用含药血清方法观察补肾益精方对破骨细胞功能的影响

目的 探讨补肾益精方含药血清的制备条件及其对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响。方法 取体重 2 70± 2 0g的SD大鼠 ,雌雄各半 ,每组 10只 ,同等条件下制备补肾益精方含药血清和对照血清 ,分别观察不同采血时间、不同喂药时间、不同灌胃剂量和血清添加量对骨吸收陷窝数量的影响。结果 末次灌胃后 1h采血组的骨吸收陷窝数明显少于其他各组 (P <0 0 5 ) ;灌胃 1d和 3d、7d组比较其含药血清的药效无差异 ,而与对照血清差异显著 ;随着灌胃剂量和含药血清添加量的提高 ,其骨吸收陷窝数明显减少。结论 补肾益精方含药血清对破骨细胞骨吸收功能具有明显的抑制作用 ;补肾益精方用于破骨细胞药效观察的大鼠含药血清制备条件为等效剂量连续两次 (间隔 2h)灌胃 ,末次灌胃后1h采血 ,其血清添加浓度为 30 %。

骨疏康颗粒影响破骨细胞外泌体治疗绝经后骨质疏松的机制研究

目的探究骨疏康颗粒(GSK)通过影响破骨细胞(OC)源性外泌体治疗绝经后骨质疏松(PMOP)的潜在机制。方法细胞实验建立OC和成骨细胞(OB)模型,制备GSK含药血清和对照血清,设空白组、对照组、对照外泌体组(对照血清)、药物外泌体组(GSK含药血清)。Western Blot检测两种血清干预OC后分泌的外泌体蛋白,电镜检测外泌体形态,荧光标记检测外泌体被OB摄取情况。随后开展OC来源外泌体干预OB模型研究。采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ALP表达,Real-time PCR技术检测骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)基因表达情况。动物实验建立PMOP模型,分为假手术组,模型组和药物实验组,每组6只大鼠。模型组进行生理盐灌胃,药物实验组进行GSK灌胃。干预8周后处死,取各组大鼠股骨组织进行HE和TRAP染色,观察骨细胞分化情况。采用Western Blot检测股骨组织OCN、OPN、RUNX2、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)蛋白表达情况。结果实验成功构建OC、OB、PMOP大鼠模型。对照血清和GSK含药血清干预OC模型均表达出CD9、CD63、CD81蛋白,且两种血清处理后OC外泌体均能被OB摄取。对照外泌体组及药物外泌体组均抑制成骨分化因子ALP、OCN、OPN、RUNX2 mRNA的表达,但后者的抑制作用减弱(P<0.01)。体内实验结果显示,与模型组比较,大鼠股骨组织染色提示药物实验组骨小梁中破骨陷窝减少,骨密质部位破损现象减轻,骨吸收减少;药物实验组大鼠股骨组织中OB分化的标记物OCN、OPN、RUNX2蛋白表达均显著增加,同时RANKL、OPG蛋白表达均降低(P<0.01)。结论GSK含药血清可以抑制OC分化,有效改善OC外泌体对OB分化的抑制作用。另外,GSK能有效促进PMOP模鼠OB分化,同时减少OC分化。