鸡肾型IBV引起病理形态学的电镜观察

本试验通过扫描电镜与透射电镜 ,观察了鸡肾型传染性支气管炎病毒 (IBV)在气管、肺、肾组织内的分布以及对器官组织的损伤作用。观察结果表明 ,肾型IBV主要分布于气管粘膜上皮、肺呼吸毛细管上皮和肾小管上皮细胞浆内 ,还分布于毛细血管周围。肾型IBV对器官组织的损伤作用主要表现为 :气管粘膜纤毛上皮细胞的纤毛脱落 ,有的缠结成簇 ,甚至严重倒伏。肺呼吸滤过膜增厚 ,并发生纤维化。肾小管上皮细胞质液化 ,线粒体变形萎缩 ,有的线粒体溶解呈空泡状。

M41型IBV引起鸡输卵管病变的电镜观察

通过扫描电镜与透射电镜,观察了鸡M41型IBV对鸡输卵管组织的损伤作用。结果表明,M41对输卵管的损伤作用主要表现为:输卵管黏膜纤毛上皮细胞的纤毛脱落,输卵管上皮细胞核皱缩。线粒体退化,粗面内质网肿胀,高尔基复合体不发达。

RT-PCR和核酸探针在IBV检测中的应用

用ＰＣＲ和核酸探针杂交检测了３种毒株（Ｈ１２０株，Ｍ４１株，ＨＫ株）在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的ＩＢＶ．结果表明：在鸡胚中繁殖３种毒株ＩＢＶ（Ｈ１２０，ＨＫ，Ｍ４１），ＰＣＲ最早检出时间为２０～２４ｈ，克隆探针最早检出时间为２４～３０ｈ；用克隆核酸探针检测人工感染鸡，１２ｈ后能从肾脏中检出病毒。对７只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和ＰＣＲ扩增，有５只均呈阳性反应。ＩＢＶ分离株ＨＫ株与标准株Ｍ４１株经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和ＨｉｎｄⅢ酶切及ＲＦＬＰ分析，表明其属同一马萨诸塞血清型。ＰＣＲ和核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测ＩＢＶ病毒及诊断ＩＢＶ的新方法，对ＩＢＶ的血清定型也有一定的实用价值。

黄芩苷在鸡胚上对鸡常见病毒AIV、NDV、IBV的作用效果

考察黄芩苷在鸡胚上对鸡常见病毒AIV、NDV、IBV的作用效果,以确定黄芩苷抗病毒的有效浓度。试验共设计2种加药方式,第1组采用最大安全浓度的黄芩苷与鸡胚互作4 h后接种病毒,第2组采用病毒侵染鸡胚4 h后添加最大安全浓度的黄芩苷。结果表明,第1组样品对病毒的阻断效果优于第2组。证明黄芩苷对AIV、NDV、IBV均有一定的抑制作用,在禽病的预防与治疗上具有较高价值。

M41型IBV对输卵管中雌激素、孕激素受体及胰岛素生长因子-Ⅰ表达的影响

本试验通过相对定量RT-PCR检测接种M41型鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡输卵管各部分(蛋白部、峡部、伞部和子宫)雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA表达的影响,研究IBV早期感染(10 d)抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,输卵管各部均有ER、PR和IGF-ⅠmRNA的表达,染毒组ER、PR mRNA的表达量较正常对照组显著减少(P<0.05),而IGF-Ⅰ的表达量较正常对照组显著增加(P<0.05)。可见IBV可通过降低ER和PR mRNA的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育;而IGF-Ⅰ可能是以自分泌、旁分泌方式在输卵管局部起作用,是输卵管生长的调节因子。

抗鸡传染性支气管炎病毒中药的筛选

【目的】对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行抗病毒中药的筛选,并验证其治疗效果,为临床用药提供一定参考。【方法】采用鸡胚培养法,通过预防和治疗2个角度对24味单一中药、6种市售复方中药进行抗IBV的有效成分或方剂筛选试验,即在SPF鸡胚中先注射中药2 h后再接种病毒和先接种病毒2 h后再注射中药。使用SPSS 20.0软件对鸡胚重量进行方差分析,利用实时荧光定量PCR法辅助判定治疗效果。【结果】对鸡胚净重进行方差分析显示,桔梗组与阳性对照组差异显著(P<0.05),与阴性对照组差异不显著(P>0.05),表明预防和治疗均有效果。实时荧光定量PCR检测鸡胚尿囊液病毒滴度结果显示,桔梗、鱼腥草、宣肺败毒方、绞股蓝、蒲公英、甘草对IBV增殖均有抑制作用,其中桔梗抑制效果最佳。【结论】桔梗对IBV有显著的预防及抑制效果,结果为深入研究桔梗作用机理提供了依据。

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究

从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒 ,在 9～ 11日龄SPF鸡胚上连续传代 9次 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明 ,该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用 ,当继代到第 5代后 ,胚体严重病变 ;电镜观察该病毒为典型的冠状病毒 ;病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长 ,其效价增高 ,96小时可达到 48小时的 1倍 ,该毒株可在CEF上生长 ,但不能形成明显的蚀斑 ;并且经 1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞 ;鸡胚的第 4代尿囊液病毒回归动物体 ,可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显 ,呈典型的花斑肾 ,腺胃则未见肉眼可见的病变 ,接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异 ,但从发病症状来看 。

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及鉴定

本试验从天津某鸡场、呼和浩特市两个鸡场发病鸡群分离到３个肾型ＩＢＶ毒株，分别命名为Ｔ、Ｈ、Ｗ株，并对其培养特性、形态特性、血凝性、致病性、对新城疫病毒的干扰性等方面进行研究。结果表明，３个毒株很快适应于鸡胚，引起鸡胚出血、萎缩、绒毛尿囊膜增厚；３个毒株也适应于鸡胚肾、肺细胞，适应性有差异；病毒增殖后制负染样品，在电镜下观察，可看到直径约１００ｎｍ左右，病毒囊膜外有疏松刺突的冠状病毒。用接毒的肾、肺细胞制成超薄切片后电镜下观察，可看到胞浆内的典型的ＩＢＶ；分离株对鸡的红细胞无凝集性，但用１％胰酶处理后表现不同程度的血凝性；３个分离株均能抑制鸡新城疫病毒Ｂ＿１株在鸡胚中繁殖；分离株回归４２日龄雏鸡后从第３天开始发病，发病率为１００％，病死率为６０－９０％。

鸡传染性支气管炎病毒中国分离株核蛋白基因的分子克隆

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经过同样处理的载体 p UC1 1 9上。经 PCR、酶切、斑点杂交及 Southernblotting杂交鉴定 ,证实获得了含有

鸡传染性支气管炎实验室诊断方法研究进展

传染性支气管炎是鸡的一种重大传染病,临床上无典型的病变特征,诊断较为困难。现有的实验室检测方法有血清学、病原学和分子生物学方法,但该病病原变异复杂,血清型众多,交叉免疫性低,临床上又多采用活毒进行免疫,以至实验室无法对疫苗毒和野毒进行准确区分。为了更好地控制本病,有必要根据临床特点对目前各种检测鸡传染性支气管炎的方法及其优缺点进行分析,为临床寻找一种适合的快速准确的诊断方法、制定合理的免疫程序和发展新型的诊断方法提供参考。

鸡传染性支气管炎肾炎的病原分离和鉴定

从具有传染性支气管炎肾炎临床特征的病鸡体内,分离到一株病毒,该分离株通过鸡胚传代(6～8代),能引起半数以上的鸡胚卷缩,发育阻滞和死胚;鸡胚适应毒能在鸡胚肾细胞(CEK)培养中生长繁殖;产生细胞病变(CPE)的病毒在 CEK 培养中传5代以后,能形成融合细胞,具有较高的感染滴度。病毒粒子具有典型的冠状结构,核酸型为 RNA,有囊膜,对氯仿和乙醚敏感,经反复冻融后,毒力下降,而 pH 3和 pH 11,在56℃经30min即被灭活,无血凝发生。本分离株与 IB-M_41株有明显的抗原差别,但用它攻击经 H_52疫苗免疫的鸡,可获得部分保护。综合本分离株的特性,初步鉴定为肾病变型 IBV。

鸡传染性支气管炎病毒地高辛标记探针检测方法的的建立和应用

根据GenBank中已经发表的IBV N基因的保守序列,设计合成一对引物,利用RT-PCR技术扩增IBVN基因的582 bp的核酸片段,并制备出地高辛标记的IBV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与不同毒株的IBV核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV、鹅副粘病毒的核酸杂交反应为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对IBV的最低检出量为10 pg,显示所制备的核酸探针用于IBV的检测是可行的。

鸡传染性喉气管炎、传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系BWEL-SPF鸡或鸡胚的感染试验

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬＳＰＦ鸡，观察比较临床症状和剖检所见病变；用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚，收获胚液并测定其毒价。从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。

用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气管炎病毒

将IBVT株基因组S1 基因上0.6kb 片段(位于S1 基因上1121bp～1723bp 之间) 克隆到PIBPCRCloning vector 中,用地高辛标记探针,分别与9 株IBV的PCR 产物和12 株IBV 的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV 的RNA,EDS76 病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测IBVPCR产物的灵敏度为100～200pg。用该探针检测不同毒株IBV在鸡胚中的繁殖动态,接种24～30 小时后的的尿囊液均获阳性结果。用M 和宜株混合感染5 日龄雏鸡12 小时能从气管粘液中检出病毒,38～46 小时后能从肾组织中检出病毒。对7 只就诊病鸡的病变肾脏进行杂交检测,有5 只呈阳性反应。核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测病毒,诊断IBV

安徽省鸡腺胃型传染性支气管炎的研究初报

1997年6月份以来，安徽省淮南等地鸡群流行一种以腺胃病变为主要特征的传染病。经9日龄鸡胚接种病鸡的肝、脾、腺胃等病料分离到的HN毒株，在鸡胚中可稳定传至12代，具有规律性死亡和胚胎病变，ELD50为109.75。用HN鸡胚尿囊液毒人工感染试验鸡，能引起与自然病例相同的临床症状和典型病变。HN鸡胚尿囊液经负染后电镜观察，具有典型的冠状病毒形态。病毒液经胰蛋白酶处理后能凝集鸡红细胞，IBV单抗ELISA检测呈强阳性反应。应用分离毒研制的油乳剂疫苗经试验和临床应用表明有良好的保护作用。研究结果初步表明，HN每株为IBV成员。

传染性支气管炎病毒的鉴定

试验采用鸡胚接种和气管环培养相结合的方法,对IBV毒株进行培养鉴定,IBV经鸡胚传一代后再上鸡胚气管环培养可引起气管环纤毛运动停止,应用此法可以快速地进行IBV检测。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒HN毒株理化特性鉴定

HN毒株为从我省某鸡场患有呼吸道症状和腺胃病变的病鸡中分离到的一株病毒 ,在鸡胚中能稳定传代并具有规律性死亡和典型胚胎病变特征。HN毒株对热、乙醚和氯仿敏感 ,耐酸 (pH3.0 )、耐碱 (pH11.0 ) ,能抵抗 1%胰蛋白酶 ,能在鸡胚中干扰鸡新城疫病毒LaSota株的增殖。试验结果表明 。

鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(H9N2)三联灭活疫苗的安全性研究

为证实鸡新城疫—传染性支气管炎—禽流感(新支流)三联灭活油乳疫苗的安全性,通过颈部皮下注射接种14日龄来航鸡,每日测定鸡的体重,连续监测28 d,用t检验分析对照组和免疫组体重之间的差异显著性。试验结果表明,免疫接种组和空白对照组体重差异不显著,所制备的新支流三联疫苗不影响鸡的生长性能,对鸡安全。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因的克隆和测序

应用逆转录多聚酶链反应技术，参照 Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，自行设计并合成１对引物，应用该引物，从感染ＩＢＶ金坛株的第五代ＳＰＦ鸡胚尿囊液中扩增出片段大小为８２８ｈｐ的ＪＴ株 Ｎ基因，与设计相符，表明扩增片段为 ＩＢＶ ＪＴ株 Ｎ基因。将扩增片段与 ｐＧＥＭ－ Ｔ Ｅａｓｙ载体连接，经核酸序列测定，与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中报道的ＩＢＶ其它株Ｎ基因同源性较高。

利用SMART技术构建鸡肺酵母双杂交cDNA文库

以1月龄SPF鸡肺为材料,用Trizol方法提取总RNA,并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA)。合成的ds cDNA通过CHROMA SPINTM TE-400 Column进行纯化,纯化后的ds cDNA与线性pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞AH109中,以同源重组的方式,在酵母细胞内构建成鸡肺的cDNA文库。获得的文库容量为3.9×106cfu,随机选取20个克隆进行PCR检测,插入片段大小集中在0.3～3.0kb之间,平均插入片段约为1.4kb左右,文库重组率为100%。结果表明该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为酵母双杂交技术筛选与IBV-N相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。