基于PI3K/AKT通路探讨柴苓汤加味对阴虚热盛代谢综合征-胰岛素抵抗大鼠血管内皮功能的影响

目的基于PI3K/AKT通路探讨柴苓汤加味对阴虚热盛代谢综合征-胰岛素抵抗(metabolic syndrome and insulin resistance,MS-IR)大鼠血管内皮功能调控的部分作用机制及病证结合治疗的优势。方法50只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、造模组。造模组大鼠采用高脂高糖饲料喂养,注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(30 mg/kg)联合中药(干姜、附子)灌服造模,建立阴虚热盛型MS-IR大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、柴苓汤加味组(病证结合治疗)、柴苓汤组(因病治疗)、西药组(吡格列酮),各组分别进行柴苓汤加味、柴苓汤、吡格列酮药物干预治疗2周,空白组、模型组给予等体积的蒸馏水灌服。生化检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA法检测血清一氧化氮(NO)水平、血管性血友病因子(vWF);Western blot检测腹主动脉血管内皮磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶(phosphorylated-Akt,P-AKT)、磷酸化内皮一氧化氮(phosphorylated-endothelial nitric oxide synthase,P-eNOS)蛋白表达;HE染色切片,光学显微镜观察颈动脉内膜、中膜厚度以及血管管腔结构情况。结果与空白组比较,模型组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平明显升高,血清NO水平明显降低,vWF水平明显升高(P<0.01),血管内皮结构发生紊乱出现损伤,内皮PI3K、P-AKT、P-eNOS蛋白表达均下调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,柴苓汤加味组、西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平明显降低(P<0.01),柴苓汤加味组、柴苓汤组、西药组血清NO水平明显升高、vWF水平明显降低(P<0.05,P<0.01),血管内皮PI3K、P-AKT、P-eNOS蛋白表达均上调(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,柴苓汤加味组FBG、FINS、HOMA-IR水平无明显差异,柴苓汤组NO、vWF水平无明显差异,柴苓汤组血管内皮PI3K蛋白表达上调(P<0.05),柴苓汤加味组NO水平明显升高(P<0.05)、vWF水平明显降低(P<0.01),血管内皮PI3K、P-AKT、P-eNOS蛋白表达均上调(P<0.05,P<0.01);与柴苓汤组比较,柴苓汤加味组、西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平明显降低(P<0.05),柴苓汤加味组NO水平明显升高(P<0.05)、vWF水平明显降低(P<0.01),血管内皮PI3K、P-AKT、P-eNOS蛋白表达均上调(P<0.05,P<0.01);柴苓汤加味对血管组织内膜、中膜、外膜的厚度以及炎症改善效果最为明显,优于柴苓汤组和西药组。结论柴苓汤及加味方促进血管内皮损伤的修复,并显著改善阴虚热盛MS-IR大鼠血管内皮功能,作用机制可能与改善FBG、FINS、HOMA-IR、NO、vWF水平,消除炎症及调控PI3K/AKT通路有关,病证结合用方治疗具有显著优势。

基于网络药理学探讨加味柴苓汤治疗高脂血症性胰腺炎作用机制

目的基于网络药理学方法分析加味柴苓汤治疗高脂血症性胰腺炎的作用机制,为临床的合理使用、动物实验、新药研发提供依据。方法通过中医药系统药理学数据库及分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)数据库获取半夏、柴胡、党参、黄芩、生姜、大枣、甘草、猪苓、茯苓、泽泻、苍术、桂枝、厚朴、薏苡仁、丹参、陈皮的主要化学成分及其对应靶点;通过GenCards数据库获取高脂血症性胰腺炎的疾病靶点;利用Venny网站获取共同靶点。以Cytoscape3.7.2系统构建"疾病-中药-活性成分-靶点"网络图。通过STRING平台构建"PPI"网络图,进行蛋白质相互作用分析。采用Metascape平台进行基因本体(GO)和基因相互之间(KEGG)富集分析,并构建"靶点-通路"网络图以筛选重要通路,最终获取主要作用的关键靶点。结果加味柴苓汤治疗高脂血症性胰腺炎的主要活性成分为槲皮苷、柚皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素等,关键靶点包括AKTI、TL6、PPARG、TNF、CASP3、NOS2等,主要的生物过程为脂质定位、类固醇代谢过程、脂质代谢过程的调节、对脂多糖的反应、活性氧代谢过程等;主要作用于脂质结合、细胞因子活性、丝氨酸型肽酶活性、辅因子结合、类固醇结合等分子功能;主要富集的通路有:糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、非酒精性脂肪性肝病、癌症的途径、缺氧诱导因子-1信号通路、PPAR信号通路、MAPK信号通路等。结论研究初步揭示加味柴苓汤治疗高脂血症性胰腺炎是多药物、多成分、多靶点、多通路共同参与作用的结果,为日后加味柴苓汤的临床使用提供了一定的科学依据。