抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达

为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。

抗CD4抗体对SEB诱导的PBMC增殖反应的抑制作用机理

目的 :探讨抗CD4抗体在SEB诱导的外周血单个核细胞 (PBMC)增殖反应中的作用机理。方法 :采用MTT法 ,以SEB为刺激原 ,观测在不同条件诱导的PBMC增殖反应中抗CD4抗体的作用。采用形态学、生物化学、流式细胞仪等方法 ,检测抗CD4抗体诱导的CD4+ T细胞凋亡。结果 :抗CD4人 鼠嵌合抗体和鼠源性单抗对由SEB诱导的PBMC增殖均有抑制作用。嵌合抗体能特异性诱导CD4+ T细胞发生凋亡。结论 :抗CD4抗体的增殖抑制作用能直接作用于TCR诱导的早期活化信号 ,嵌合抗体的抑制作用强度与单核细胞的存在密切相关 ,抗CD4嵌合抗体的进一步广泛交联是诱导凋亡的关键。

抗CD4人-鼠嵌合抗体的生物学特性及作用机理探讨

目的 比较抗 CD4人 -鼠嵌合抗体与鼠源性单抗在单向混合淋巴细胞反应 (ML R)和兔皮内移植物抗宿主反应(GVHR)中的作用 ,及嵌合抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒 (ADCC)和补体依赖细胞毒 (CDC)活性 ,以进一步探讨抗CD4嵌合抗体的增殖抑制作用机理。方法 用四甲基偶氮唑盐比色分析法检测抗 CD4抗体在单向 ML R中的抑制作用。以免疫抑制剂处理后的大白兔作为 GVHR的动物模型 ,对抗体的增殖抑制作用进行体内实验。结果 抗 CD4抗体对同种细胞性抗原诱导的外周血单个核细胞增殖反应有明显的抑制作用 ,能明显抑制 GVHR的阳性反应 ,嵌合抗体的抑制作用较鼠源性单抗强。抗 CD4嵌合抗体具有 ADCC效应 ,而无 CDC效应。结论 抗 CD4抗体可能通过多种抑制机制下调 CD4+ T细胞介导的免疫反应 。