黄连组方对大肠杆菌O_(78)的抑菌作用与临床疗效研究

为研究防治鸡大肠杆菌病的新方法,减少抗生素的使用及耐药菌株的产生,试验选取黄连、乌梅、白术等中药制成黄连组方口服液,检测其对大肠杆菌O_(78)的抑制作用与临床疗效。体外试验采用最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC)检测口服液抑菌效果;应用流式细胞仪观察口服液对细菌死亡率的影响;利用扫描电镜和透射电镜观察口服液对菌体形态与结构的影响;临床试验检测口服液对鸡大肠杆菌病的治疗效果及免疫器官指数的影响。结果显示,口服液对大肠杆菌的MIC为62.5mg/mL,MBC为250mg/mL;流式细胞仪检测可见口服液组大肠杆菌的死亡率为74.1%,空白对照组大肠杆菌死亡率为37.2%;扫描电镜下可见口服液处理组的菌体溢缩、断裂,形成许多残体;透射电镜下可见菌体变形,质壁分离现象。临床疗效显示,黄连组方治愈率为86.67%,而西药组治愈率为63.33%;空白对照组和西药组脾脏指数与模型组差异极显著(P<0.01),空白对照组、西药组、黄连组方高剂量组的法氏囊指数极显著高于模型组(P<0.01),模型组的胸腺指数显著低于其余各组(P<0.05)。本试验结果表明,黄连组方可使菌体发生变形、溢缩断裂、质壁分离等变化达到杀菌效果,并可通过提高动物体免疫力来防治雏鸡大肠杆菌病。

鸡源大肠杆菌河北分离株耐药性与质粒不相容群分析

为了了解鸡源大肠杆菌河北分离株的耐药情况及流行现状,本研究对其进行耐药性监测,并通过PCR方法测定其质粒不相容群。结果表明,39株大肠杆菌,对喹诺酮类药物耐药严重,其中氧氟沙星(Oxfendanzole,Ofl)最高,为76.9%,加替沙星(Gatifloxacin,Gat)最低,为64.1%;对氨基糖苷类的耐药情况差别较大,其中卡那霉素(Kanamycin,Kan)为100%,而壮观霉素(Spectinomycin,Spe)最低,为30.8%。质粒不相容群分析表明,IncB/O、IncK、IncFIB、IncFrepB、IncI1、IncA/C、IncFIC、IncP、IncN、IncFIA、IncT、IncL/M为阳性,其中前三者的阳性率最高,依次为41.0%,38.5%和25.6%;未检测到IncW、IncY、IncHI1、IncHI2、IncX、IncFIIs的存在,且多重比较显示,保定不同地区的禽源E.coli质粒类型无显著性差异(P>0.05)。

规模化鸡场大肠杆菌的分离鉴定及耐药性监测

为了对鸡致病性大肠杆菌的流行情况及耐药性调查分析,从山东省部分地区的60个鸡场采集了116份鸡内脏病料,结合培养特性对其进行了细菌的分离和生化鉴定,结果分离到大肠杆菌95株,其中致病性大肠杆菌76株。对这76株致病性大肠杆菌进行了12种抗生素敏感性试验,发现分离的菌株对12种药物均有不同程度的耐药性,青霉素对其完全没有抑制作用;新研制的利福平复合新药抑制作用最强,64.5%为高度敏感(49/76),34.2%中度敏感(26/76),表明该药对鸡大肠杆菌具有显著的效果;其中,丁胺卡那霉素(63.2%)、氟哌酸(55.3%)也有良好的抑菌作用。

鸡胚致死率作为检验鸡大肠埃希菌致病力指标的探讨

为探讨鸡胚致死率在检验鸡大肠埃希菌致病力方面的应用潜力，试验采用SPF级12日龄鸡胚和1日龄公雏鸡分别接种鸡大肠埃希菌菌株，检测20株鸡大肠埃希菌菌株对12日龄鸡胚和1日龄公雏鸡的致死率的相关性。结果显示，8株来源于患败血症鸡只的菌株致病力比较高，鸡胚致死率达到40％～70％；而来源于粪便的12株菌株中，10株菌株的致病力较低，其鸡胚致死率在0％～20％之间；雏鸡致死率与鸡胚致死率是相关的。表明鸡胚致死试验可反映出大肠埃希菌的毒力强弱，即鸡胚致死率可作为检验鸡大肠埃希菌致病力强弱的一种方法。

间接ELISA检测鸡大肠埃希氏菌菌毛抗体方法的建立

用大肠埃希氏菌O1、O2 、O3、O78和O89株制备ELISA抗原 ,与抗鸡Ig单抗 1B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法。经交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高 ;确立了将鸡血清 10 0倍稀释检测ELISA效价 (ET)的回归方法 y =2 .45 3 + 0 .131x(P >0 .0 5 ) ,可用于定量测定。用IH与ELISA方法的比较试验表明 ,ELISA法比IH法敏感性高 4— 10

百病特灵可溶性粉治疗雏鸡大肠杆菌病的试验研究

选用杯碟琼脂扩散法和染菌动物药物治疗法，验证和评价新兽药百病特灵可溶性粉对鸡大肠杆菌的体外抗菌效能和雏鸡大肠杆菌病的疗效。结果证实，本药对此菌的抑菌圈直径均值，比对照药盐酸思诺沙星大１．１６倍；饮服百病特灵可溶性粉水溶液的最适治疗浓度为 ３０～ ６０ｍｇ·Ｌ－１，每天 ２次，给鸡饮服，连用 ３～ ５ｄ，对此病的治愈率均达１００％，相对增重率分别为１３８．９８％～１８０．６３％。比阳性对照组鸡死亡率降低８７．５％；比阴性对照组鸡的相对增重率提高３８．９８％～８０．６３％。比对用盐酸思诺沙星组鸡的治愈率提高１０％，相对增重率提高３４．９４％～７６．５％。

大肠杆菌粗制溶菌物对鸡的慢性致病作用

从鸡大肠埃希氏菌制备出含内毒素的粗制溶菌物。将此溶菌物给几群肉用仔鸡从１７日龄到２５周龄期间每周１次静脉注射，临床表现和病理变化表明，大肠杆菌溶菌物对鸡的生长和产蛋性能的影响甚小（ｐ＞０．０５）．重要病变见于肝，主要为局灶性淀粉样变和血停滞。其它器官的病变以局部血液循环障碍为特征。

鸡包涵体肝炎合并大肠肝菌病的临床病理学研究

通过对一鸡场自然发病的雏鸡进行的临床病理学研究认为：该起疾病一部分病鸡主要呈现的是单纯性包涵体肝炎的变化，另一部分则主要呈现的是包涵体肝炎合并大肠杆菌病的变化。患单纯性包涵体肝炎的病鸡临床上主要表现精神沉郁、淤血、贫血、出血、黄殖和下痢等病状，在病理方面则主要表现肝急性变质性出血性肝炎的变化，在高度变性的肝细胞核内可见嗜酸性或嗜碱性包涵体。十二指肠均呈现急性出血性肠炎的变化。息包涵体肝炎合并大肠杆菌病的病鸡除具有上述临床病理变化外，尚见有纤维性心包炎、肝包膜炎及肝坏死等大肠杆菌病特征的变化。

赤芍黄柏制剂对致病性大肠杆菌人工感染雏鸡的肠道菌群多样性的影响

为了解不同浓度赤芍黄柏制剂对致病性大肠杆菌(Escherichia coli)感染的雏鸡肠道菌群多样性的影响,本研究对240只15日龄健康雏鸡随机编号后分为空白对照组(CON)、感染组(BC)、低剂量治疗组(TL)和高剂量治疗组(TH)4个组,除对照组外,其余各组(BC、TL、TH)均使用致病性大肠杆菌进行感染,感染0.5 d后,分别用不同浓度的赤芍黄柏制剂对TL组(4 mL·L^(-1)灭菌水)和TH组(12 mL·L^(-1)灭菌水)进行饮水治疗,治疗5 d后统计各组发病率及死亡率,采用高通量测序技术检测雏鸡十二指肠肠道菌群多样性。结果显示,与感染组相比,TH组显著降低了雏鸡的发病率和死亡率(P<0.05)。菌群分析显示,赤芍黄柏制剂处理改变了雏鸡肠道菌群多样性组成,提高了乳杆菌属的丰度。CON组优势菌群以厚壁菌门、肠球菌属为主;BC组肠道优势菌群主要为厚壁菌门、变形菌门、肠球菌属、大肠杆菌属及葡萄球菌属;TL组优势菌群以厚壁菌门、乳杆菌属、肠球菌属及葡萄球菌属为主;TH组优势菌群以厚壁菌门、乳杆菌属为主。热图分析显示,乳杆菌属与发病率和死亡率呈负相关,大肠杆菌属与发病率和死亡率呈正相关(P<0.05)。综上,大肠杆菌感染及赤芍黄柏制剂治疗改变了雏鸡肠道菌群多样性及组成,而这种肠道菌群的变化可能对雏鸡腹泻发病及抗病力产生重要影响。

中药赤芍、黄柏、五倍子对感染大肠杆菌的雏鸡血液生化的影响

为了研究含赤芍、黄柏、五倍子三种中药对感染大肠杆菌雏鸡血液生化的影响,随机选取个体无明显差异120只3日龄雏鸡从预防和治疗两种途径进行实验,饲喂15天心脏采血对雏鸡血液生化进行分析。结果表明:赤芍、黄柏对雏鸡感染大肠杆菌导致的血糖升高有显著的降低作用,低剂量的治疗效果最佳;中剂量的赤芍黄柏混合制剂抗炎作用显著;提前饲喂中药预防大肠杆菌的感染效果明显,能有效提高雏鸡体内球蛋白含量。

沈阳地区蛋鸡大肠杆菌病流行病学调查及药敏试验

本试验调查沈阳地区28家蛋鸡养殖户及鸡场,样本数量达到15万只蛋鸡,日龄范围从30至500日龄不等,采集了其中50只病鸡的排泄物和内脏样品用于检测和分析。采用鉴别培养基和生化试验对样品进行细菌分离鉴定,再对检出的大肠杆菌进行Ο抗原鉴定。结果表明,在所采集的样品中大肠杆菌检出49例样品为阳性,检出率为98%;鉴定出大肠杆菌36株,定型30株,定型率为83.33%。药敏结果表明,仅恩诺沙星和氟苯尼考对全部采集到的大肠杆菌菌株高敏,其余药物多中敏或轻敏;而传统的青霉素、链霉素多表现为耐药。

禽致病性大肠杆菌hcp2a基因对雏鸡脾脏细胞因子-细胞因子受体相互作用通路的影响

探究禽致病性大肠杆菌(APEC)hcp2a基因缺失对雏鸡脾脏转录组的影响,为深入研究禽致病性大肠杆菌的致病机理奠定理论基础。将7日龄雏鸡随机分成2组,用APEC野生株(AE17)及其hcp2a基因缺失株(AE17△hcp2a)分别感染雏鸡,采集脾脏组织制作苏木精-伊红(HE)染色切片,通过转录组学测序筛选hcp2a基因缺失株感染后的差异表达基因,利用实时荧光定量PCR方法对测序结果进行验证,对差异表达基因进行GO、KEGG分析。AE17和AE17△hcp2a均能引起雏鸡脾脏的病理变化,转录组学测序结果发现,AE17△hcp2a感染雏鸡脾脏中筛选到512个差异表达基因,其中221个基因上调表达,291个基因下调表达。选择部分差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,差异表达基因mRNA转录水平的变化趋势与测序结果一致。GO分析结果表明,差异表达基因富集在生物膜、生物膜的组成成分、氧化还原过程、免疫反应、水解酶活性等条目。KEGG分析结果表明,差异表达基因富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、细胞粘附分子(CAMs)通路等。禽致病性大肠杆菌hcp2a基因缺失后感染雏鸡,会影响其脾脏mRNA表达谱,差异表达基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用通路等。

禽致病性大肠杆菌(APEC)感染对雏鸡脾脏miRNA表达谱的影响

基于miRNA测序技术研究感染禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)雏鸡脾脏microRNA(miRNA)的差异表达,为深入了解APEC的致病机制奠定理论基础。将14日龄罗曼鸡随机分为2组,分别腿部肌肉注射APEC分离株AE17和生理盐水后采集脾脏组织,制作病理切片并进行miRNA测序,用miRanda算法预测差异表达miRNA的靶基因,并进行GO和KEGG分析。切片结果显示,与对照组相比,AE17株感染组脾脏组织有病变。通过miRNA测序总共筛选了21个差异表达miRNA的靶基因,其中8个下调和13个上调;对预测靶基因进行GO分析发现其显著富集在细胞、细胞器、膜等功能上;KEGG分析显示其参与Toll样受体信号通路和MAPK信号通路等免疫系统过程。本研究在AE17株感染组脾脏病理切片中发现病理变化,并利用miRNA测序技术成功获取了APEC感染鸡脾脏的miRNA表达谱,发现雏鸡脾脏组织miRNA表达丰富且表达量各异,为探讨APEC致病机制提供新思路。