以Chelex 100为介质检测儿童恶性淋巴系统肿瘤IgH和TCR基因重排

应用ＰＣＲ技术检测５０例儿童恶性淋巴系统肿瘤ＩｇＨ和ＴＣＲ基因重排，了解儿童患者重排特点，以便选择恰当的组合用于ＭＲＤ检测。

S100A蛋白家族在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病之一,且以促肿瘤血管生成或肿瘤免疫微环境等恶性生物学行为作为主要的驱动事件。近年S100A蛋白家族被作为生物标志物在多种肿瘤的诊断中广泛应用,参与细胞内外的生理和病理过程,S100A蛋白可与细胞表面的受体相结合,而这些受体可触发炎症信号通路。S100A蛋白家族与恶性肿瘤细胞的异常表达及肿瘤的发展、侵袭密切相关,可作为新型抗肿瘤靶向药物的作用靶点。因此,深入研究S100A蛋白家族在恶性肿瘤中的作用机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

CD34和S100共表达的ALK重排皮肤梭形细胞肿瘤2例及文献复习

目的报道2例具有独特形态学特征、CD34和S100共表达的间变性淋巴瘤激酶(ALK)重排皮肤梭形细胞肿瘤,以提高临床医师对该类软组织梭形细胞肿瘤的认识。方法收集2例外院会诊的病例,采用免疫组化EnVision二步法检测肿瘤中vimentin、ALK(D5F3)、BCL2、CD34及Ki-67的表达情况。1例使用荧光原位杂交(FISH)法断裂探针、1例通过二代测序(NGS)检测ALK基因重排。结果形态学上,肿瘤细胞由温和的梭形细胞或卵圆形细胞构成,呈束状或漩涡状排列,间质玻璃样变及黏液变性,可见较多开放的血管腔。该类肿瘤同时表达CD34和S100,存在ALK基因重排。结论2例CD34和S100共表达的ALK重排皮肤梭形细胞肿瘤具有独特的形态学,具有相同的免疫组化表达及分子特征,与NTRK重排梭形细胞肿瘤具有相似的临床病理学特征。

Chelex-100快速提取放线菌DNA作为PCR扩增模板

旨在建立有效扩增16S rRNA基因序列的放线菌DNA快速提取的方法。采用Chelex-100法提取放线菌DNA,使用PCR扩增16S rRNA基因序列评价提取核酸的质量。结果显示,Chelex-100法能够在10 min之内从放线菌中快速提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,符合理论预期结果。因此,Chelex-100法提取放线菌DNA可以作为16S rRNA基因序列PCR扩增的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于放线菌菌株大规模地筛选和分类鉴定。

Chelex-100快速提取动物源饲料DNA方法的建立

为防止疯牛病疫区反刍动物源性饲料传入我国,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定。本文建立了一种利用Chelex-100快速提取动物源性饲料DNA的方法,用于反刍动物源性饲料的PCR扩增分析。结果显示该方法与GuSCN法、SDS法同样理想,从而实现了对进境饲料的快速检定的要求。该方法检测灵敏度达到牛成分含量为0.1%的水平,具有简单、快捷、灵敏度高的优点。

改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较

以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价。结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰。因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点。

一种改进的Chelex-100法提取单头螨DNA

提供了一种改进的Chelex-100法从单头螨中提取DNA,通过充分研磨以及反复冻融从单头螨得到的DNA可直接用于PCR。实验结果表明:与酚-氯仿法相比,此方法提取单头螨的DNA效果理想,操作简单,稳定性好;以3种不同类群螨为验证样,表明Chelex-100法可广泛用于各种螨的单头螨DNA提取;对于70%的酒精和奥氏螨保存液分别保存的个体,以及永久玻片标本,运用此方法均可提取出DNA,其中酒精保存标本提取效果最好;所提取的DNA在-20℃条件下可做长期保存。实验证明,改进的Chelex-100法是一种获取螨类等微小动物基因的较好方法。

Chelex-100快速提取用于转基因检测DNA模板的研究

目的:建立从转基因作物中快速提取DNA的方法。方法:采用Chelex-100法提取抗草甘膦大豆和非转基因大豆、转基因抗虫玉米Bt176和非转基因玉米中的DNA,使用PCR扩增大豆和玉米的内源基因(Lectin,zSSIIb)及外源特异性序列(CaMV35S,Bt176)评价提取核酸的质量。结果:Chelex-100法能够快速在1h之内从大豆和玉米中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,转基因抗草甘膦大豆样品和转基因抗虫玉米Bt176检测均出现强阳性结果。结论:Chelex-100法提取DNA可以作为转基因检测的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于转基因检测工作。

PCR-RFLP中Chelex-100制备DNA模板的方法建立及其条件优化

目的:建立一种快速、可靠、经济的DNA纯化技术用于分子流行病学调查及群体遗传学的研究.方法:根据MMP3基因外显子2中rs679620的SNP区域(-Lys45Glu-)设计引物,采用Chelex-100法从微量全血中提取人基因组DNA,利用PCR-RFLP对其进行检测,观察基因分型结果.结果表明:取10μL全血,加入200μL 5%Chelex-100溶液,56℃水浴保温30 min后,100℃水浴8 min,离心取上清为最佳用于PCR的DNA模板提取条件.经PCR扩增及酶切验证,其DNA条带特异、清晰,适用于基因分型.结论:提取人基因组DNA的Chelex-100法所需血样微量、操作简单、快速、可靠、经济,特别适合于大量样本的DNA提取,可用于人群分子流行病学调查及群体遗传学的研究.

Chelex-100法提取滤纸血痕DNA影响因素的比较

目的改进滤纸血痕DNA提取方法,建立更简便、廉价,适合当前DNA建库需要的提取方法。方法将752份滤纸血痕分成四组,分别按照四种不同的Chelex-100法进行DNA提取并进行比较研究;63份新鲜血痕分别按照两种方法提取并进行对比研究。结果对于陈旧滤纸血痕,四种提取方法的检测成功率无显著差异(P>0.05);对于新鲜血痕,两种提取方法的检测成功率有显著差异(P<0.05)。结论对于建库陈旧滤纸血痕样本的DNA提取可采用不加纯水处理,直接加入Chelex-100的方法进行。

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。

Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA进行基因型分析的研究

目的 :探讨采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA这一方法的有效性和可靠性。 方法 :用棉签刮取 130例个体口腔颊粘膜脱落细胞 ,采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子中提取DNA ,采用SSP PCR及PCR PFLP法对其进行检测 ,观察结果的有效性和可靠性。 结果 :所有样本中都获得成功。电泳结果显示 ,PCR扩增及酶切的靶带清晰 ,无非特异性杂带 ,扩增结果重复性好。 结论 :采用Chelex 10 0法从颊粘膜拭子提取DNA ,方法稳定可靠 ,可以用于基因型检测。

用Chelex100法及有机溶剂提取法联合提取DNA扩增STR基因座的比较研究

为了比较不同方法提取DNA扩增STR基因座的成功率 ,本文用Chelex10 0法及Chelex10 0法联合有机溶剂提取法分别提取性犯罪案件 6份血斑及 6份混合斑中精子DNA ,并用PE公司ProfilerPlus系统复合扩增 ,ABI 310型基因分型仪检测。结果表明 ,常规采用Chelex10 0法提取血斑及精斑等生物检材DNA作STR基因座检验失败或所检测的位点较少时 ,应对Chelex10 0法提取的DNA上清液再用有机溶剂提取法提取 ,可极大提高DNA检验成功率。采用本文建立的Chelex10 0法联合有机溶剂提取法 ,提高了PCR扩增阳性率 ,对实际检案很有帮助 ;在PCR扩增前应常规进行DNA定量检验 ,否则对于重要检材应进行梯度扩增。

Chelex-100法快速提取石蜡组织中EB病毒基因组DNA

目的:以鼻咽癌石蜡组织为材料,用Chelex-100法提取鼻咽癌组织中EB病毒基因组DNA,并以此为模板扩增出EBNA-3C片段,以建立快速提取石蜡组织中EB病毒基因组DNA的方法。方法:应用原位杂交方法检测30例鼻咽癌石蜡切片组织中EB病毒编码的小RNA(EBER)的情况,应用Chelex-100法快速提取鼻咽癌组织中EB病毒基因组DNA,并以此为模板用PCR扩增出EBNA-3C片段。结果:(1)30例鼻咽癌石蜡组织中原位杂交检测EBER全为阳性。(2)用Chelex-100法从30例鼻咽癌石蜡组织中提取了EB病毒基因组DNA并成功扩增出EBNA-3C片段。结论:Chelex-100法是快速提取鼻咽癌石蜡组织中EB病毒基因组DNA的高效方法。

Chelex100法和有机法联合应用检验微量精斑DNA

某日一女学生(16岁)在放学回家途中被犯罪分子强奸.现场提取卫生纸1份,在其边缘部位留有少许擦拭状斑迹,据受害人回忆,这是案发时犯罪分子曾用过并弃下的.

Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA的比较

目的:通过对两种DNA提取方法的比较,寻找一种灵敏、快速、经济实用的提取方法。方法:采用Chelex-100法和碱性裂解法分别提取不同浓度大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923的DNA,利用通用引物扩增16SrDNA片段检测两种方法的灵敏度。结果:碱性裂解法提取的不同浓度的两种细菌DNA,经PCR扩增均未显出目的条带;Chelex-100法提取不同浓度的两种细菌DNA均扩增出目的条带,PCR检测大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的灵敏度均为1.2×101cfu/ml,电泳结果提示相同浓度的大肠杆菌被提取到的DNA含量比金黄色葡萄球菌的含量高。结论:Chelex-100法操作简便,可用于细菌DNA的快速提取。

Chelex-100法提取甘薯小象甲DNA及云南地区甘薯小象甲的分子鉴定

甘薯小象甲是国内外重要的检疫性害虫,除本身为害薯块外,引起的伤口还会诱致病菌侵入,使受害薯块发生恶臭和苦味无法食用。准确鉴定云南地区的甘薯小象甲,特别是研究其遗传变异可为检疫提供依据。本研究采集了云南元谋县甘薯小象甲,采用Chelex-100法快速提取甘薯小象甲基因组DNA,分别对雌雄成虫rDNA ITS-1序列进行系统发育分析,首次发现云南元谋县的甘薯小象甲属于东亚分支的东南亚亚支,与我国之前报道的甘薯小象甲属于东亚分支的东北亚亚支不同,说明云南元谋县的甘薯小象甲种群来源与中国广东、福建、浙江和重庆的种群来源不同。

血痕Chelex 100抽提DNA用于人类TNF-α基因启动子区SNP分型

建立快速、简便的血样本采集及DNA抽提方法,可用于大规模的分子流行病学调查及群体遗传学研究。采用无菌纱布为载体取血,Chelex100快速抽提DNA,用TaqManMGB探针对人类TNF-α基因启动子区-857(C/T)位点进行SNP分型。344份血样均得到明确的分型结果,获得的荧光信号强,本底低。深圳地区汉族群体-857位点基因型频率分别为:cc为0.78,ct为0.21,tt为0.01。血痕Chelex100抽提DNA为大规模血样本的采集,DNA的抽提提供了有效的手段。

饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较

在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。