鸡卵泡细胞GnRH受体定位和定量分析

本实验采用免疫组织化学ＰＡＰ法对体外培养的鸡卵泡细胞进行ＧｎＲＨ受体定位检查，证明了卵泡颗粒细胞（ＧＣ）和膜细胞（ＴＣ）上均存在能与鸡ＧｎＲＨ结合的阳性物质。应用放射配体结合法对ＧＣ和ＴＣ的ＧｎＲＨ受体定量分析，获得如下结果：１２５ⅠＧｎＲＨⅡ与ＧＣ或ＴＣ结合率随未标记配体的增加而减少，表现出专一的竞争抑制结合；ＧＣ的ＧｎＲＨ受体亲和常数ＫＡ＝１１１×１０８Ｍ－１，结合位点为４９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白；ＴＣ的ＧｎＲＨ受体ＫＡ＝１１３×１０８Ｍ－１，结合位点为５３ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。鸡的两型ＧｎＲＨ（Ⅰ型和Ⅱ型）与受体竞争结合有较强的交叉结合反应（交叉反应率为８８４％）。ＧｎＲＨ类似物ＬＲＨＡ３与ＧＣ的ＧｎＲＨ受体竞争结合反应率很低，几乎无结合活性。

体外无血清培养的鸡卵泡细胞GnRH样肽分泌的研究

本实验通过12 5Ⅰ标记的鸡GnRH与同源血清 (抗体 )反应 ,建立了鸡GnRH放射免疫分析法 (RIA) ,并用以检测体外无血清培养的鸡卵泡细胞 ,证明卵泡膜细胞 (TC)和颗粒细胞 (GC)培养液中均存在GnRH Ⅱ样肽物质。并发现TC细胞培养液中的GnRH Ⅱ样肽含量在 72h内随培养时间加长而增多 ,而GC细胞培养液中GnRH样肽含量变化不明显。实验结果表明鸡卵泡细胞能产生GnRH

同源GnRH对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

在建立鸡卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型的基础上,用鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理,或同时加入 GnRH 拮抗物(GA)或与羊 LH(oLH)协同处理,继续培养48 h 之后,用胰蛋白酶分别消化成单个细胞然后计数。获得结果是:GnRH-Ⅱ能刺激颗粒细胞增殖,同时加入 GA 能阻断 GnRH-Ⅱ的效果;单独加入 oLH 处理能刺激细胞增殖,在加入GnRH-Ⅱ,同时再加入 oLH 处理,其细胞增殖数明显低于单独用 oLH 处理的细胞增殖数目。