高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法评价诃子药材质量

目的评价诃子药材的质量。方法建立诃子药材的高效液相色谱指纹图谱,采用相似度计算、聚类分析和主成分分析法对其质量进行评价。以柯里拉京为内参物,建立测定诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸含量的一测多评法,并将计算结果与外标法测定结果进行比较。结果18批诃子药材的指纹图谱有23个共有峰,指认出2号峰为莽草酸、7号峰为没食子酸、11号峰为没食子酸甲酯、14号峰为柯里拉京、15号峰为没食子酸乙酯、16号峰为诃黎勒酸、20号峰为鞣花酸、22号峰为诃子酸,相似度均大于0.95。聚类分析结果显示,18批诃子药材聚为2类,其中产地为青海的2批药材聚为一类,其余药材聚为一类。主成分分析结果显示,主成分特征值大于1的5个成分累积方差贡献率为84.088%。采用一测多评法计算的18批诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸的含量与外标法测定结果无显著差异(P>0.05)。结论高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法可有效评价诃子药材的质量。

Neuroprotective effects of Fructus Chebulae extracts on experimental models of cerebral ischemia

OBJECTIVE:To investigate the neuroprotective effects of Fructus Chebulae extract using both in vivo and invitromodels of cerebral ischemia.METHODS:As an in vitro model,oxygen glucose deprivation followed by reoxygenation(OGD-R)and hydrogen peroxide(H2O2)induced cellular damage in rat pheochromocytoma(PC12)cells was used to investigate the neuroprotective effects of extract of Fructus Chebulae.3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay was used to calculate cell survival.For in vivo,occlusion of left middle cerebral artery on rats was carried out as a focal cerebral ischemic model.RESULTS:Fructus Chebulae extract increases the PC12 cell survival against OGD-R and H2O2by 68%and 91.4%respectively.Fructus Chebulae also de-creases the cerebral infarct volume by 39%and extent of hemisphere swelling from 17%in control group to 10%in FructusChebulaetreated group.CONCLUSION:Fructus Chebulae,as a traditional medicine,can rescue the neuronal cell death against ischemia related damage.The possible mechanism for the neuroprotection might be the inhibition of oxidative damages occurring after acute phase of cerebral ischemia.

诃子化学成分与药理活性研究进展

诃子广泛应用于各种传统医药体系中,被称为“藏药之王”“蒙药之王”,具有涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽的功效,临床常用于肺虚喘咳、久嗽不止、咽痛音哑等多种病证。通过查阅近几年国内外文献,对诃子的化学成分和药理作用进行了综述。结果显示,诃子化学成分丰富多样,主要包括鞣质类(31种)、酚酸类(15种)、三萜类(13种)等。现代药理学研究表明,诃子提取物具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、肝保护、神经保护等多种药理活性。该文系统阐述了诃子的化学成分及药理作用,为诃子的深入研究和开发利用提供理论依据。通过对其化学成分和药理作用的研究,可以更好地了解和应用诃子,为临床治疗提供更多有效的治疗方案,也为传统医药的传承和发展提供了有力支持。

藏药“三果”的生药学鉴别研究与数字化表征

目的:对藏药中著名的“三果”—诃子,毛诃子和余甘子进行生药学鉴别研究,建立性状和显微鉴定及其数字化表征规范,为藏药“三果”鉴别研究奠定基础。方法:运用植物学形态鉴定、分类学术语研究方法,应用光学显微镜、体式显微镜和数码相机等仪器设备及数码成像技术,从“三果”样品的正面、侧面、腹面、顶面、表面等外观性状,横剖面和纵剖面特征,以及横切面和粉末的显微特征,进行鉴别和数字化表征,并对相关特征进行了比较。结果:明确了“三果”外观形态、表面特征等性状鉴别特征和果皮表皮细胞、纤维、石细胞、草酸钙簇晶等显微鉴别特征,归纳总结了藏药“三果”的鉴别方法,为药材的鉴定研究提供参考依据。结论:该鉴定方法简便环保、准确可靠,可作为藏药“三果”的鉴定依据。

基于网络药理学探讨诃子治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制

目的:基于网络药理学探讨诃子治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索诃子的化学成分,Swiss Target Prediction数据库获取诃子的作用靶点。采用OMIM、GeneCards、DisGeNET数据库预测COPD作用靶点,借助微生信平台获取诃子与COPD的交集靶点。将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。基于Centispace插件进行拓扑分析,从而筛选诃子治疗COPD的核心靶点。采用DAVID数据库进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析。结果:诃子活性成分8种,作用靶点333个,活性成分包括鞣花酸、番泻苷E、7-脱氢豆甾醇等。COPD作用靶点8805个,其与诃子的交集靶点253个。通过筛选得到10个核心靶点,包括信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(serine/threonine kinase 1,AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)等。GO功能分析主要富集于细胞凋亡、G蛋白偶联血清素受体活性、RNA聚合酶Ⅱ转录因子活性等,KEGG通路主要包括PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路、ErbB信号通路等。结论:诃子通过多成分、多通路、多靶点发挥治疗COPD的作用。

基于非靶向代谢组学的诃子解草乌心脏毒性机制分析

目的:采用代谢组学方法分析诃子解草乌心脏毒性机制。方法:以草乌、草乌诃子药对为示例药物,将50只SD大鼠按体质量随机分为正常组,草乌高剂量组、草乌低剂量组、草乌诃子药对高剂量组、草乌诃子药对低剂量组,每组10只。各给药组连续灌胃28 d相应药物溶液。最后一次给药后检测各组心率和心电图、血清生化指标及病理组织学变化,并取心脏组织,采用LC-MS非靶向代谢组学技术分析心脏内源性代谢产物变化。结果:与正常组相比较,草乌高剂量组心率出现明显降低(P<0.05)。各给药组大鼠的心电图结果主要表现为,草乌高剂量组呈现心律失常,室早,宽大畸形的QRS波;草乌低剂量组出现宽大畸形的QRS波;草乌诃子药对高剂量组大鼠表现为ST段压低;草乌诃子药对低剂量组大鼠的心电图偶见ST段抬高。血清生化指标结果显示,草乌高剂量组CK、CKMB显著降低(P<0.05);草乌低剂量组CK、CKMB呈升高趋势。病理学观察结果显示,草乌高剂量组心肌纤维排列略紊乱,胞质疏松淡染,部分细胞水肿;草乌低剂量组心肌纤维排列略紊乱;草乌诃子药对高剂量组个别心肌细胞水肿;草乌诃子药对低剂量组心肌纤维排列紊乱,胞质疏松淡染。草乌高剂量组从心脏样本中共筛出18个差异代谢物,其中上调4个、下调14个;草乌诃子药对高剂量组从心脏样本中共筛出25个差异代谢物,其中上调1个、下调24个,主要涉及ABC转运蛋白和多种氨基酸代谢。结论:诃子解草乌心脏毒性机制主要与心脏N、N-二甲基精氨酸和腺苷蛋氨酸及肌酸代谢有关。

电子束辐照对诃子中主要活性成分及灭菌效果的影响

目的探讨电子束辐照对诃子灭菌效果及主要活性成分的影响。方法采用0,2,4,6,8,10 kGy不同辐照剂量对诃子粉末进行电子束辐照灭菌,考察诃子粉末辐照前后的性状、薄层色谱图、高效液相色谱指纹图谱、微生物数量,测定其中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸3种主要活性成分的含量。结果经不同辐照剂量灭菌后,诃子的性状、薄层色谱图、高效液相色谱指纹图谱均无明显变化,诃子的主要活性成分没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的含量均无显著差异(P>0.05);当辐照剂量为4 kGy及以上时,细菌菌落总数、霉菌和酵母菌菌落总数均小于200 cfu/g,符合2020年版《中国药典(四部)》中非无菌产品微生物限度检查的规定。结论电子束辐照灭菌对诃子的主要活性成分无明显影响,并在辐照剂量为4 kGy时达到灭菌要求,适用于诃子粉末的灭菌。

基于熵权法和灰色关联度分析法的不同加工方式诃子药材质量评价

目的:通过测定浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质和没食子酸含量,结合熵权法和灰色关联度分析法评价不同方式加工的诃子药材的质量。方法:按照《中华人民共和国药典》2020年版方法对诃子进行浸出物、粉末色差值、灰分、水分和鞣质含量测定;采用高效液相色谱法测定没食子酸含量。采用熵权法计算浸出物等6个指标的权重,同时结合灰色关联度分析法计算各指标的相对关联度,对21份诃子的质量进行排序。结果:诃子药材浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质质量分数和没食子酸质量分数分别为38.68%~62.04%、33.87%~47.30%、3.39%~4.20%、7.10%~12.55%、9.60%~22.56%、2.25%~5.54%;权重分别为0.1693、0.1664、0.1685、0.1685、0.1653、0.1620;相对关联度为0.3010~0.5985,其中17号样品的关联度最高(0.5985)。结论:以浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质含量和没食子酸含量为评价指标,采用熵权法和灰色关联度法可评价诃子药材的质量。

基于网络药理学和分子对接探讨诃子缓解乌头碱引起的神经毒性机制研究

目的:采用网络药理学方法分析诃子缓解乌头碱引起的神经毒性的可能机制。方法:使用网络药理学数据库得到诃子缓解乌头碱神经毒性的成分和靶点。对得到的靶点进行蛋白相互作用分析,筛选出诃子缓解乌头碱引起神经毒性的关键成分和靶点,并使用分子对接进行验证。应用Metascape数据库对交集中靶点进行GO分析和KEGG通路富集。结果:筛选出诃子中11种成分和150个靶点,其中鞣花酸、碎叶紫堇碱、硫酸奎尼丁、番泻苷E_qt、霹雳萝芙辛碱五个关键成分与ALB、EGFR、HSP90AA1、SRC、CASP3五个关键靶点之间可以通过极性作用紧密结合。靶点的富集分析显示诃子缓解乌头碱引起神经毒性靶点存在于轴突、树突、细胞体、细胞外基质、线粒体基质等部位,可能参与抗氧化活性、ATP酶结合等功能,可能调节FoxO,PI3K-Akt,Ras,MAPK等信号传导通路。结论:诃子治疗乌头碱神经毒性可能与调节神经系统中氧化应激反应,调节神经细胞中线粒体相关的能量代谢,调节神经递质传递等机制有关。

青鹏膏剂贴敷裸鼠穴区对皮肤内血管和肥大细胞的影响

目的:通过体表穴区贴敷藏药制剂(青鹏膏剂),观察裸鼠皮肤组织血管和肥大细胞数量的变化,以了解该药物对微循环血流的作用,方法:健康成年裸鼠15只,分为青鹏膏剂贴敷组和对照组。动物贴敷青鹏膏剂7天后,分别在两组动物的背部取涂药部位(以第4胸椎为中心)和相应未涂药部位皮肤组织,进行切片染色观察。结果:在涂青鹏膏剂的真皮深层以下的组织内明显可见扩张的血管和肥大细胞数量数量增多。在同体对照或对照组的皮肤组织内,虽也见少量扩张的血管,但明显少于涂药的皮肤组织内的血管数量。统计学处理结果显示青鹏膏剂组涂药部位的皮肤组织内血管数量和肥大细胞数量,均明显多于同体未涂药部位和对照组的数量,有非常显著性差异(P<0.001)。结论:青鹏膏剂对涂药部位皮肤组织内的血管明显有扩张作用和促肥大细胞聚集作用。

乌梅等20种中药对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性研究

【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性．【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取，采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性；并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性．【结果和结论】乌梅、黄连Rhizoma cop-tidis、诃子Terminalia chebula、秦皮Cortex fraxini、地榆Sanguisorbae officinalis、虎杖Polygonum cuspidatum 6种中药提取物对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度（ Minimal inhibitory concentration ，MIC）范围是6.25～50.00 mg/mL；大青叶Isatis indigotica、茵陈Artemisia capillaris、甘草Glycyrrhiza uralensis和白鲜皮Dictamnus dasycarpus 4种中药提取物的MIC范围是50.00～100.00 mg/mL；黄柏Phellodendron amurense、杜仲Eucommia ulmoides、金银花Lonicera japoni-ca、柴胡Bupleurum chinense、蒲公英Taraxacum mongolicum、板蓝根Baphicacanthus cusia、栀子Gardenia jasminoides和黄芪Astragalus membranaceus等10种中药提取物的MIC＞100.00 mg/mL．联合抑菌试验结果表明，乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合抑菌指数（FICI）≤1，乌梅、虎杖分别与秦皮的FICI＞2．乌梅、黄连、诃子、虎杖、秦皮、地榆对胸膜肺炎放线杆菌均具有较好的体外抗菌活性；乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合为相加、协同作用；秦皮分别与乌梅、虎杖为拮抗作用．

中药诃子的主要成分没食子酸在异育银鲫体内药物代谢动力学研究

在(20±1)℃的水温条件下,以77 mg/kg的单剂量,给异育银鲫(Carassius auratus gibelio)口灌诃子(Fructus chebulae)水剂,以诃子中的主要成分没食子酸为检测目标,用高效液相色谱法(HPLC)检测给药后各个时间点的血药浓度。结果显示:最低检测限为0.01μg/mL,线性范围为0.01～84.00μg/mL。诃子在异育银鲫体内的药动学过程符合一级吸收二室开放房室模型(1/C/C),其药物动力学方程为C=39.237e-0.320t+4.814e-0.006t,主要药动学参数为:吸收速率常数(Ka)为0.56 h-1,吸收半衰期(t1/2ka)为1.238 h,分布半衰期(t1/2α)为2.164 h,消除半衰期为(t1/2β)为119.369 h,达峰时间(Tmax)为4 h,最大血药浓度(Cmax)为11.024μg/mL,血药浓度-时间曲线下面积(AUC(0-∞))=674.89μg.h/mL,延滞时间(TL)为0.286 h,药物平均滞留时间(MRT(0-∞))=113.626 h,总体消除率(CLs)为0.112 L/(kg.h),表观分布容积(Vd)为13.713 L/kg。这些参数表明,异育银鲫口灌诃子后,能比较迅速被吸收,并且在血浆中维持较长的时间,具有较好的应用价值基础。

诃子·石榴皮提取物对家兔离体肠管运动的对比试验研究

[目的]探索不同剂量诃子、石榴皮提取物对家兔离体肠管运动的影响。[方法]采用离体肠管试验法,将家兔的十二指肠、空肠和回肠置于加有台氏液的麦氏浴皿内,然后注入不同剂量的诃子、石榴皮提取物,使溶液终浓度为5、10、20、30、40、50mg/ml,观察离体肠管运动的反应。[结果]诃子和石榴皮提取物均能抑制肠管的运动,使其张力降低,收缩频率减小。相同浓度的诃子和石榴皮提取物对不同部位肠管的运动影响存在差异,浓度增加其影响增大;石榴皮提取物对肠管运动的影响较诃子提取物弱。[结论]探明了2种药物对小肠平滑肌运动的影响,可为诃子和石榴皮的临床应用提供可靠的生理学依据。

诃子中活性物质的提取及其抗氧化、抑菌作用研究

利用微波法提取诃子中抗氧化活性物质。以抗氧化活性为指标,采用响应面法研究温度、时间、料液比对产物抗氧化活性的影响。在温度53.6℃,时间3min,料液比1∶19(m∶V)的条件下,产物抗氧化活性即Trolox浓度为63081μmol/L。产物对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子具有清除作用,其IC50值分别为0.44,1.01,0.64mg/mL,产物对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌有抑制作用,而对黑曲霉无抑制作用。

HPLC法测定蒙药巴特日七味丸中没食子酸的含量

目的：建立测定蒙药巴特日七味丸中没食子酸含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。应用Spherisorb C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱；以甲醇-0．1％磷酸水溶液（15：85）为流动相；流速为0．8mL·min^-1；检测波长为273nm；柱温为25℃。结果：没食子酸在0．102—0．306μg范围内，与峰面积具有良好的线性关系，r=0．9999；平均回收率为98．89％、RSD为1．41％（n=6）。结论：该方法简便、快捷、准确、重复性好，可用于巴特日七味丸中没食子酸的含量测定。

中药诃子的药源调查及商品鉴定

本文对全国4省和46个市县收集的70件诃子商品进行了产区药源调查和商品鉴定,结果表明:目前市场流通的商品药材主要来源使君子科Combretaceae诃子属Terminalia 4种植物;绒毛诃子、诃子、恒河诃子和大诃子,其中绒毛诃子为主流商品。

草乌及其炮制品的急性毒性实验研究

目的比较生草乌、药典法制草乌、诃子制草乌的粉末和水煎液及诃子草乌配伍煎煮液7种样品急性毒性大小,探讨草乌炮制减毒原理。方法采用灌胃给药的方法,分别测定7种草乌样品对小鼠半数致死量(LD50)或最大给药量。结果生草乌粉末、诃子制草乌粉末、诃子草乌配伍煎液、诃子制草乌煎液、生草乌煎液的LD50分别为0.7009、1.1690、2.5600、4.0000、15.3200 g·kg-1;药典法制草乌粉末、药典法制草乌水煎液最大给药量分为20 g·kg-1和64 g·kg-1。结论生草乌毒性较大,生品经炮制或水煎煮后毒性均有不同程度降低。药典法制草乌无论粉末还是水煎液均无明显毒性。

比色法结合HPLC指纹图谱法用于诃子质量控制研究

采用比色法与HPLC指纹图谱法对诃子进行质量控制,建立了诃子中的主要药效成分总鞣质含量测定方法以及诃子的HPLC指纹图谱质量控制方法。结果诃子的总鞣质含量达到20.6%,生成的对照指纹图谱与各图谱相似度≥0.94。本实验建立的评价方法能够快速、准确、简便、全面地评价中药诃子质量,在一定程度上弥补药典中对诃子的质量控制不足之处。

那如三味丸各药味对草乌药效组分影响的电喷雾质谱研究

目的:以那如三味丸为研究对象,考察荜茇、诃子对草乌药效组分的影响规律。方法:利用电喷雾质谱技术分别对那如三味丸,草乌加诃子、荜茇共煎液进行系统考察。结果:乌头碱加诃子共煎液中乌头碱含量高;草乌加诃子共煎液中乌头碱含量较低;荜茇对草乌生物碱的影响不明显。结论:诃子对制草乌起减毒作用,其减毒机制主要是抑制了制草乌中乌头碱的溶出。

不同来源诃子中3种可水解丹宁的定量分析

用RP-HPLC法对不同来源的15种诃子样品中3种可水解丹宁诃子酸(Chebulinic acid,Ⅰ)诃黎勒酸(chebulagic acid,Ⅱ)和1,3,6-3一0—没食子酰基葡萄糖(l,3,6-tri-O-galloyl-β—D-glucose,Ⅲ)进行定量分析。结果表明 Ⅰ和Ⅱ的含量与诃子的品种、性状有明显的相关性,可作为评价诃子药材质量的指标性成分。