用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究

为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。

生物检材DNA碱性裂解提取法的优化与改良

目的通过对DNA碱性裂解提取法进行优化和改进,建立一种操作更简便、检验快速、结果更可靠的生物检材DNA提取方法。方法以抗凝血作为检验样本,通过改变提取试剂的浓度、pH值、保存时间及孵化样本的温度、时间等条件,观测对检验结果峰值的影响,以确定提取试剂最佳条件,DNA提取物最佳保存条件。通过用改良后的碱性裂解法及Chelex100法同时提取不同量的抗凝血样本、各类法医生物检材,用不同厂家的DNA试剂盒扩增,对碱性裂解法的灵敏度、适应性和适用性进行评估。结果改良后的碱性裂解法只需将生物检材用NaOH(0.25mol/L)99℃孵化8min,振荡后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH=6.5)中和液,离心后直接扩增检测。DNA提取物于-20℃冰箱可长期保存。对于毛发及精斑类检材优于Chelex100法。DNA提取物适用于现有各种DNA试剂盒扩增检测,其灵敏度与Chelex100法相似。结论改良后的碱性裂解法,操作简便、检验快速、结果可靠,可适合于法庭科学的检案与建库。