去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一。方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧6 h复氧3 h心肌细胞损伤模型,并于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为2.5,1.0和0.1 mg.L-1的DCⅣa。检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量,丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。MTT法检测心肌细胞存活率。结果DCⅣa(2.5,1.0 mg.L-1)显著减少缺氧及复氧后LDH和CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,提高心肌细胞存活率。结论DCⅣa为龙牙木匆心木总皂苷抗心肌缺血的有效成分之一,可减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞具有直接的保护作用。

去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa抗实验性心律失常作用

目的研究去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa(DCⅣa)是否具有抗实验性心律失常的作用。方法采用氯化钡、乌头碱、毒毛花苷G及结扎左冠状动脉前降支诱发大鼠或豚鼠心律失常模型,八道生理记录仪观察并记录Ⅱ导联心电图,观察DCⅣa对实验性心律失常的预防作用。结果DCⅣa能缩短氯化钡和乌头碱诱发大鼠心律失常的持续时间,增加恢复正常心律的动物数;增加诱发豚鼠心律失常的毒毛花苷G用量;延长冠脉结扎致大鼠心律失常发生的潜伏期,缩短心律失常的持续时间,降低室颤发生的百分率。结论DCⅣa具有明显的抗心律失常作用。

苦瓜总皂苷对2型糖尿病肾病大鼠肾脏细胞间纤连蛋白和胶原Ⅳ蛋白表达的影响

目的探讨苦瓜总皂苷对2型糖尿病肾病大鼠细胞间纤连蛋白(FN)和胶原Ⅳ蛋白(Ⅳ-CP)表达的影响。方法雄性SD大鼠48只随机分为正常对照组、2型糖尿病肾病模型组及苦瓜总皂苷5 mg/(kg·d),治疗组左肾切除加1次大剂量链脲佐菌素腹腔注射建立动物模型,正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,苦瓜总皂苷治疗组给予苦瓜总皂苷灌胃,分别于实验第4、8周处死大鼠各半,测血糖、24 h尿蛋白定量以及炎性因子;免疫组化、RT-PCR以及Western Blot检测FN和Ⅳ-CP蛋白的表达。结果治疗组尿蛋白和血清肌酐与模型组相比明显减少,血糖明显升高(P<0.05);免疫组化、RT-PCR和Western Blot与模型组相比治疗组大鼠肾脏组织FN和Ⅳ-CP表达明显降低(P<0.05)。结论苦瓜总皂苷可以通过抑制糖尿病肾病大鼠肾组织细胞间纤连蛋白和Ⅳ型胶原的表达,改善肾功能。

黄芪多糖和三七总皂苷配伍对糖尿病大鼠肾组织Ⅳ型胶原及层黏连蛋白表达的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)和三七总皂苷(PNS)配伍对糖尿病大鼠肾组织Ⅳ型胶原及层黏连蛋白的影响。方法通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,将糖尿病模型大鼠随机分为模型组、APS组、PNS组、APS组+PNS组和贝那普利组,除模型组外,每天给药1次,连续给药8周。8周后测定大鼠24 h尿总蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮;采用免疫组化法测定糖尿病大鼠肾组织内转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF-BB)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)和层粘连蛋白(LN)的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠24 h尿总蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮含量显著升高(P﹤0.01),肾组织中TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表达显著增强(P﹤0.01);与模型组比较,APS、PNS、APS与PNS配伍组大鼠的24 h尿总蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮显著降低(P﹤0.01),肾组织中TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表达显著减少(P﹤0.01),APS与PNS配伍组的作用优于APS、PNS单用组(P﹤0.05,P﹤0.01)。结论 APS和PNS配伍对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与其下调TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表达,从而抑制细胞外基质合成有关。

不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定

目的测定不同采收期珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量并确定珠子参的最佳采收期。方法供试品用60%乙醇超声提取40 min,滤过,取续滤液作为供试品溶液,高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱:Kromasil-C18(5 um,4.6 mm×150 mm);流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(36:64);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm。结果不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的累积量差异较大且7月含量最高。结论以竹节参皂苷Ⅳa为指标性成分确定珠子参的最佳采收期应为7月份。

异叶梁王茶甙Ⅲ和Ⅳ的结构

继前报后,又从异叶梁王茶[Nothopanax davidii(France)Harms]树皮中分离得到两种五环三萜皂甙。经化学和波谱(IR,~1HNMR,^(13)CHMR,~1H-~1HCOSY,^(13)C-~1H COSY,MS)分析,分别鉴定为3-O-α-(2’,4’-O-二乙酰基)-L-吡喃阿拉伯糖-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-双羧酸-28-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖(1—6)-β-D-吡喃葡萄糖]酯甙(Ⅲ),命名为异叶梁王茶甙Ⅲ和3-O-β-(2-O-乙酰基)-D-吡喃木糖-3β-羟齐墩果-12-烯-28,29-双羧酸甙(Ⅳ),命名为异叶梁王茶甙Ⅳ。这两种皂甙均系首次从植物中分出的新化合物。

竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:C57BL小鼠雌雄各半随机分成4组,每组10只,即正常对照组、模型组及竹节参皂苷Ⅳa低、高剂量组。HE染色观察小肠形态学变化,免疫组化检测各组小肠干细胞数量、PCNA表达及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果:与正常对照组比较,模型组小肠绒毛长度、V/C值、PCNA表达量及杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著升高,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著上调(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,竹节参皂苷Ⅳa组绒毛长度、V/C值、PCNA表达量、杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著降低,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:竹节参皂苷Ⅳa可通过Wnt/β-catenin信号通路调控小肠干细胞微环境,改善其过度增殖分化状态和抑制小肠干细胞增多,调节小肠干细胞功能。

太白楤木活性成分竹节参皂苷Ⅳa抗氧化及抗衰老作用研究

目的探讨太白楤木皂苷中的重要成分竹节参皂苷Ⅳa(CHS)抗氧化及抗衰老作用。方法取5~8代的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),使用过氧化氢(H2O2)诱导细胞氧化应激以及细胞衰老模型。MTT法分别检测不同浓度CHS及H2O2对细胞活力的影响;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞总活性氧(ROS)水平;Mito SOX染色流式细胞仪检测细胞线粒体ROS水平;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老状态;Western blot法检测衰老标志蛋白p53、p21蛋白表达水平以及关键抗氧化应激Nrf2通路(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)蛋白表达。结果浓度≤160μg·m L-1的CHS对MEFs细胞无明显毒性作用;H2O2能够显著提高细胞总ROS和线粒体ROS水平,诱导细胞衰老指标SA-β-gal活性增加,提高p53、p21表达水平,提高抗氧化信号通路Nrf2通路表达水平。CHS能够剂量依赖地降低H2O2诱导的细胞总ROS和线粒体ROS水平,减轻H2O2诱导的SA-β-gal活性升高,抑制p53、p21以及Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM蛋白表达水平的升高。结论 CHS具有显著的抗氧化应激和抗衰老作用。

氢氧化钠水解地榆总皂苷制备地榆皂苷化合物Ⅳ的工艺优选

目的:优化地榆总皂苷的碱水解工艺,提高水解产物地榆皂苷化合物Ⅳ的含量。方法:采用正交试验设计,考察水解时间、氢氧化钠体积分数、料液比、水解温度对地榆总皂苷水解过程的影响。结果:影响水解的主次因素依次是料液比>氢氧化钠体积分数>水解温度>水解时间,优选的最佳工艺为料液比1∶80;氢氧化钠体积分数20%,水解时间3.5 h,水解温度82℃。结论:采用优化后的水解条件能够得到含量较高的地榆皂苷化合物Ⅳ,适合工业化生产。

畲药山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定

目的：建立高效液相色谱法测定山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法：应用HPLC法测定,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（33∶67）;流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃;检测波长为203 nm。结果：山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa与其他组分分离效果良好,理论板数在10 000以上。竹节参皂苷Ⅳa的线性范围为12.610～252.200μg·ml-1（r=1.000 0）;平均加样回收率为98.13%,RSD=1.26%（n=6）。结论：该方法简便易行、准确、重复性好,可用于山里黄根的质量控制。

苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物协同对二肽基肽酶-Ⅳ的抑制活性

为评价动植物源天然产物的二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制活性,以苦瓜皂苷(momordica saponins,MS)、乳清蛋白胃蛋白酶水解物(whey protein pepsin hydrolysates,WPPHs)、乳清蛋白胰蛋白酶水解物(whey protein trypsin hydrolysates,WPTHs)为原料,采用单因素试验和响应面分析优化水解条件,再将MS与WPPHs、WPTH进行复配,结合模拟体外消化,探究DPP-Ⅳ抑制活性。结果表明,MS、WPPHs及WPTHs具有DPP-Ⅳ抑制活性,最佳水解条件为:当酶添加量4%、pH2.7酶解2h时,WPPHs的DPP-Ⅳ抑制率最高为15.43%;当酶添加量4%、pH 7.6酶解4 h时,WPTHs的DPP-Ⅳ抑制率最高为14.62%。苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物具有协同对二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性作用,当MS与WPPHs、WPTHs的复配体积比均为1:1时,显著高于两者单独累加(p<0.05)。经胃消化后,WPPHs的DPP-Ⅳ抑制率降低2.02%,MS和WPTHs的DPP-Ⅳ抑制率升高0.99%、7.01%;经肠道消化后,WPPHs的DPP-Ⅳ抑制率升高2.23%,而MS和WPTHs的DPP-Ⅳ抑制率降低4.12%、2.70%。研究结果可为天然动植物源产物协同对二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性提供了基础性数据,为降血糖功能性产品的开发提供新的方向。

不同炮制方法对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响

目的探究干热烘制和湿热蒸煮制对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量的影响。方法采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干对珠子参进行炮制加工,以HPLC测定不同炮制品中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果相比直接烘干,蒸制和煮制烘干的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量有降低。结论直接干燥对珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量影响不大,该方法适合珠子参药材的加工炮制。

云南不同产地珠子参的品质评价研究

目的:研究不同产地野生珠子参的竹节参皂苷IVa和总皂苷的含量差异,结合农艺性状对三个不同产地珠子参的种质资源进行评价,为珠子参的栽培及优质种质的筛选提供理论基础。方法:以云南三个不同产地野生珠子参为研究对象,采用紫外分光光度法和试剂显色法测定珠子参中总皂苷的含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定珠子参中竹节参皂苷IVa的含量;采用民族植物学田野调查法研究云南三个不同产地珠子参的农艺性状。结果:云南三个不同产地的野生珠子参,以云南省丽江市玉龙县的野生珠子参中总皂苷和竹节参皂苷IVa的含量最高,其珠子参总皂苷的含量为15.21%±1.25%,珠子参中竹节参皂苷IVa的含量为4.78%±0.35%,农艺性状也相对较优。结论:不同产地的珠子参质量差异较大,云南省丽江市玉龙县的野生珠子参品质较好,具有较高的开发利用价值。

氨液水解法用于提高黄芪中黄芪甲苷含量的工艺研究

目的:探讨氨试液水解法用于提高黄芪甲苷含量的最佳工艺条件;比较氨解前后黄芪总皂苷的含量差异。方法:采用正交设计试验对影响氨解程度的主要因素进行考察,以黄芪甲苷含量为指标,用高效液相色谱法测定其含量。采用大孔吸附树脂-比色法测定氨解前后黄芪总皂苷的含量。结果:浓氨试液与药材的配比对氨解程度的影响最为显著。最佳氨解工艺参数为:浓氨试液与药材配比1∶5,氨试液浓度为2%时,于90℃水浴回流2 h,黄芪甲苷含量较原药材提高约16倍。比色法结果显示氨解前后黄芪总皂苷含量无统计学差异。结论:氨解法可显著提高黄芪药材中黄芪甲苷的含量,且氨解过程并未影响黄芪总皂苷的含量。说明该法可使其他类型的皂苷转化为黄芪甲苷,具有较高实用价值,可为工业生产提供参考依据。

冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响

目的 探讨冰片、黄芪甲苷(AST Ⅳ)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血/再灌注后血脑屏障(BBB)的影响。方法 脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,观察神经功能缺损症状,测定脑组织含水量和BBB通透性、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、ZO-2、咬合蛋白(Occludin)及闭合蛋白5(Claudin-5)表达。结果 脑缺血/再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,神经功能评分和脑含水量增加,BBB破坏。各药物能不同程度减轻上述病理改变,冰片+AST Ⅳ+PNS效应最强,优于药物单用及AST Ⅳ+PNS。脑缺血/再灌注后,ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-5表达减少。各药物使ZO-1增加,除AST Ⅳ外,上调Occludin表达;冰片+AST Ⅳ+PNS还明显上调ZO-2,且上调ZO-1、ZO-2、Occludin的效应优于药物单用及AST Ⅳ+PNS。结论 冰片、AST Ⅳ和PNS能不同程度降低脑缺血/再灌注后BBB通透性的增加,减轻脑水肿,对抗脑组织损伤,三药合用有增强效应,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1、ZO-2、Occludin表达下调,保护BBB有关。

畲药山里黄根品质生物效价检测

目的:建立畲药山里黄根的抑菌效价测定方法,测定山里黄根的抑菌效价值。方法:采用抑菌试验考察山里黄根水提液对5种标准菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、铜绿假单胞菌)的抑菌性;采用微生物比浊仪建立山里黄根生物效价评价方法,并与HPLC法测得的竹节参皂苷Ⅳa含量进行对比。结果:山里黄根对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌敏感度较高;所建立的比浊法回收率在90.0%~110.0%范围内,可信限率均在5%以内;山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa含量与效价测定结果不尽相同。结论:所建立的生物效价检测方法可作为畲药山里黄根质量评价的方法之一。

冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷抗脑缺血再灌注损伤有效剂量的研究

目的探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosidesⅣ, ASTⅣ)和三七总皂苷(panax notoginseng saponins, PNS)抗脑缺血再灌注损伤的有效剂量。方法采用U6*(64)均匀设计实验,设立6个不同剂量的冰片、ASTⅣ和PNS配伍,予大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)再灌注大鼠灌胃干预,以神经功能评分、脑梗死率、脑含水量、脑组织病理形态、血脑屏障(bloodbrain barrier, BBB)通透性评价药物的作用,对效应指标进行多重线性回归分析,确立3种组(成)分的有效配伍剂量,并在此基础上进行验证。结果均匀设计实验表明,大鼠脑缺血再灌注后,出现明显的神经功能障碍,脑梗死率、脑含水量、神经细胞损伤率和BBB通透性均显著增加。冰片、ASTⅣ、PNS不同剂量配伍对上述指标均有一定的改善作用;多重线性回归分析表明,冰片7.5 mg/kg、ASTⅣ10 mg/kg、PNS25 mg/kg配伍为其抗脑缺血再灌注损伤的有效配伍剂量。验证实验显示,3种药物高、低剂量配伍能显著降低脑缺血再灌注大鼠神经功能评分和脑梗死率,3种药物配伍的效应显著优于各药物单用或ASTⅣ+PNS配伍(P<0.05或P<0.01)。结论冰片、ASTⅣ、PNS配伍可增强抗脑缺血再灌注损伤的效应,3种药物的有效配伍剂量为冰片7.5 mg/kg+ASTⅣ10 mg/kg+PNS 25 mg/kg。

胀果甘草中皂甙Ⅰ和Ⅱ的结构鉴定

胀果甘草中皂甙Ⅰ和Ⅱ的结构鉴定邹坤，赵玉英，张如意（北京医科大学植化教研室北京１０００８３）继前文工作（１，２，３），我们利用大孔吸附树脂初步分离，ＨＰＬＣ进一步分离，从胀果甘草（Ｇｌｙｃｙ－ｒｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａＢａｔ）根及根茎的１０％乙醇提取...

竹节参皂苷IVa甲酯对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖影响及机制研究

目的:探讨竹节参皂苷IVa甲酯(chikusetsu saponin iva methyl,CSIM)对血管紧张素II(angiotensin,Ang-II)刺激的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响及机制研究。方法:以大鼠血管平滑肌细胞为实验对象,建立Ang-II刺激的VSMCs增殖模型。MTT法检测CSIM对VSMCs的毒性;CCK-8法、Brd U法检测CSIM对VSMCs增殖的影响,划痕实验检测CSIM对VSMCs迁移力的影响,免疫蛋白印迹法检测PTEN、NF-κB蛋白表达水平。结果:3μmol/L的CSIM可显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖(P<0.05)与迁移(P<0.05),并伴随着PTEN蛋白的明显上调(P<0.05)及NF-κB蛋白表达的显著性降低(P<0.05)。结论:CSIM抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与上调PTEN蛋白,降低NF-κB蛋白表达有关。

高效液相色谱—蒸发光散射测定蒙古黄芪中黄芪甲苷的含量及其提取工艺的优化

目的研究高效液相色谱—蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定山西道地药材蒙古黄芪中黄芪甲苷含量的方法,优选黄芪中黄芪甲苷的醇-氨提取工艺。方法采用HPLC-ELSD法,梯度洗脱,以黄芪甲苷的含量为指标,采用L9(34)正交试验筛选黄芪的最佳提取工艺条件。结果色谱柱理论塔板数按黄芪甲苷计算为127001,分离度为2.25,拖尾因子为1.02,表明对称性良好,保留时间为35.58min;最佳提取工艺为A3B2C1D3,即甲醇∶氨水为9∶1,溶剂总量150ml,超声40min,提取3次。结论该方法适用于黄芪中黄芪甲苷的含量测定,优选得到的提取工艺操作简便。