改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。

一种适用于PCR扩增的甜菜干种子DNA快速提取方法的研究

为了寻求一种快速提取甜菜DNA的方法,不经液氮研磨,利用改良CTAB法对甜菜干种子进行了DNA的提取,通过降低水浴时间及利用冰浴快速析出DNA,减少了提取的时间。提取的DNA经0.8%的琼脂糖检测,DNA条带完整,没有降解,经与λDNA进行比对,每毫克干种子可提取DNA大约50 ng,利用SSR引物BvATT1及SRAP引物组合(me1,em2)对提取的DNA进行扩增,用6%的非变性聚丙烯酰胺进行检测,结果条带清晰,特异性强。试验结果表明,利用改良CTAB法完全可以从甜菜干种子中提取到符合甜菜分子试验要求的DNA。本研究首次利用改良CTAB法从甜菜干种子中提取到了高质量的DNA,建立了快速提取甜菜DNA的体系,为分子标记将来在甜菜品种指纹图谱构建及辅助育种等方面的应用奠定了坚实的基础。

改良CTAB法提取鸢尾属植物DNA

鸢尾属植物中酚类、多糖含量较高,DNA提取较为困难。在前人工作基础上,改进了提取植物DNA的CTAB方法,通过延长水浴时间、氯仿/异戊醇(24∶1)2次抽提、适当延长氯仿/异戊醇与提取液接触时间等一系列改进,简化了提取步骤,大大缩短了提取时间。所提取的DNA纯度高,可满足以PCR扩增为基础的试验需要。

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀.CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少.采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照.结果表明:CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1.8～2.0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求.

一种高效提取鹧鸪茶基因组DNA的方法

在常规的CTAB法基础上,对其中某些步骤和所用药品进行改良,以寻求一种能简便快速地排除多酚类、蒽醌类和甾体类化合物等物质干扰的方法。应用该改良CTAB法所得鹧鸪茶基因组DNA其长度接近21kb,OD260/OD280比值在1.8左右。以此DNA为模板可获得条带清晰、重复性好的ISSR-PCR扩增结果。

基于AFLP分析用吴茱萸叶高质量DNA的提取

目的：研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性（AFLP）分析。方法：设计了一种改良CTAB法：以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA（rDNA）保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果：改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论：石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。

小麦基因组DNA改良提取方法的探讨

以标准SDS法、CTAB法、改良SDS法、CTAB法对小麦基因组DNA提取质量进行了比较研究。结果表明,标准方法所提DNA浓度和纯度都较好,但耗时、设备条件要求高;改良方法所提DNA浓度和纯度虽不如标准法,但依然符合实验要求,而且省时、经济、易操作。改良CTAB法提取DNA质量好于改良SDS法,改良方法尤其改良CTAB法是一种适合小麦基因组DNA提取的方法。此方法可用于教学实验和科研中对大量材料DNA的提取,其质量可满足对DNA质量要求较高的实验需要,如AFLP技术。

黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。

几种提取转基因木瓜DNA方法的比较

目的比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果,以提高转基因木瓜的检测准确率。方法对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR,同时对基因表达零件Ca MV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR,以检测提取DNA的质量。结果分析电泳产物发现,SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求,其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示,3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论比较3种提取方法及3种木瓜材料,发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。

提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究

通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道菌群的真实情况。采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内。通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR,变性梯度凝胶电泳(DGGE)对改进方法及两种试剂盒法提取DNA的结果进行比较,评价了所建立的高效提取方法。与试剂盒相比,改进的方法DNA得率较高,简便快速,成本低廉。同时后续的PCR鉴定及DGGE菌群多样性分析显示,改进的方法可以更好地揭示鼠肠道菌群分布和特性。

一种适用于木犀科苦丁茶的高效DNA提取法

【研究目的】报道了一种快速简便地提取高质量植物总DNA的改良CTAB法。【结果】应用该法能简便快速地去除多糖等干扰物质,从而获得高质量的木犀科苦丁茶总DNA。所得DNA长度接近21kb,OD260/OD280在1.8左右。【结论】以此DNA为模板获得带条清晰、重复性高的ISSR-PCR扩增结果,且在一定范围内模板用量对ISSR-PCR扩增结果基本无影响。

白砂糖DNA提取方法的比较

为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度在1.8左右,且通过实时荧光定量PCR能扩增出18Sr DNA基因的对应荧光信号。因此,改良CTAB法能够高效地提取白砂糖的DNA,可为后续的分子检测奠定基础。

几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文)

[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。

利用CTAB法和子囊孢子破壁法提取冬虫夏草菌DNA

通过CTAB法从冬虫夏草菌株和天然冬虫夏草不同部位提取DNA,并用PCR扩增进行验证,证明了CTAB法适合从冬虫夏草子座、菌核和冬虫夏草菌培养物中提取DNA。首次报道1种将子囊孢子破壁直接进行PCR扩增的方法,并比较了该方法和CTAB法在提取冬虫夏草DNA方面的差异。2种方法获得的DNA用于PCR扩增均能得到较好的结果。

枫香ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

为探索最适的枫香叶片DNA提取方法、最优ISSR引物和最佳ISSR-PCR扩增反应体系,本试验采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、高盐低pH法和试剂盒法提取枫香叶片DNA;采用三因素五水平(DNA模板用量,2×Taq Master Mix用量引物浓度)正交试验构建并优化枫香的ISSR-PCR反应体系;对100条ISSR引物进行筛选及其退火温度优化。结果表明:改良CTAB方法提取的DNA浓度高,且电泳条带清晰无污染;SDS和试剂盒方法提取DNA的浓度低,电泳条带亮度低;高盐低pH值法提取的DNA的电泳条带模糊且降解拖尾现象严重。DNA模板浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH2O为7.8μL时扩增程序的条带最清晰、多态性最好。筛选出17条重复性强、条带清晰明亮、多态性高的ISSR引物及其最适退火温度,其中扩增位点数最多的为引物UBC-834、UBC-836和UBC-853,扩增位点均为13个,以UBC-878为ISSR引物时的扩增反应中,当退火温度在46.9℃的时候能够扩增出较多明亮且清晰的条带。枫香叶片DNA最适提取方法为改良CTAB法;ISSR-PCR扩增程序的最优反应体系为20μL:模板DNA浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH2O 7.8μL;筛选出17条最适枫香的ISSR候选引物及其最适退火温度。该枫香ISSR-PCR优化体系和候选引物适用于分子标记为枫香遗传多样性与亲缘关系作分析。

荒漠植物PCR模板3种制备方法的初步研究

采用2×CTAB法、NaOH法及直接PCR扩增法,以准噶尔无叶豆〔Erem osparton songoricum（L itv.）Vass.〕为例,对沙生植物PCR模板制备方法进行了比较研究。结果表明：2×CTAB法提取的DNA产量及质量较高,PCR扩增谱带稳定、清晰,但方法繁琐,单个样品处理时间长,耗时耗力;NaOH法制备模板DNA简单快速、经济高效,在1-2 h可提取10-20个样品,比常规方法快3-5倍,并可产生稳定、可靠、重复性好的PCR扩增谱带;直接扩增法是一种更加快速、简便、廉价的制备方法,适宜制备大批量的PCR模板。研究结果对其他荒漠植物,尤其是叶片极端退化或珍稀濒危植物的PCR模板制备具有指导意义。