目的:基于微滴式数字PCR技术(Droplet Digital PCR,ddPCR)建立欧洲甜樱桃中掺假苹果成分定量检测的方法。方法:通过筛选欧洲甜樱桃、苹果成分特异性引物探针,建立ddPCR定量检测方法,构建质量和DNA含量的拟合曲线及DNA含量与拷贝数之间...目的:基于微滴式数字PCR技术(Droplet Digital PCR,ddPCR)建立欧洲甜樱桃中掺假苹果成分定量检测的方法。方法:通过筛选欧洲甜樱桃、苹果成分特异性引物探针,建立ddPCR定量检测方法,构建质量和DNA含量的拟合曲线及DNA含量与拷贝数之间的拟合曲线,以DNA含量作为中间值,获得质量和扩增拷贝数的计算公式。其中线性拟合曲线R2均在0.99以上,且建立了相应的掺假模型以验证方法的准确性。结果:欧洲甜樱桃和苹果的质量和扩增DNA拷贝数的计算公式:M_(樱)=0.0833C−3.8420、M_(苹)=0.4084C−1.5747。在欧洲甜樱桃与苹果的掺假模型中相对误差最大为−19.17%,符合统计学要求。结论:建立欧洲甜樱桃制品快速检测方法为打击欧洲甜樱桃掺杂使假提供了强有力手段,保障了消费者的权益,对促进小浆果及其制品行业健康发展具有重要意义。展开更多
文摘以欧洲甜樱桃萨米托品种为研究对象,利用改进的CTAB法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了模板、Mg^(2+)、Taq E、dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立了欧洲甜樱桃RAPD技术扩增体系.研究结果表明,在25μl反应体系中,各组分最佳的浓度分别为:10×Buffer 2.5μl,2.5mmol·L^(-1)Mg^(2+)2.5μl,Taq E 0.06U·μl^(-1),0.2mmol·L^(-1)dNTPs,0.2μmol·L^(-1)Primer,模板DNA1.2ng·μl^(-1).PCR循环程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,36℃退火45s,72℃延伸1min,共36个循环,最后72℃延伸7min.
文摘目的:基于微滴式数字PCR技术(Droplet Digital PCR,ddPCR)建立欧洲甜樱桃中掺假苹果成分定量检测的方法。方法:通过筛选欧洲甜樱桃、苹果成分特异性引物探针,建立ddPCR定量检测方法,构建质量和DNA含量的拟合曲线及DNA含量与拷贝数之间的拟合曲线,以DNA含量作为中间值,获得质量和扩增拷贝数的计算公式。其中线性拟合曲线R2均在0.99以上,且建立了相应的掺假模型以验证方法的准确性。结果:欧洲甜樱桃和苹果的质量和扩增DNA拷贝数的计算公式:M_(樱)=0.0833C−3.8420、M_(苹)=0.4084C−1.5747。在欧洲甜樱桃与苹果的掺假模型中相对误差最大为−19.17%,符合统计学要求。结论:建立欧洲甜樱桃制品快速检测方法为打击欧洲甜樱桃掺杂使假提供了强有力手段,保障了消费者的权益,对促进小浆果及其制品行业健康发展具有重要意义。