,其余采用长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮联合慢性不可预见性温和应激(CUM)建立PDD大鼠模型,将造模成功的PDD大鼠随机分为模型组、西药组(多巴丝肼0.032 g·kg^(-1)+盐酸氟西汀0.002 g·kg^(-1))、CLMT低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg^(-1)),每组10只,正常组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,连续4周。旷场实验、爬杆实验评估各组大鼠行为学变化;高效液相色谱法(HPCL)测定脑脊液中多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠黑质DA能神经元病理改变;免疫组化法(IHC)检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达;免疫荧光法(IF)检测黑质α-突触核蛋白(α-synuclein)表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测纹状体微管相关蛋白1轻链3(LC3)、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、m TOR、磷酸化m TOR(p-m TOR)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验水平运动总距离及中央区域活动时间均明显减少(P<0.05,P<0.01),爬杆时间明显缩短(P<0.01),评分升高(P<0.01),脑脊液中DA、5-HT含量减少(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组水平运动总距离明显增加及中央区域活动时间均增加(P<0.05,P<0.01),爬杆时间延长(P<0.05),评分下降(P<0.05,P<0.01),DA及5-HT含量增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠黑质DA能神经元数量明显减少,胞体缩小且排列疏松,α-synuclein荧光表达显著增强(P<0.01),TH阳性表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组黑质DA能神经元数量增加,胞体增大,α-synuclein荧光表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),TH表达显著增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组纹状体LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达明显降低(P<0.05,P<0.01)、p-m TOR/m TOR表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达均明显增加(P<0.05,P<0.01)、p-m TOR/m TOR表达显著降低(P<0.01)。结论:CLMT可抑制鱼藤酮神经毒性,发挥神经保护作用,提高DA水平,从而改善帕金森病大鼠抑郁状态,其机制可能与调控AMPK/m TOR信号通路,激活自噬,促进异常聚集的α-synuclein降解有关。

基于16S rRNA技术分析柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症大鼠肠道菌群多样性的影响

目的:基于16S rRNA技术研究柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症模型大鼠肠道菌群多样性的影响,并探讨该复方治疗精神分裂症的作用机制。方法:雄性SD大鼠除正常组外,每日按剂量0. 1 mg·kg^(-1)腹腔注射地卓西平马来酸盐进行造模,模型成功后,柴胡龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组给予实验大鼠柴胡龙骨牡蛎汤(11. 2,5. 6,2. 8 g·kg^(-1)),利培酮组按0. 4 mg·kg^(-1)灌胃给予利培酮片,正常组与模型组灌胃给予蒸馏水,给药体积均为10 mL·kg^(-1),连续给药14 d,将大鼠麻醉后取大鼠盲肠内容物,以Illumina MiSeq为测序平台,对其16S rRNA V4区的肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数量,alpha与beta多样性,丰富度指数与多样性指数以及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价。结果:柴胡龙骨牡蛎汤可改善精神分裂模型大鼠OTUs数量及alpha与beta多样性的失调,降低菌群生物丰富度指数与多样性指数,对精神分裂症模型大鼠的5种差异菌门(上调拟杆菌门、酸杆菌门、变形菌门和TM7菌门,下调厚壁菌门)与20种差异菌属的分布结构均产生回调作用。结论:柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症模型大鼠的异常菌群多样性起到治疗作用,并通过16S rRNA技术揭示了肠道菌群在精神分裂状态下的相关病理机制。