Chelex-100法联合磁珠法检测泥土精斑DNA1例

1案例 某日,某女在一偏僻河道的绿化带内被强奸、抢劫。提取受害人的阴道擦拭物和内裤,PSA试剂条检验,均为阴性,镜检未检出精子。勘验人员遂对现场进行复勘,在现场提取到5.1cm×4.6cm的泥土1块。

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法(M48)和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。

ML-超微量磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞的比较研究

目的对ML-超微量磁珠法(King Fisher Flex)和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化案件里脱落细胞检材的提取方法提供方向。方法对同一份检材(纺织品或作案工具)利用两种提取方法进行DNA的平行提取,常规STR检测,经卡方检验比较差异。结果 112份纺织品检材中ML-超微量磁珠法检出率为58.0%,Chelex-100检出率则为45.5%,差异具有统计学意义(χ~2=7.00,P<0.05)。130份作案工具检材中ML-超微量磁珠法检出率为41.5%,Chelex-100检出率则为33.8%,差异具有统计学意义(χ~2=4.55,P=0.03)。结论 ML-超微量磁珠法(King Fisher Flex)提取脱落细胞更具有优势。

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。

DNA数据库建设中批量样品不同DNA提取方法的比较

目的比较和选择自动化工作平台提取DNA的方法,并用于DNA数据库建设。方法用手工Chelex-100法、Biomek3000自动化工作平台结合Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法对实验室收集的建库滤纸血样进行DNA提取,荧光定量技术对上述3种方法提取的模板DNA进行测定;扩增产物用3100基因分析仪检测并用基因分析软件分析。结果手工Chelex-100法、自动化Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法提取的DNA模板浓度分别为0.593ng±0.131ng/μl、0.579ng±0.096ng/μl、0.447ng±0.056ng/μl;成功率分别为100%、98.9%、99.5%。结论本文建立的自动化Chelex-100法可用于大规模DNA数据库建设。

三种检验方法在接触性检材中比较及应用

目的:运用Chelex-100法、直接扩增法、磁珠法对日常案件中常见的接触性检材进行检验及比对,以获得最佳的方法。方法:运用三种方法提取接触性检材DNA,并对结果进行比对分析。结果:直接扩增法操作方便、快速,对无抑制物的检材检出率高;磁珠法对污染、有抑制物的检材效果最好;Chelex-100法检验效果不理想。讨论:直接扩增法和磁珠法在接触性检材DNA的检验中有各自的优势,可根据案件中检材的具体情况作出合适的提取方法。

对腐败血液DNA三种提取方法的比较

对新鲜的血液或者血痕,采用直接扩增和chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得完整、均衡的DNA分型,但在日常检案过程中,陈旧血痕、载体潮湿、委托方送检的样本由于保存不当导致血液和少量血痕检材腐败的情况也比较常见。这类检材DNA采用普通的chelex-100直接提取很难获得比较完整的DNA分型。结合一列检案,分别用chelex-100、磁珠法、微量DNA提取试剂盒三种方法专门针对腐败血液进行比较分析。

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法 10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30min、1h、3h、6h、12h、24h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。

应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究

目的建立对大批量血斑样品PCR—STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件，建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法；筛选确定PCR—STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chdex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座，定量PCR测定模板浓度均值为0．43ng／ml，荧光检测信号在200～800RFU之间；对其中114份血斑样品用DNA IQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座，定量PCR测定模板浓度均值为0．7ng／ml，荧光检测信号在1000～2000RFU之间；对其中50份血斑进行自动和手动Chelex-100检验法比较，成功率分别为100％和98％，且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法，在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。

胎盘粉DNA分析1例

1案例1.1简要案情某年3月5日,某县发生一起强奸致孕案,之后受害人姚某在私人诊所内非法实施引产手术,诊所私自截留胎盘进行干燥、粉碎、加工处理并作为保健品原料贩卖。最后警方根据线索追回疑似受害人姚某引产所留部分胎盘粉,为明确该胎盘粉是否为受害人所留,要求对胎盘粉进行检验。

陈旧性血迹的DNA检验

该文利用Chelex-100法和M48磁珠提取法分别提取陈旧性血迹,比较发现,M48磁珠提取法更适用于陈旧性血迹的DNA检验。

烟头上脱落细胞3种DNA提取方法的比较

目的比较采用3种方法提取烟头上脱落细胞DNA的成功率,评价其应用价值。方法 91枚实际检案中积累的烟头,按过滤嘴的水松纸材质颜色分为深色(68枚)和浅色(23枚)两组;采用Chelex-100法、DNA-IQ磁珠法和骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱,提取烟头上的脱落细胞DNA;Identifiler-Plus试剂盒进行扩增、AB 3130x L型遗传分析仪及Gene Mapper ID-X v1.2基因软件进行检测,对两组检验成功率进行比较。结果采用Chelex-100法、磁珠法和联合纯化柱提取各组DNA的分型成功率在浅色组分别为:82.6%、91.3%和95.7%,不同方法之间比较无显著性差异(P>0.25);深色组分别为:60.3%、29.4%和91.2%,不同方法之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论本文3种方法中,骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱方法更能适应不同材质过滤嘴外层纸上脱落细胞的DNA提取,可在相关检验中选择使用。

DNA检测技术分析血迹陈旧度的初探

利用不同的DNA检测方法初步分析相差10年的血迹陈旧度,探究不同DNA检测方法对血迹陈旧度的影响程度。采用直扩法、Chelex-100提取法和磁珠提取法3种不同的DNA检测方法从基因分型的均衡性、峰高、峰面积的均值与比值分析2009~2018年度的血滤纸检材的陈旧度。从结果的均衡性、峰高和峰面积结果分析可见,与其余2种方法比较,对于血滤纸的检测,直扩法存在一定的优势。通过DNA检测技术分析血迹陈旧度的研究是可行的,并提示存放年份越久的血滤纸,其峰高和峰面积的均值越大,比值亦显示越大。