肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4的表达与患者免疫功能、炎症反应因子及预后的关系

目的探究肺癌组织中内质网氧化物蛋白(ERO1L)、肿瘤坏死因子受体4(TNFRSF4)的表达与肺癌患者免疫功能、炎症反应因子及其预后的关系。方法选取2018年7月~2020年7月于本院进行手术治疗的108例肺癌患者,收集术中留取的癌组织和癌旁组织标本。采用qRT-PCR检测ERO1L和TNFRSF4的mRNA相对表达量;使用免疫组织化学法检测ERO1L和TNFRSF4蛋白表达情况,分析二者表达水平与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析ERO1L、TNFRSF4蛋白表达水平与患者预后的关系。肺癌患者预后生存率的影响因素采用Cox多因素分析。结果肺癌患者癌组织中ERO1L mRNA表达水平显著高于癌旁组织,TNFRSF4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中ERO1L蛋白高表达率显著高于癌旁组织,TNFRSF4蛋白高表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。ERO1L蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著低于低表达组(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α显著高于低表达组(P<0.05);TNFRSF4蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著高于低表达组,IL-1β、IL-6、TNF-α显著低于低表达组(P<0.05)。ERO1L高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=6.100,P=0.014),TNFRSF4高表达组患者3年累积生存率显著高于低表达组(Log rankχ^(2)=11.296,P=0.001)。肺癌组织的低分化、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、ERO1L高表达、TNFRSF4低表达是影响患者生存率的危险因素。结论肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4表达与患者免疫功能、炎症因子以及预后具有一定关系。

CKLFSF1基因与CKLFSF2基因间存在的顺式作用元件

探讨趋化素样因子超家族成员 1,2基因 (CKLFSF1基因与CKLFSF2基因 )间的短序列对其下游基因表达的调控作用 .运用PCR技术扩增CKLFSF1基因与CKLFSF2基因间的序列 ,将此片段插入含有萤光素酶 (luciferase)报告基因载体上 .以磷酸钙介导基因转染技术 ,将重组质粒以及阴性和阳性对照组质粒转染到HeLa细胞 ,进行瞬时表达分析 .在pGL3 Basic质粒中的报告基因萤光素酶无表达 ,但将CKLFSF1与CKLFSF2基因间的序列插入到启动子上游或下游后 ,显著抑制其下游基因的表达 ,萤光素酶活性明显降低 .结果提示 ,CKLFSF1与CKLFSF2基因间的序列不具有启动子活性 。

食管、贲门癌组织中CMTM4、8的表达及意义

目的检测食管、贲门癌组织中人类趋化素样因子超家族(CKLFSF)成员CMTM4、8的表达并探讨其临床意义。方法使用组织微阵列(TMA)和免疫组织化学方法(IHC)检测60例食管癌和贲门癌肿瘤组织以及癌旁正常组织中CMTM4、8蛋白的表达。结果CMTM4、8在癌旁正常组织中的阳性表达率均为100%,在肿瘤组织中的阳性表达率分别为31.7%和26.7%,两组相比,P<0.01。CMTM4、8蛋白在肿瘤组织中的表达程度与患者性别、病理类型、病理分化程度和临床分期之间无明显相关(P>0.05)。结论CMTM4、8可能是肿瘤抑癌基因。

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的探究微小RNA(miR)-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6(CMTM6)对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1(PDL1)蛋白表达水平。结果与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低(P<0.05),CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高(P<0.05),CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。

HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义

目的:研究缺氧诱导因子2α(HIF-2α)及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体(MSs)裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制。方法:原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照。免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平。结果:原代MSs具有较强的动物成瘤性。免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达。Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量(P<0.05);HIF-2αmRNA及ABCG2mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量(P<0.05)。结论:HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制。

缺氧对人乳腺癌细胞微球体生长及化疗耐药性的影响

目的研究缺氧对人乳腺癌细胞微球体(mammospheres,MSs)培养效率及其化疗耐药性的影响。方法分别在常氧及缺氧条件下对人乳腺癌MDA-MB-231细胞进行无血清悬浮培养,观察记录MSs的生长速率及体积变化。MTT比色法检测各组人乳腺癌微球体细胞(mammospheres-derived cells,MSDCs)及MDA-MB-231细胞在不同浓度、不同药物作用下的存活率(survive rate,SR)。免疫组织荧光化学法检测HIF-2α、ABCG2在各组MSDCs中的表达。Western blot检测乳腺癌干细胞标志物CD44及ALDH1在各组MSDCs中的表达。Western blot及Real-time RT-PCR检测HIF-2α、ABCG2、P-gp及MDR1在各组MSDCs中的表达。结果缺氧组MSs生长速率及球体体积优于常氧组。缺氧组MSDCs在不同化疗药物作用下的SR高于常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞(P<0.05)。免疫组织荧光化学检测发现HIF-2α及ABCG2在缺氧组MSDCs中的表达强于常氧组。Western blot检测发现CD44与ALDH1在缺氧组MSDCs中表达量高于常氧组。缺氧组MSDCs中HIF-2α、ABCG2及P-gP蛋白表达量均高于在常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞中的表达(P<0.05)。Real-time RT-PCR检测发现缺氧组MSDCs中HIF-2α、ABCG2及MDR1 mRNA的表达量均高于常氧组MSDCs及MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论以HIF-2α为启动因子,ABCG2、MDR1及P-gP等为效应因子的生物化学反应可能是缺氧状态加快MSs的成球速度、提高其球体体积、增强其化疗耐药能力的可能机制。

趋化素样因子超家族8研究进展

趋化素样因子超家族(CMTM)是北京大学人类疾病基因研究中心在国际上首次报道的新基因家族,CMTM8是该家族成员,其基因编码产物具有潜在的4次跨膜蛋白结构,是一个新的肿瘤抑制基因。CMTM8在多数肿瘤细胞系和组织中表达明显下调或不表达,过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭功能。CMTM8抗肿瘤的机制尚未完全明确,可能参与多个与癌症发生发展密切相关的信号通路。对CMTM8与肿瘤发生发展机制的进一步研究具有重要意义,其有望成为肿瘤基因治疗的新靶标。

趋化素样因子超家族成员3研究进展

人趋化素样因子超家族成员3(CKLFSF3/CMTM3)是一种新发现的肿瘤抑制基因,在进化过程中高度保守,广泛表达于人类正常组织,尤其在睾丸、脾、白细胞中高度表达,但在大多数肿瘤细胞系和组织中表达下调或不表达,恢复其表达可抑制肿瘤细胞的增殖、黏附和迁移等生物学行为。CKLFSF3/CMTM3的抗肿瘤机制目前尚不明确,研究显示其在肿瘤发生发展过程中与机体免疫系统密切相关,并与性别相关。本文总结了CKLFSF/CMTM家族成员、肿瘤抑制基因CKLFSF3/CMTM3的结构功能特点及进展。

影响产妇入住温馨病房的社会经济因素分析

目的 调查了解影响产妇入住温馨病房的社会经济因素 ,发现问题 ,寻求对策。方法 抽样调查 ,分组对比 ,多因素统计分析。结果 目前经济因素仍是居民是否接受特需卫生服务的决定性因素 ,社会因素如丈夫的综合素质对产妇是否入住温馨病房有重要影响。结论 在不影响基本医疗服务的前提下 。

急性心肌梗死患者血清CD137、mir-335-5p水平及其与预后的关系

目的检测微小RNA-335-5p(miR-335-5p)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(CD137)在急性心肌梗死(AMI)患者血清中的表达情况,探讨两者对AMI的影响及与预后的关系。方法本研究选取2015年3月至2017年6月于河南省第二人民医院心内科收治的已确诊AMI患者85例为AMI组,另选取同时期入院健康体检者73例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清中miR-335-5p的表达情况;ELISA法检测血清中CD137、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌红蛋白(MyO)的表达情况,采用Pearson法分析CD137、miR-335-5p与cTnI、MyO间的相关性,探讨两者表达水平与预后的关系。结果与对照组相比,AMI组患者的CD137、cTnI和MyO表达水平显著增加,而miR-335-5p表达水平则显著降低(P<0.05);随着发病时间的延长cTnI、MyO、CD137表达水平在4~8 h内持续增加,而miR-335-5p表达水平则持续降低。Pearson法分析发现,AMI患者血清中CD137与cTnI、MyO表达均呈明显正相关关系(P<0.05),而miR-335-5p与cTnI、MyO表达均呈明显负相关关系(P<0.05);此外,CD137低表达与高表达组相比预后生存率更高,miR-335-5p高表达与低表达组相比患者预后生存率更高。结论AMI患者血清中CD137表达水平显著增加,miR-335-5p表达水平则显著降低,其表达量可作为检测AMI发病的重要参照指标之一,并可用于判断病情严重程度及预后。

CMTM家族成员在肿瘤细胞中的分子机制及潜在临床价值

恶性肿瘤已成为危害人类健康的重要杀手,针对肿瘤的研究也成为当今医学界的热点。含有MARVEL跨膜结构域的趋化素样因子基因家族(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing family of genes,CMTM family),原名人类趋化素样因子超家族(chemokine-like factor super family,CKLFSF)是由我国学者首次发现的新的基因家族,有着广泛的生物学功能,与人体免疫、造血和生殖系统以及肿瘤具有密切关系。CMTM家族在多种常见肿瘤中表达失调,能够参与多种与癌症发生发展密切相关的信号通路,与肿瘤细胞生物学行为改变有着密切关系。CMTM家族成员在调控肿瘤细胞生物学功能的信号分子机制中具有重要作用,其能够调控肿瘤细胞的细胞周期与细胞凋亡进程、上皮-间充质转化进程和表皮生长因子受体相关的信号通路,并通过调节程序性死亡受体-配体1与肿瘤免疫微环境密切相关。本文综述了CMTM家族在肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物过程中的信号分子机制,以及CMTM家族在卵巢癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌等多种常见恶性肿瘤中潜在的临床价值。目前,CMTM家族与肿瘤相关的详尽分子机制尚未完全明确。深入研究CMTM家族在肿瘤中表达、生物学作用以及调控机制将会为肿瘤的诊断、治疗以及预测预后等方面提供新的思路和靶点。

人类趋化素样因子超家族在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨人类趋化素样因子超家族（CKLFSF）成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法应用组织微阵列和免疫组织化学方法检测50例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白的表达及差异。结果CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在癌旁正常肺组织中的阳性表达率均为100％，在NSCLC组织中的阳性表达率分别为12％、2％、14％和26％，差异有统计学意义（P〈0．01）。性别、病理分化程度、病理分期与CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在NSCLC组织中的表达程度之间无明显相关（P〉0．05）。肺腺癌组织中CMTM1、CMTM4蛋白的表达明显高于其在鳞癌组织中的表达（PcmTm1=0．011，PcmTm4〈0．01）。结论位于人类染色体同一基因簇内的趋化素样因子超家族成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4可能是潜在的NSCLC抑癌基因。

催乳素对刀豆蛋白A诱导活化T淋巴细胞免疫应答的影响

目的研究催乳素(PRL)对刀豆蛋白A(ConA)诱导活化T淋巴细胞的影响,探讨PRL在T淋巴细胞活化中的作用。方法用25μg/L的PRL与500μg/L的溴隐亭(Brc)单独或联合刺激5 mg/LConA诱导活化的CD4+T淋巴细胞系JurkatE6-1细胞,实验设置空白对照组、ConA组、ConA和PRL联合刺激组(PRL组)、ConA和Brc联合刺激组(Brc组)、ConA和PRL及Brc联合刺激组(PRL-Brc组),药物刺激48 h后,Trizol法提取Jurkat E6-1细胞总RNA,反转录后,利用PCR技术检测TNF受体相关因子6(TRAF6)基因的表达,利用反转录酶PCR技术检测TNF超家族成员4(TNFSF4)和相对分子质量为37 000的杀伤特异性分泌蛋白(KSP37)基因的表达。结果与空白对照组、ConA组比较,PRL组和Brc组活化T淋巴细胞TRAF6、TNFSF4、KSP37基因的表达显著降低(Pa<0.05);与PRL组和Brc组比较,PRL-Brc组可明显逆转PRL对活化T淋巴细胞TRAF6、TNFSF4、KSP37基因表达的抑制(Pa<0.05);与空白对照组比较,PRL-Brc组可明显抑制活化T淋巴细胞TRAF6基因的表达(Pa<0.01),KSP37及TNFSF4的表达高于空白对照组但是无统计学意义(Pa>0.05);与ConA组比较,PRL-Brc组可明显抑制活化T淋巴细胞TRAF6、TNFSF4、KSP37基因的表达(Pa<0.01)。结论生理浓度的PRL可以通过抑制活化T淋巴细胞中TRAF6、TNFSF4、KSP37的表达参与T淋巴细胞应答;Brc可通过拮抗PRL对活化T淋巴细胞的TRAF6、TNFSF4、KSP37的抑制用于治疗PRL引起的疾病。

影响生长卵泡发育的相关因素

卵泡发育可分为原始卵泡、生长卵泡和成熟卵泡3个阶段,其中生长卵泡阶段又可分为窦前卵泡、窦卵泡及排卵前卵泡.卵泡发育过程受到来自卵母细胞、颗粒细胞、膜细胞、基质、血管等多方的因素相互作用,变化丰富、复杂,过程中任何一分子或信号通路的异常即有可能引起卵泡发育的障碍.本文就影响生长卵泡发育阶段的相关因素进行梳理与总结.

当归拈痛汤对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织内外凋亡途径关键因子的影响

目的:观察当归拈痛汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织内、外凋亡途径中关键调控因子表达水平的影响,进一步探讨该方防治类风湿关节炎的作用机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤组(11.34 g·kg^(-1))和雷公藤组(9.45 mg·kg^(-1)),除正常组外,其余各组采用灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,于免疫当天开始按分组每日灌胃给药,正常组与模型组大鼠给予等体积生理盐水,持续28 d。观察大鼠一般情况和体质量改变,足趾容积测量仪检测受试大鼠足趾容积的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织形态学改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas),Fas相关死亡域蛋白(FADD),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及其共同下游效应分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾容积显著增加(P<0.01),滑膜细胞增生显著,滑膜组织Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,当归拈痛汤组和雷公藤组大鼠的足趾肿胀度显著减轻(P<0.01),滑膜增生情况明显改善,Fas,FADD,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:当归拈痛汤可以有效减轻AA大鼠关节肿胀情况,改善滑膜组织异常增生,其作用机制可能与调控内、外在凋亡途径相关因子Fas,FADD,Bax,Bcl-2,Caspase-3表达,促进滑膜细胞凋亡相关。