无细胞百日咳攻击菌的制备及液氮保存方法分析

为了制备无细胞百日咳效价测定用攻击菌并用液氮进行保存,对此方法进行评价。采用原代攻击菌复苏传代后测定细菌浓度,并用蛋白胨水稀释为27亿个菌/m l,分装冻存管中。放入液氮罐内,并对液氮保存的攻击菌进行相应的检测,用统计软件计算。结果显示,此方法制备的攻击菌与传统的攻击菌无显著性差异,冻后虽攻击菌的毒力有所下降,但都在100-1000/MLD的正常范围内,且冻后0、3、6、9、12月无显著性差异。同批支间差异小,CV<5%。通过此方法制备的攻击菌稳定性好,试验结果符合《中华人民共和国药典》要求,可用于无细胞百日咳的效价测定。

候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗在大鼠上的免疫保护效果研究

目的观察候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-sIPV)在大鼠中的免疫保护效果,为疫苗临床前研究提供依据。方法将候选疫苗DTaP-sIPV、无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)、吸附无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)、百日咳疫苗效力参考品(全细胞疫苗,wP)按0、30、60 d 3剂免疫程序免疫Wistar大鼠,检测各组大鼠每剂免疫后的血清中各组分抗体水平。在免疫完成后3周,用百日咳18323株通过气雾攻击的方式感染大鼠。在感染后的第3、7、14、21和28天检测各组白细胞数、肺部菌落克隆形成数以及百日咳疫苗组分抗体变化水平。结果候选疫苗组3剂次免疫完成后PT抗体几何平均滴度(GMT,log2)为16.74,FHA抗体GMT为18.44,PRN抗体GMT为10.75,DT抗体GMT为17.34,TT抗体GMT为17.84,针对3种Sabin脊髓灰质炎病毒株(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型)的抗体的GMT分别为7.57、8.41和9.70,均达到100%阳转。候选疫苗抗原组分抗体除了PRN和I型IPV外,其他组分抗体水平均与疫苗对照组相比无显著性差异。在基础免疫完成后3周对大鼠进行百日咳杆菌气雾攻击,各疫苗组均表现较好的保护效果,白细胞水平都呈现平稳状态,虽然在肺部也检测到少量细菌定植,但各疫苗组间差异不明显,且在感染后第28天都清除至检测限;而空白对照组在肺部则检测到了大量细菌定植,且在感染后第28天都并未清除至检测限,百日咳特异性的FHA和PRN抗体在感染后的第14天也出现了相应的升高。结论候选疫苗在Wistar大鼠模型上具有较好的免疫保护效果。

无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌液氮保存的稳定性

为了考察无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的稳定性,对液氮保存1~7年的4~9代百日咳攻击菌随机抽取7~11批次样品,采用LD50检测并经统计学处理,分析其样品的毒力变化。试验结果显示,4~9代的百日咳攻击菌液氮保存5年,毒力仍能达到《中华人民共和国药典》三部（2005版）的要求;保存6年和7年,4~7代的百日咳攻击菌毒力仍符合上述要求,8、9代的攻击菌毒力的合格率分别为84%和40%。试验证实,无细胞百日咳效价检定用攻击菌液氮保存5年具有良好的稳定性,可用于无细胞百日咳疫苗的效价检定。

无细胞百日咳疫苗时代百日咳杆菌黏附素蛋白缺失株的研究进展

无细胞百日咳疫苗接种后的免疫持久性下降和百日咳杆菌变异是导致“百日咳再现”的两个重要原因。百日咳杆菌变异株不表达无细胞百日咳疫苗中所包含的抗原成分,其中以黏附素蛋白的缺失最为常见。大量研究表明黏附素蛋白的缺失对百日咳杆菌的侵袭力和致病性并无明显影响,被认为可以由其他毒力因子代偿。黏附素蛋白缺失株产生的原因,包括IS481序列插入等菌株自身变异相关的分子机制,以及无细胞百日咳疫苗接种后的免疫环境造成的选择性压力。我国目前处在无细胞百日咳疫苗接种初期,尚未报道发现黏附素蛋白缺失株。

吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗的免疫持久性

目的观察不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTa P-Hep B-s IPV)免疫大鼠后的免疫持久性。方法以中、低剂量s IPV与铝佐剂相互配伍的不同配方设计4个DTa P-Hep B-s IPV实验组,即中剂量含铝佐剂s IPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂s IPV组(B组)、低剂量含铝佐剂s IPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂s IPV组(D组),并设各组分相应的对照组和上市联合疫苗的参考组。以已完成3剂DTa P-Hep B-s IPV全程基础免疫的Wistar大鼠为研究对象,在全程基础免疫后第1、2、4、7、10、12个月釆血,检测各组大鼠血清中各组分抗体阳性率及抗体水平(GMT值)。结果基础免疫后观察全程,A组各型别脊灰病毒中和抗体阳性率持续保持在100%,B组为90%~100%,C组为80%~100%,D组为55.6%~100%。A、C组所诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于同等剂量不含铝佐剂的B、D组,且均达到或超过参考组;B、D组所诱导的Ⅰ型脊灰病毒中和抗体GMT均低于同等剂量的相应对照组,但Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组的水平。各组百白破抗体阳性率在观察全程均为100%,GMT与对照组相比总体上差异无统计学意义(P>0.05)。全程基础免疫后第12个月,乙肝抗体阳性率B组为70%、乙肝对照组为55.6%、A组为50%、C组为42.9%、D组和上市疫苗参考组均为30%,各组Anti-HBs Ag水平两两相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 s IPV中剂量含铝佐剂的DTa P-Hep B-s IPV所诱导的各组分抗体水平较稳定持久,可作为未来疫苗配比的参考。

吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗加强免疫效果及安全性评价

目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-HepB-sIPV)免疫大鼠后加强免疫效果及安全性。方法以中、低剂量与铝佐剂相互配伍的不同sIPV配方设计4个DTaP-HepB-sIPV联合疫苗实验组,即中剂量含铝佐剂sIPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂sIPV组(B组)、低剂量含铝佐剂sIPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂sIPV组(D组),并设相应各组分的对照组和Infanrix hexaTM疫苗参考组。以已完成3剂基础免疫的Wistar大鼠为实验动物,在全程免疫第16个月接种1剂次加强免疫,进行安全性评价,并比较加强免疫前后各组大鼠血清中各组分抗体水平、中和抗体几何平均滴度(GMT)及阳转率,同时观察加强免疫对大鼠外周血中淋巴细胞的影响。结果加强免疫后未观察到不良反应,大鼠接种部位未见红肿、硬结、溃烂等现象,且各组大鼠体重维持稳定。加强免疫后30 d,各组大鼠各型别脊灰病毒中和抗体均为阳性,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率A组分别为100%、71.4%、85.7%,B组分别为71.4%、85.7%、100%,C组分别为80%、80%、100%,D组分别为71.4%、100%、85.7%;A组诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于B组,且可达到或超过参考组;B、D组诱导产生的各型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组水平。加强免疫后,各组百白破各组分抗体GMT有5~106倍增长,联合疫苗实验组GMT与对照组相比,总体上差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后,乙肝抗体阳转率乙肝对照组为66.7%,B组为55.6%,C组为50%,A组为16.7%,D组为14.3%,参考组为0%;各组Anti-HBsAg水平有不同程度的升高,但两两相比,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DTaPHepB-sIPV具有良好的安全性,sIPV中剂量含铝佐剂的DTaP-HepB-sIPV联合疫苗所诱导的各抗体水平更加稳定持久,可作为未来疫苗最佳配比的参考。

候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗免疫小鼠的效果研究

目的观察候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗（DTaP-sIPV）在小鼠中的免疫原性,为疫苗临床前研究提供依据。方法将候选疫苗分别稀释成5倍、10倍、20倍三组,以相应稀释的无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗（DTaP-IPV/Hib）、无细胞百白破联合疫苗（DTaP）为对照组,每组按0、4、8周3剂免疫程序免疫NIH小鼠（10只/组）,检测各组小鼠每剂免疫后28d的血清百白破组分抗体水平。结果候选疫苗三个组完成3剂次免疫后PT抗体的几何平均浓度（GMC）（IU/mL）分别为2 157.29、2 142.51、2 135.17;FHA抗体GMC分别为10 098.30、10 068.33、9 143.30;PRN抗体GMC分别为1 683.86、1 130.29、193.00;DT抗体几何平均滴度（GMT）（1∶）分别为23.48、22.44、22.44;TT抗体GMT分别为22.31、21.24、21.34。候选疫苗三个组PT、FHA、DT、TT抗体水平均高于两种疫苗对照组或者与其无显著性差异,但PRN抗体水平低于DTaP对照组。结论候选疫苗免疫小鼠具有良好的免疫原性。