竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

猪红细胞CD58分子协同NDⅣ疫苗免疫的佐剂效应

用从木瓜酶修饰的猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 8日龄雏鸡 (分为试验 A组、对照 B组 ) ;用从正常猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 18日龄雏鸡 (分为试验 C组、对照 D组 ) ,以β-微量法测定ND抗体效价 ,以 α-醋酸萘酯酶染色法检测鸡外周血 T细胞的变化 ,并分别用 NDV F4 8E9强毒株在免疫后 2 4 d攻击 A组和 B组鸡、39d攻击 C组和 D组鸡。结果表明 ,免疫前 ,8日龄雏鸡的 ND抗体效价为 2 5.8,18日龄雏鸡的 ND抗体均为阴性 ;免疫后 ,与对照 D组比较 ,试验 C组的 ND抗体提前 4 d达到 2 4 .8,并且试验 C组 ND抗体效价显著高于对照 D组 ( P<0 .0 1) ,保护期延长 ;试验 A组雏鸡体内 ND抗体变化和对照 B组相似 ,但试验 A组雏鸡外周血 T细胞数量显著高于对照 B组 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 ,试验 A组鸡死亡率为 33% ,对照 B组鸡死亡率为6 3% ;试验 C组鸡死亡率为 17% ,对照 D组鸡死亡率为 5 3%。本研究结果表明 ,猪红细胞 CD5

鸡新城疫病毒ND-xx08株HN基因的克隆及分析

为克隆并分析新城疫病毒ND-xx08株HN基因,将其分离、纯化、培养,提取其病毒的基因组RNA,RT-PCR扩增获得与HN基因预期大小一致的DNA片段,克隆到pMD18-T载体,经EcoR I和Hind Ⅲ进行双酶切鉴定和测序鉴定.ND-xx08 HN基因的序列长度为1 716 bp,共编码571个氨基酸.与已发表的24株NDV HN序列的同源性分析表明,其核苷酸序列的同源性在80.0%~98.4%,氨基酸同源性在87.2%~98.2%.研究结果表明,ND-xx08具有强毒株的特性.

益生菌与ND疫苗协同对雏鸡局部黏膜组织抗体生成细胞数量的影响

为探明益生菌能否增强新城疫(newcastle disease,ND)疫苗局部黏膜组织的免疫效果,雏鸡分别于ND疫苗免疫后第0,7,14,21天及新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)攻击7d后或死亡前,采用免疫组织化学方法测定盲肠扁桃体、哈德氏腺和十二指肠派伊尔结的IgA,IgM,IgG抗体生成细胞数量的动态变化.结果发现:益生菌协同ND疫苗组雏鸡局部黏膜的IgA,IgM,IgG抗体生成细胞数量分别在免疫后7d明显高于ND疫苗单独免疫雏鸡(P<0.05);NDV攻击后,益生菌ND疫苗免疫雏鸡的局部黏膜组织抗体生成细胞数量无统计学差异(P>0.05),表明益生菌是疫苗的理想佐剂之一.

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。

鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析

新城疫病毒（NDV）ND-xx08毒株经10 d龄SPF鸡胚增殖后,提取其基因组RNA并反转录成cDNA,用NDV F基因特异性引物,经PCR扩增后获得与F基因预期大小一致的DNA片段。将NDV F基因片段克隆到pMD18-T载体上,并进行EcoR I和Hind III双酶切鉴定和测序鉴定。结果显示,ND-xx08毒株F基因片段的长度为1 662 bp,共编码554个氨基酸,F蛋白的裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株氨基酸序列结构。将NDV ND-xx08株F基因的47 bp到420 bp序列与新城疫病毒基因型I至基因型Ⅸ毒株的相同序列绘制病毒基因进化树,显示ND-xx08分离株属于基因Ⅶe型。将NDV ND-xx08株F全基因与国内外发表的23株NDV F基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较分析,结果表明,其核苷酸序列的同源性在82.7%~97.8%之间,氨基酸同源性在87.5%~97.7%之间。

应用非脂佐剂提高鸡新城疫(ND)Ⅱ系弱毒疫苗效力的研究

2,4日龄雏鸡接种非脂佐剂苗进行首免后,HI抗体滴度的升高不受母源抗体的干扰,注射该苗雏鸡的HI抗体滴度极显著地高于Ⅱ系苗接种组(p>0.01);HI抗体滴度下降至有效滴度以下的时间也优于Ⅱ系苗组。人工感染IBD造成免疫缺陷的雏鸡接种非脂佐剂苗,能够使其HI抗体滴度达到健康雏鸡单独应用Ⅱ系苗的水平(p>0.05)。非脂佐剂苗的保护力明显高于Ⅱ系苗(p>0.05),并且非脂佐剂苗具有Ⅱ系苗同样的安全性。当母源抗体降为零或给雏鸡二免时,非脂佐剂苗无明显提高HI滴度的作用,与Ⅱ系苗组相比较,差异不显著(P>0.05)。非脂佐剂苗免疫雏鸡和Ⅱ系苗免疫雏鸡具有相同的细胞免疫水平(p>0.05)。

黄芪多糖联合新城疫疫苗胚胎免疫对雏鸡免疫器官发育的影响

为了探究黄芪多糖(APS)联合新城疫(ND)疫苗进行胚胎免疫对雏鸡免疫器官发育的影响,试验将300枚SPF种蛋置于孵化箱中孵化,在18.5胚龄时用APS佐剂联合ND疫苗进行胚胎免疫(APS+NDV组),同时设置APS组(注射APS)、NDV组(ND疫苗)、对照组(注射生理盐水),雏鸡出壳后在3,7,14,21,28日龄测定脾脏、法氏囊、胸腺三种免疫器官的器官指数并观察其形态学变化。结果表明:APS+NDV组脾脏指数在3,7,14,21日龄显著高于对照组(P<0.05),在7,14,21日龄均显著高于NDV组(P<0.05),7,14日龄显著高于APS组(P<0.05);APS+NDV组法氏囊指数在3,7,14,21,28日龄显著高于对照组(P<0.05),在3,7,14日龄均显著高于NDV组(P<0.05),14,21日龄显著高于APS组(P<0.05);APS+NDV组胸腺指数3,7,14日龄均显著高于对照组和NDV组(P<0.05)。14,21日龄时,APS+NDV组脾脏生发中心总面积占视野的比例、法氏囊小结髓质面积与皮质面积的比值显著高于NDV组与对照组(P<0.05);3,7,14日龄时,APS+NDV组胸腺小叶皮质直径与髓质直径比值显著低于对照组和NDV组(P<0.05);14日龄时,APS+NDV组胸腺皮质直径与髓质直径比值显著低于APS组(P<0.05)。说明用APS联合ND疫苗进行胚胎免疫可促进雏鸡免疫器官的发育,提高ND疫苗的免疫效果。

黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮对新城疫病毒感染细胞的影响

将黄芪多糖 (APS)、淫羊藿多糖 (EPS)、淫羊藿总黄酮 (EF)分别与新城疫病毒 (NDV)Ⅰ、Ⅳ系以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、病毒和中药混合感作后同时加入。于病毒接种后 72h测定NDVⅠ系的半数组织培养感染剂量 (TCID50 )和NDVⅣ系的血凝效价 ,以评价 3种中药成分对NDV感染细胞的影响。结果表明 ,APS和EPS仅在先于病毒加入时对NDV有抑制作用 ,而EF无论以何种方式给药均呈抑制作用。提示它们有一定的抗病毒作用 。

氟苯尼考和中草药黄芪淫羊藿合剂对鸡体液免疫反应的影响

试验分别对免疫期间的各组鸡连续两周给予不同剂量的氟苯尼考、黄芪淫羊藿合剂后,在不同日龄采取血样,用血凝抑制(HI)试验分别对鸡新城疫(ND)抗体水平和禽流感(AI)抗体水平进行监测。结果表明,混饮给药,小剂量(50mg/L)氟苯尼考对ND抗体水平影响不显著(P>0 05),而中(150mg/L)、高(250mg/L)剂量氟苯尼考对ND抗体产生有显著的抑制作用(P<0 01);氟苯尼考追加给药1周后,中、高剂量组ND抗体水平又有显著降低(P<0 05),而小剂量组ND抗体水平差异不显著;中(15ml/L)、高(22 5ml/L)剂量黄芪淫羊藿合剂对ND、AI抗体产生有显著增强作用(P<0 01);对因氟苯尼考造成的免疫抑制,黄芪淫羊藿合剂可使抗体水平恢复至对照组水平(P>0 05)。

母源抗体对鸡新城疫疫苗免疫的影响

该试验旨在通过在不同日龄分别选用不同的疫苗组合 ,对有鸡新城疫母源抗体的雏鸡进行免疫 ,探讨不同疫苗组合克服母源抗体的效果。结果表明 :有 ND母源抗体的雏鸡用弱毒疫苗免疫后 ,母源抗体对弱毒疫苗免疫干扰较大 ,只有当 ND母源抗体降到较低水平 (小于 3log2 ,一般要到 1 5～ 2 0日龄后 )时 ,对弱毒疫苗免疫影响才非常小 ,方可产生较为可靠的免疫力 ;用ND弱毒疫苗 +油乳剂疫苗进行免疫 ,可有效地克服母源抗体的干扰 ,获得理想的免疫效果。但母源抗体对 ND油乳剂疫苗免疫的影响在日龄越小的雏鸡越明显 ,因此于 8～ 1 0日龄之后用 ND弱毒疫苗 +油乳剂疫苗进行免疫是最佳选择 。

新城疫疫苗滴鼻点眼诱导雏鸡消化道产生共同黏膜免疫反应的研究

为研究不同日龄雏鸡免疫后诱导消化道的共同黏膜免疫反应,本实验采用新城疫病毒(NDV)LaSota疫苗株经滴鼻点眼途径免疫雏鸡,分别于免疫后不同时间采集消化道洗脱液和胆汁样品,采用间接ELISA对其IgM、IgG和SIgA抗体水平进行检测。结果显示:NDV特异性IgM于免疫后4 d即可检出,并于第7 d达到峰值后迅速下降;而IgA于免疫后第7 d可检测到,并于第21 d达到较高水平。13日龄免疫组总抗体水平高于6日龄之前免疫组,但1日龄和3日龄免疫组不能够诱导消化道黏膜产生抗体。胃肠道不同部位免疫反应强度不同。其中前胃和十二指肠两个部位的免疫反应较强,而回肠和盲肠的免疫反应较弱。此外,胆汁中以较高SIgA抗体水平为主。研究表明,NDV弱毒苗滴鼻点眼后能够诱导消化道产生共同黏膜免疫反应,并且与日龄存在相关性。该研究结果为雏鸡共同黏膜免疫机制的研究和有效防制新城疫提供了实验依据。

鸡新城疫-传染性法氏囊病-禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对雏鸡的免疫效力研究

为了评估鸡新城疫(ND)-传染性法氏囊病(IBD)-禽流感(AI)(H9亚型)三联灭活疫苗对雏鸡的免疫效力,采用该疫苗分别免疫1、7、10、14、21日龄SPF雏鸡和带有母源抗体的普通雏鸡,免疫后21d^28d采血测定ND血凝抑制抗体(HIAb)、IBD中和抗体(NA)及AI(H9)HIAb抗体,并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,免疫后各不同日龄免疫组SPF雏鸡的ND HIAb、IBD NA及AI(H9)HIAb滴度分别为7.9log2~8.3log2、13.9log2~15.8log2及8.0log2~8.9log2,IBDV攻毒均100%保护;而普通雏鸡免疫后的ND HIAb、IBD NA及AI(H9)HIAb滴度,1日龄免疫组分别为5.9log2、12.1log2和5.6log2,7、10、14、21日龄免疫组分别为6.1log2~7.0log2、12.6log2~14.5log2和6.0log2~7.5log2;IBDV攻毒,1日龄免疫组普通雏鸡保护率为60%,7、14及21日龄免疫组保护率均为100%;结果证实,SPF雏鸡所产生的免疫效力要高于带有母源抗体的普通雏鸡,1日龄普通雏鸡免疫所产生的免疫效力明显低于其他日龄。根据试验结果,推荐该疫苗对雏鸡的使用日龄为7日龄~14日龄。

益生菌与新城疫疫苗协同对雏鸡局部体液免疫球蛋白相对含量的影响

雏鸡分别于新城疫(ND)疫苗免疫后第0、7、14、21天,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定泪液、气管液、胆汁和肠液IgA、IgG、IgM相对含量的动态变化,观察益生菌能否增强ND疫苗的局部黏膜体液免疫效果.结果表明,益生菌协同ND疫苗组雏鸡呼吸道和消化道局部体液IgA、IgG、IgM相对含量分别在免疫后14 d明显高于对照组和ND疫苗单独免疫组雏鸡(P<0.05).可见,益生菌能够提高ND疫苗的局部黏膜体液免疫应答.

鸡新城疫油佐剂灭活疫苗的研究

采用ＮＤＬａｓｏｔａ株为种毒，福尔马林为灭活剂，７号白油为佐剂，吐温８０、司本８０为乳化剂，硫柳汞为防腐剂，高压匀浆泵为乳化工具，研制出ＮＤ油性剂灭活疫苗。其剂型为双相型（Ｗ／Ｏ／Ｗ），呈稀薄乳状液，粒度为１μｍ左右，粘度≤１ｓ，通针性好。４～８℃有效保存期１年。效力≥７０ＰＤ５０，最早产生免疫时间为１２天（１００％保护），生产中常用免疫剂量为２月龄内每只０．５ｍｌ，２月龄以上每只１．０ｍｌ皮下注射，对各日龄鸡安全无副作用。与ＮＤ活毒疫苗同时免疫可使各日龄鸡产生高效价的ＨＩ抗体，雏鸡免疫期为２．５～３个月，成年鸡为１２个月。此苗可有效地预防强毒力嗜内脏型ＮＤ及“非典型”ＮＤ。

复方中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为探究前期研究效果显著的最佳纯度多糖对人工免疫新城疫疫苗的雏鸡抗体滴度和抗氧化能力的影响,将350只雏鸡随机分为7组(空白对照组,免疫对照组,盐酸左旋咪唑组,黄芪多糖组,最佳纯度复方中药多糖高剂量、中剂量、低剂量组),除空白组外,其余雏鸡在7日龄用新城疫活疫苗La sota株免疫,在27日龄用新城疫活疫苗CS2株进行二次免疫,8至14日龄给药,各组雏鸡在15、22、29、36、43和50日龄采集血样,测定鸡新城疫疫苗抗体滴度和超氧化物歧化酶浓度。结果显示:最佳纯度复方中药多糖中低剂量均可极显著提高新城疫抗体滴度(P<0.05),其中以中剂量效果最好;黄芪多糖和最佳纯度复方中药多糖高中低剂量均可显著提高鸡超氧化物歧化酶含量(P<0.05),其中以最佳纯度复方中药多糖中剂量效果最好(P<0.01)。

雏鸡新城疫母源抗体水平动态的监测

监测了具有高水平（≥７ｌｏｇ２）新城疫母源ＨＩ抗体的雏鸡在１～２８日龄期间，血清母源抗体水平变化动态．结果表明，随着日龄的增长，血清母源抗体水平逐渐降低，至２８日龄时已不再能检出．免疫接种的临界日龄为１４日龄．

雏鸡新城疫免疫后部分黏膜中抗新城疫IgG的检测

利用新城疫Ⅳ系对不同免疫途径免疫后雏鸡的泪液、气管液、血清中抗新城疫病毒的HI抗体效价进行了检测。结果表明:黏膜免疫途径比非黏膜免疫途径更活跃地激活黏膜免疫应答部位产生IgG,并且黏膜免疫后,离Ag刺激近的部位免疫应答较强。黏膜免疫应答部位的HI抗体在一免后要比血清中抗体效价高,而二免后其IgG含量要低于血清中IgG含量。

鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体(HI Ab)、IB血凝抑制抗体(HI Ab)及IBD中和抗体(NA),并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%(10/10);不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%(10/10)。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。

复方黄芪对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

为探讨复方黄芪制剂对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响,将300只1日龄海兰褐雏鸡随机分成Ⅰ组(低剂量添加组)、Ⅱ组(中剂量添加组)、Ⅲ组(高剂量添加组)、Ⅳ组(阴性对照组)和Ⅴ组(阳性对照组)。7日龄时,除阴性对照组不免疫外,其余各组鸡均颈背部皮下注射新城疫灭活疫苗,0.25mL/羽,同时Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别按10、20、40g/kg体重,灌服复方黄芪制剂,每天1次,连续5d。然后在免疫后第7、14、21、28、35天时,从各组中随机选取8只健康鸡无菌采集心血1.0mL,分离血清,用于鸡新城疫HI抗体、SOD和IFN-γ的测定。结果表明,新城疫HI抗体效价,血清中SOD和IFN-γ的活性或浓度,复方黄芪中剂量组均高于其余各组,且与低剂量添加组、阳性对照组相比,呈显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01)。说明复方黄芪按20g/kg体重的剂量给雏鸡口服,能显著提高雏鸡的新城疫HI抗体水平,同时也能提高雏鸡SOD和IFN-γ的水平。