鸡Rad51蛋白的体外表达与纯化及其抗血清的制备

目的:Rad51蛋白在双链断裂的DNA修复的同源重组中发挥重要作用。因而其过量表达在细胞内的基因操作中被用于在提高基因同源重组的效率。当前在鸡中还未有针对该蛋白的特异性抗体。为此我们对鸡的Rad51进行了体外表达与纯化,并制备了cRad51抗体,为该蛋白质在鸡细胞中的功能研究及探讨其用于鸡细胞中提高同源重组的研究提供有效工具。方法:对鸡Rad51基因进行全长克隆并构建原核表达载体pET-28a(+),用IPTG诱导该蛋白在Rosseta菌株中表达,纯化后注射BALB/c小鼠获得抗体。结果:成功制备鸡Rad51特异多克隆抗体,ELISA显示该抗体血清效价达51 200,该抗体血清可以用于Western等的蛋白检测技术。结论:针对鸡基因产物制备抗体的技术方法有效可行;首次成功获得鸡Rad51蛋白及多克隆抗体,为与该蛋白相关的研究提供了有效工具。