中草药防治鸡球虫病的研究概况

鸡球虫病传染性强、发病率高,可显著影响鸡的肠道健康状况,降低鸡的生产性能,甚至引起死亡,给养鸡业造成巨大的经济损失。在我国“减抗、替抗和禁抗”背景下,中草药因具有不易产生耐药性、药物残留低、毒副作用小,兼备药物性与营养性的双重作用等优点,而在抗鸡球虫病中呈现广阔的发展前景。以往研究表明,中草药具有良好的抗球虫功效。因此,论文综述了2013-2023年期间中国知网和PubMed数据库中发表的有关中草药的在体和离体抗鸡球虫研究概况,以期为鸡球虫病的防治和抗球虫的药物研发提供参考。

河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对磺胺氯吡嗪钠耐药性调查

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河南省共计虫株52株,湖北省共计虫株41株。在河南省52株分离虫株中,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(ACI<160),16株中度耐药(160≤ACI≤180),11株敏感(ACI>180);在湖北省共计41株鸡球虫分离虫株中,有9株完全耐药,9株中度耐药,23株敏感。研究结果为河南省和湖北省鸡球虫的耐药性提供了数据支撑。

鸡球虫的分离与保存

获得大量纯化的球虫卵囊是进行鸡球虫病的防治、球虫的生物学、免疫学等方面研究的前提。本文着重对鸡球虫的分类地位、卵囊的分离方法以及保存条件等方面进行介绍。

鸡球虫18S rRNA基因序列的测定与分析

为了利用18S rRNA基因进行鸡球虫系统进化分析,对巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)、堆形艾美耳球虫(E.acervulina)3种共8个不同来源的虫株,分别提取总DNA进行18S rRNA基因的扩增和测序;将得到的序列登录GenBank进行同源性和趋异性分析,并结合GenBank中其它原虫的18S rRNA基因序列构建进化树。结果显示扩增获得8株鸡球虫18S rRNA基因长度为1 746～1 756 bp,序列比对显示同种不同株间的同源性大于不同种间的同源性,其中3株E.maxima株间同源性在98.7%～99.3%之间,4株E.tenella株间同源性在99.7%～99.9%之间;不同种间同源性为96.5%～98.1%,其中E.maxima与E.tenella的遗传距离最大,为0.038;E.maxima与E.acervulina的遗传距离最小,为0.021。顶复器门9个不同属所构建的进化树结果显示,E.imeria和等孢属(Isospora)聚为一支,说明亲缘关系比较近。与GenBank中其它5株不同鸡球虫的18S rRNA基因共同构建的进化树显示,3株E.maxima聚为一支,与E.brunetti、E.mitis、E.mivati、E.praecox和E. acervulina聚为一大分支;4株E.tenella与1株E.necatrix共同形成一个分支,说明E.tenella与E.necatrix的亲缘关系最近。本研究证实了在鸡球虫系统进化研究中,18S rRNA基因不仅可以区分不同种,而且有可能成为区分同种不同株的理想靶基因。

免疫增强剂对鸡球虫体液免疫指标的影响

艾维茵雏鸡于 7日龄和 14日龄时分别以 10 0 0、50 0 0个 E.Tenella卵囊 /只免疫两次 ,并于首免时注射卡介苗 (BCG)或黄芪多糖 (APS) 1次 ,2 1日龄以 5万和 2 5万卵囊攻击。试验鸡于 7、14、2 1日龄和 2 8日龄采血 ,EL ISA测定血清中 Ig G、Ig M抗体的含量。结果表明 :BCG具有促进球虫免疫鸡体液免疫应答的作用 ,而

鸡球虫入侵相关分子的研究进展

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于肠道所引起的一种危害极其严重的寄生虫病,给养鸡业造成巨大的经济损失。艾美耳球虫属于顶复器门原虫,在入侵宿主细胞过程中需要通过入侵虫体顶端的顶复器分泌蛋白发挥作用。目前已报道与鸡球虫入侵相关的重要蛋白,包括微线蛋白、蛋白激酶、热激蛋白以及糖酵解酶等。这些蛋白主要参与了鸡球虫入侵宿主细胞以及在宿主细胞内的生长发育、参与了虫体的细胞周期活动以及参与了糖酵解提供虫体入侵需要的能量等,进一步对这些分子进行研究,对了解鸡球虫入侵宿主细胞的相关机理及发展抗球虫病疫苗和治疗药物将有积极的意义。

毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROMA SPIN-400^TM柱去除小于400bp的片段，与λTriplEx2^TM噬菌体载体连接，用GigapackⅢGold^TM载体蛋白包装，构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定，原始文库容量为4．72×10^6pfu／mL，扩增后的文库容量为2．62×10^10pfu／mL，重组率为97．5％，插入片段为500～1100bp。证实，该文库质量良好，为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。

安徽两个鸡场球虫的抗药性试验

[目的]研究安徽2个鸡场球虫抗药性程度,为制定出合理的用药方案提供依据。[方法]从鸡场采集新鲜粪便,经实验室分离增殖,并人工感染孢子化卵囊,测定对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜拉霉素、盐霉素和拉沙洛西钠8种药物的抗药性。[结果]安徽1号鸡场球虫对癸氧喹酯无抗药性,尼卡巴嗪中度抗药,其余6种药物完全抗药;安徽2号鸡场,对癸氧喹酯河尼卡巴嗪无抗药性,氯苯胍中度抗药,其余5种药物完全抗药。[结论]安徽两鸡场球虫对多数药物已产生抗药性。

鸡堆型艾美耳球虫新基因的克隆与生物信息学分析

试验旨在对堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊新基因EST序列进行克隆与生物信息学分析。通过RACE技术扩增从E．acervulina cDNA表达文库中筛选获得的EST序列，得到EST全长cDNA序列，利用多种生物信息学分析软件对其编码蛋白进行分析和预测。结果表明，该EST序列为E．acervulina孢子化卵囊阶段新基因，GenBank登录号为EU590120；该基因含1个492 bp的开放阅读框，编码163个氨基酸，理论分子质量为17．049 ku，等电点为6．69，酸性氨基酸8个，碱性氨基酸8个，分子式为C761H1223N199O219S12总平均亲水性（GRAVY）为0．731；该蛋白有信号肽，为分泌性蛋白；具有4个跨膜结构，在105～115、28～32和132～138位之间有很强的疏水性；具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点。因此根据生物信息学全面预测和分析，发现该基因所编码的蛋白具有较多的生物学功能位点和潜在的抗原表位区域。

鸡球虫病药物防治研究进展

鸡球虫病是严重危害养鸡业的寄生虫病之一。长期以来,鸡球虫病主要依靠抗生素类、化学合成药类和中草药等药物进行防治,由于球虫极易产生耐药性,给药物防治带来了困难。文章从鸡球虫生物学特性、防治鸡球虫病的药物及鸡球虫病的药物防治方法等方面做一综述。

特异性引物PCR鉴定鸡球虫种类与卵囊纯度的研究

为了建立鸡球虫种类的快速分子生物学鉴定方法,检测实验室保存虫株受污染状况,分别对单卵囊分离繁殖及实验室长期传代保存的6株巨型艾美耳球虫（EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01）、4株柔嫩艾美耳球虫（ETDS01、ETGD01、ETAD和ETAM）、1株堆形艾美耳球虫（EA1201）、1株变位艾美耳球虫（EMIS01）、1株毒害艾美耳球虫（ENGD01）收集卵囊,纯化、提取总DNA,根据巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫的RAPD和SCAR分子标记、ITS-1区序列分别设计Tn-F与Tn-R、Mx-F与Mx-R、Ac-F与Ac-R、ET-1与ET-2、EM-1与EM-2、EA-1与EA-2等6对特异性引物,对13个虫株分别进行PCR扩增,1%琼脂糖电泳分析片段大小.结果显示：用引物Tn-F与Tn-R、ET-1与ET-2对ETDS01、ETGD01、ETAD、ETAM、EMTO01扩增出特异性条带,其余4种8个虫株未见条带;用引物Mx-F与Mx-R、EM-1与EM-2对EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01扩增出特异性条带,其余4种7个虫株未见条带;用引物Ac-F与Ac-R、EA-1与EA-2对EA1201扩增出特异性条带,其余4种12个虫株未见条带.结果说明特异性引物PCR方法鉴定的5种球虫与原常规生物学方法鉴定的结果一致,检测出保存的巨型艾美耳球虫EMTO01虫株受柔嫩艾美耳球虫污染,其余虫株未发现交叉污染.研究证明利用特异性引物建立的PCR方法可用于鸡球虫种类与卵囊纯度的鉴定.

多重PCR检测3种鸡球虫方法的建立

根据GenBank中发表的巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫TS-1序列,设计了3对引物,建立了这3种球虫的单一PCR和多重PCR检测方法,并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了研究,对巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫的混合卵囊进行了初步应用。结果显示:单一PCR和多重PCR均能扩增出巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫特异性条带,其大小分别为151 bp、463 bp、303 bp,其最小检测浓度为0.5ng,对水牛梭形肉孢子虫、有毒艾美耳球虫、猪源弓形虫汤山株及其田间分离株均不起反应,表明建立的方法具有很强的特异性和较高的敏感性,可望用于巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫的诊断和田间种类调查。

柔嫩艾美耳球虫广西南宁株的分离及鉴定

利用从南宁市郊养鸡场球虫病鸡粪便中收集的球虫混合种卵囊感染小鸡,再应用单卵囊分离感染技术,从感染鸡盲肠中收集的卵囊分离纯化获得1株纯种球虫,经鸡体传代增殖,对该虫株的卵囊大小和卵形指数、潜在期、排卵高峰期、最短孢子化时间、寄生部位、致病性等指标进行观察和测定。结果测得该虫株卵囊的平均大小为(25.743±1.94126)μm×(21.4±1.85985)μm,平均卵型指数为1.2067±0.07;潜在期为140 h;其排卵囊峰期在第6～9天,最高峰在第7天;最短孢子化时间为19 h;寄生部位在盲肠;对两周龄的艾维茵鸡,当使用5×104的孢子化卵囊感染剂量时死亡率为7.5%。根据这些测定和观察到的指标综合鉴定该分离株球虫为柔嫩艾美耳球虫,并命名为柔嫩艾美耳球虫广西南宁株(Eimeria.tenella-GXNN),该研究结果为进一步研究本地区鸡球虫病的药物治疗和免疫预防等奠定了基础。

生物技术在鸡球虫免疫研究中的应用

就近几年开发的球虫疫苗和球虫免疫中所涉及的分子细胞生物学、分子免疫学和功能基因组学的相关技术进行了阐述。

五种抗球虫药物对鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效观察

210只14日龄817肉杂鸡公雏随机均分为7组,每组30只,除白对照组外,每只鸡接种2×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时选择百球杀二代、球痢速治、海南霉素、球虫宝,海南地克珠利5种常用抗球虫药,通过饮水给药的方式,观察其疗效,试验期为10 d。结果表明,百球杀二代的抗球虫指数(ACI)为197.7,属高效抗球虫药。抑制卵囊繁殖和减轻肠道病变效果以海南霉素组为显著,整个试验期内的增重分别比红对照组、白对照组、其他药物组均高。球痢速治、海南霉素、球虫宝的抗球虫指数(ACI)分别为184.6、174.9、165.2,均为中效抗球虫药。地克珠利的抗球虫指数(ACI)为142.9,判为低效抗球虫药。红对照组的法氏囊指数与其他各组之间差异不显著(P>0.05),脾脏指数与白对照组差异不显著(P>0.05),与百球杀二代组,汇鑫球痢速治组和海南霉素组差异极显著(P<0.01),与球虫宝组和海南地克珠利组差异显著(P<0.05)。

鸡堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的免疫学筛选

[目的]寻找鸡球虫保护性抗原基因,为研究基因功能和研制抗鸡球虫疫苗奠定基础.[方法]将纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊于兔皮内多点注射,制备堆型艾美耳球虫抗血清,用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其效价,进行免疫学筛选.利用PCR对获得的阳性克隆进行初步鉴定.[结果]间接酶联免疫吸附试验结果表明堆型艾美耳球虫抗血清检测结果呈阳性,初步筛选到的疑似阳性斑经3次复筛后获得6个阳性克隆,1～3号克隆约为1 000bp,4～6号克隆约为1 500 bp.[结论]对堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cD-NA文库获得的阳性克隆成功进行了免疫学筛选.

球虫消杀剂(Oo-stat)的配方优化研究

为获得对鸡球虫卵囊有良好抑杀作用的球虫消杀剂最佳配方,将3种不同配方的球虫消杀剂配成1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶80、1∶100、1∶150、1∶200、1∶300及1∶400。分别对柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊体外相互作用6h、12h和24h之后,培养观察其孢子化率。结果表明,配方一、配方二除1∶300和1∶400处理6h组及1∶400处理12h组与对照组差异不显著外,其余各组均显著低于生理盐水对照组(P<0.05);1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60及1∶80的球虫消杀剂溶液分别处理卵囊6h、12h和24h后孢子化率均低于5%;配方三1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60及1∶80的球虫消杀剂溶液分别处理卵囊12h和24h后孢子化率均低于5%,但是当处理时间为6h时,其孢子化率较高。研究表明配方二具有优良的抑杀鸡球虫卵囊的作用。

鸡球虫病的诊断及病理分析

对一起自然感染鸡球虫病例进行病理解剖,取病鸡盲肠黏膜刮取物涂片镜检,结果发现大量球虫卵囊,采集病死鸡盲肠组织,用10%的中性福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,进行病理组织学分析。结果显示,虫体主要寄生于肠绒毛上皮细胞内,大量的肠绒毛遭到破坏、断裂和脱落,呈纤维素性—坏死性肠炎病变。

鸡球虫耐药性的研究进展

目前,人们对鸡球虫病的防治仍然依赖于抗球虫药的应用,但是大量抗球虫药的使用,使得鸡球虫耐药性的产生已成为无法避免的问题。笔者综述了鸡球虫耐药性的主要特点、耐药性的检测方法、球虫耐药性虫株的诱导、球虫耐药性的产生机理等方面的研究进展。

鸡球虫耐药性研究进展

到目前为止,鸡球虫病的防治仍以药物控制为主,大量抗球虫药的长期使用,导致了鸡球虫耐药性的产生,给鸡球虫病的防治带来很大的困难。本文总结近年来国内外学者研究的成果,在鸡球虫耐药性概述、抗球虫药及其作用机制、耐药性产生的机制、耐药性的特点、耐药性的检测方法、耐药性的获得及敏感性恢复,耐药性的延缓或解决措施等方面进行了综述,提出对鸡球虫耐药性的展望,为消除耐药性,更好地防治鸡球虫病提供依据。