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CSBV的分离鉴定及其感染幼虫后的应答反应
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作者 费世港 刘合永 +3 位作者 王叶元 冯敏 王子龙 孙京臣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期89-96,共8页
本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定... 本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定后的CSBV对3日龄的中蜂幼虫进行人工感染,进行转录组测序,分析中蜂幼虫感染CSBV的应答反应。通过RT-PCR验证和电镜观察成功鉴定CSBV,并命名为CSBV-JX。CSBV-JX电镜观察直径为25~30 nm。对其进行分段扩增测序,发现基因组序列为8781 bp,对其进行系统发育分析,表明东方蜜蜂的SBV(AcSBV)与西方蜜蜂的SBV(AmSBV)明显分为两个分支,具有较强的地域分化性。转录组测序分析发现,中蜂幼虫在感染CSBV-JX后2 h有59个基因上调表达,83个基因下调表达;感染后12 h有68个基因上调表达,86个基因下调表达。本研究成功分离鉴定一株中蜂囊状幼虫病毒并命名为CSBV-JX。同时对CSBV-JX感染中蜂幼虫的转录组学分析发现,CSBV-JX感染2 h和12 h引起宿主的响应较小,这可能是CSBV-JX感染的2 h和12 h为病毒增殖的早期阶段病毒载量低,引起的宿主免疫响应小所导致。在CSBV-JX感染中蜂幼虫的2 h和12 h期间引起的差异基因与代谢通路关联较大,研究结果为阐明解析CSBV感染中蜂的分子机制提供了基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 分离鉴定 系统发育分析 转录组学
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Three-dimensional structure of the Chinese Sacbrood bee virus 被引量:1
2
作者 张景强 冯建勋 +4 位作者 梁玉尧 谌东华 周正洪 张勤奋 卢炘英 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2001年第4期443-448,共7页
The RNA of Chinese Sacbrood Bee Virus (CSBV) was purified and used as template to obtain a 1096 bp cDNA fragment by RT-PCR amplification. This DNA fragment was cloned into pGEM-T Easy Vector for sequencing. Analyses o... The RNA of Chinese Sacbrood Bee Virus (CSBV) was purified and used as template to obtain a 1096 bp cDNA fragment by RT-PCR amplification. This DNA fragment was cloned into pGEM-T Easy Vector for sequencing. Analyses of the sequenced CSBV RNA fragment revealed a nucleotide sequence homology of 87.6% and a deduced amino-acid sequence homology of 94.6% with that of the Sacbrood Virus (SBV), indicating that CSBV is a different but highly homologous virus of SBV. The three-dimensional (3D) structure of CSBV was determined at 2.5 nm resolution by using electron cryo-microscopy (cryoEM) and computer reconstruction methods. The 3-D structure showed that the capsid has a T= 1 (or P= 3) icosahedral capsid shell with a smooth surface. There were 12 pentons at its icosahedral vertices (5-fold axes) and 132 holes penetrating the shell. The 3-D structure also revealed densities corresponding to the CSBV genome, suggesting icosahedrally-ordered RNA organization, a novel feature not previously reported for any picornavi-ruses. 展开更多
关键词 chinese sacbrood virus (csbv) sequence three-dimensional structure ELECTRON cryo-microscopy.
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中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸的结构研究(英文) 被引量:10
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作者 张勤奋 杨艺峰 +2 位作者 梁玉尧 卢英 张景强 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期331-334,共4页
本文分别应用冷冻电镜与计算机三维重构技术和分子生物学技术对中蜂囊状幼虫病病毒 (CSBV)的核酸的三维结构和核酸一级结构进行测定和分析 。
关键词 中蜂囊状幼虫病病毒 核酸 一级结构 三维结构 csbv 冷冻电镜 蜜蜂 计算机三维重构 分子生物学
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基于PCR的中华蜜蜂囊状幼虫病毒检测技术研究进展 被引量:1
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作者 曹旭梅 张串联 +4 位作者 席芳贵 韩兵庚 张猛 娄文 夏晓翠 《蜜蜂杂志》 2023年第2期17-22,共6页
中华蜜蜂囊状幼虫病毒是中华蜜蜂囊状幼虫病的病原,属单正链小RNA病毒,是危害中华蜜蜂最主要的病毒之一。快速、高效、特异性强、灵敏度高的检测方式对遇制中华蜜蜂囊状幼虫病的发生与传播非常重要。对常用的基于PCR的中华蜜蜂囊状幼虫... 中华蜜蜂囊状幼虫病毒是中华蜜蜂囊状幼虫病的病原,属单正链小RNA病毒,是危害中华蜜蜂最主要的病毒之一。快速、高效、特异性强、灵敏度高的检测方式对遇制中华蜜蜂囊状幼虫病的发生与传播非常重要。对常用的基于PCR的中华蜜蜂囊状幼虫病毒检测方法进行了综述,并对它们的优缺点进行了比较,以期为中华蜜蜂囊状幼虫病毒的检测方法提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中华蜜蜂囊状幼虫病 聚合酶链式反应
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中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 冯建勋 余健秀 张景强 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期124-126,共3页
根据小RNA 病毒科( Picornaviridae) 中病毒RNA 所具有的结构特征, 采用mRNAcapture kit 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒(Chinesescabrood virus CSBV) 的RNA, 并以... 根据小RNA 病毒科( Picornaviridae) 中病毒RNA 所具有的结构特征, 采用mRNAcapture kit 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒(Chinesescabrood virus CSBV) 的RNA, 并以之为cDNA合成的模板. 依据小RNA病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物VP5和VP3 , 通过PCR 扩增获得预期大小约为1 100 bp的DNA 片段, 将此片段克隆到pGEMTeasy载体上并直接测序. 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为86-8 % , 与之对应氨基酸序列的同源性高达93-4 % . 展开更多
关键词 中蜂 囊状幼虫病 病毒 csbv 结构蛋白 基因克隆
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中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 被引量:4
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作者 马鸣潇 马臣 +3 位作者 程健 谢振声 李明 费东亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1768-1773,共6页
采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷... 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷酸,编码一个大的开放阅读框,其中包括178 nt的5'非编码区的前导序列和79 nt的3'非编码区,后面跟着一个poly(A)的尾巴.通过软件分析表明,CSBV-LN蛋白序列类似于哺乳动物的小RNA病毒蛋白序列,预计存在VP1,VP2,VP3和VP4等4个小的结构蛋白;系统进化分析表明,CSBV、囊状幼虫病毒(SBV)和残翅病毒(DWV)的起源相同,推测CSBV有着类似DWV的结构蛋白序列5'-VP2-VP4VP1VP3-3.基于此,根据PAGE蛋白条带的大小,利用NetPicoRNA软件预测结构蛋白的裂解位点.在此基础上,对纯化后的CSBV进行SDS-PAGE分离,对分离到的4个蛋白进行质谱分析,结果鉴定出VP1,VP3和VP0 3个蛋白. 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 反转录聚合酶链反应 结构蛋白 质谱分析
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中蜂囊状幼虫病病毒特异性半套式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:14
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作者 沈克飞 曹兰 +3 位作者 付利芝 任勤 姬聪慧 王介平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期39-42,共4页
基于中蜂囊状幼虫病病毒基因组序列AF469603中的RNA依赖的RNA聚合酶基因,建立该病毒的半套式RT-PCR检测方法。利用建立的方法检测有典型临床症状的病死中蜂幼虫,可扩增到特异的目的片段,序列分析得出,PCR扩增片段与AF469603同源性高于9... 基于中蜂囊状幼虫病病毒基因组序列AF469603中的RNA依赖的RNA聚合酶基因,建立该病毒的半套式RT-PCR检测方法。利用建立的方法检测有典型临床症状的病死中蜂幼虫,可扩增到特异的目的片段,序列分析得出,PCR扩增片段与AF469603同源性高于97%,与其他病原无同源性,表明该方法可用于临床诊断和流行病学研究。 展开更多
关键词 中蜂 囊状幼虫病病毒 半套式RT—PCR
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中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制 被引量:2
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作者 李慧 费东亮 +1 位作者 胡影 马鸣潇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1362-1367,共6页
【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最... 【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood bee disease,CSBV),并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15%FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中华蜜蜂囊状幼虫病毒(csbv) 原代细胞培养 胎牛血清(FBS) 实时定量RT-PCR
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陕北中蜂囊状幼虫病抗病品系的选育 被引量:3
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作者 高宝国 高崇东 +3 位作者 鲍亚利 田慧宇 张亚宁 刘新宇 《畜牧兽医杂志》 2012年第3期25-27,共3页
中华蜜蜂,简称中蜂。是我国独有的蜂种,囊状幼虫病是目前危害中华蜜蜂最主要的病害。试验以囊状幼虫病流行后自愈的蜂群为基础选育素材,采用人为感染、逐级淘汰、闭锁繁育、固定有益基因的育种手段,进行中蜂囊状幼虫病抗病品系的选育,... 中华蜜蜂,简称中蜂。是我国独有的蜂种,囊状幼虫病是目前危害中华蜜蜂最主要的病害。试验以囊状幼虫病流行后自愈的蜂群为基础选育素材,采用人为感染、逐级淘汰、闭锁繁育、固定有益基因的育种手段,进行中蜂囊状幼虫病抗病品系的选育,大大地提高了其抵抗囊状幼虫病的性能。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病 抗病选育 闭锁繁育
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抗菌肽对蜜蜂细菌性病原的抑菌作用研究 被引量:1
10
作者 沈克飞 翟少欽 +2 位作者 曹兰 杨柳 张邑帆 《中国蜂业》 2013年第Z3期32-35,共4页
从囊状幼虫病致死的中蜂幼虫虫体中分离中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV),将其接种9日龄鸡胚尿囊腔并盲传5代,采集尿囊液,运用RT-PCR法和免疫印迹法鉴定尿囊液中的CSBV。结果显示胚体肝脏有出血点,但胚体发育正常;在尿... 从囊状幼虫病致死的中蜂幼虫虫体中分离中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV),将其接种9日龄鸡胚尿囊腔并盲传5代,采集尿囊液,运用RT-PCR法和免疫印迹法鉴定尿囊液中的CSBV。结果显示胚体肝脏有出血点,但胚体发育正常;在尿囊液中检测出CSBV,表明CSBV可以在鸡胚中增殖。这为CSBV提供了简便的体外培养方法。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病病毒 鸡胚 培养 鉴定
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中蜂雄蜂精液与工蜂中蜂囊状幼虫病毒的检测
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作者 宋文菲 杨爽 +2 位作者 苗春辉 梁铖 张学文 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期64-67,共4页
为了解同群中蜂雄蜂精液及工蜂中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)的感染情况,寻找CSBV交尾传播的间接证据,利用RT-PCR方法对云南省蒙自市东村的3个中蜂群雄蜂精液及工蜂样本的CSBV进行检测。结果显示,3个蜂群的工蜂均被检测出携带CSBV,相对应的本... 为了解同群中蜂雄蜂精液及工蜂中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)的感染情况,寻找CSBV交尾传播的间接证据,利用RT-PCR方法对云南省蒙自市东村的3个中蜂群雄蜂精液及工蜂样本的CSBV进行检测。结果显示,3个蜂群的工蜂均被检测出携带CSBV,相对应的本群雄蜂精液样本也被检测出携带CSBV,二者呈正相关关系,雄蜂精液样本的平均感染率达到93.33%。结果表明,雄蜂精液是CSBV的携带者,为CSBV的交尾传播提供了间接证据。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 雄蜂 精液 工蜂 RT—PCR
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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP_2结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测 被引量:3
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作者 张琳 钱爱东 毛靖宇 《辽宁医学院学报》 CAS 2012年第5期407-410,436,I0003,I0004,共7页
目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP2蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法将已感染CSBV LN-QY株的RNA作为模板,进行RT-PCR扩增该毒株结构蛋白VP2基因,再与pMD18-T载体连接,之后转化大肠杆菌DH5α感受态... 目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP2蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法将已感染CSBV LN-QY株的RNA作为模板,进行RT-PCR扩增该毒株结构蛋白VP2基因,再与pMD18-T载体连接,之后转化大肠杆菌DH5α感受态,对经EcoRⅠ和BamH I双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP2的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP2结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP2结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于178-184,144-199,211-217氨基酸区段。结论本研究为CSBV LN-QY株VP2蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 VP2结构蛋白 空间结构 B细胞表位 预测
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中华蜜蜂囊状幼虫病毒检测方法研究进展 被引量:2
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作者 李小青 党晓群 《中国蜂业》 2021年第4期53-58,共6页
中蜂囊状幼虫病是一种由中蜂囊状幼虫病毒引起的严重威胁中蜂健康的传染性疾病。目前由于该病尚无有效的药物治疗方式,因此,预防与及时检测对于遏制该病传播显得尤为重要。本文主要从临床诊断、分子生物学和免疫学方面总结中蜂囊状幼虫... 中蜂囊状幼虫病是一种由中蜂囊状幼虫病毒引起的严重威胁中蜂健康的传染性疾病。目前由于该病尚无有效的药物治疗方式,因此,预防与及时检测对于遏制该病传播显得尤为重要。本文主要从临床诊断、分子生物学和免疫学方面总结中蜂囊状幼虫病检测与鉴定的方法,包括形态诊断、RT-PCR技术、实时荧光定量PCR、巢式PCR、胶体金免疫快速诊断技术、ELISA、血清学技术和基因芯片等,为中蜂囊状幼虫病毒检测方法的改进和优化提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病 显微观察 分子检测 免疫检测
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中蜂囊状幼虫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立与应用 被引量:1
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作者 王艺桦 王红坤 +2 位作者 周云倩 周丹银 张炫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期559-565,共7页
通过RT-PCR方法在云南中华蜜蜂体内检测中蜂囊状幼虫病毒(CSBV),该病毒主要以AmSBV-YN(GenBank ID:KX819276.1)病毒株的形式存在。为了精确鉴定、快速检测中蜂囊状幼虫病毒,根据AmSBV-YN的CDS保守区域,设计合成特异性引物并建立相对应的... 通过RT-PCR方法在云南中华蜜蜂体内检测中蜂囊状幼虫病毒(CSBV),该病毒主要以AmSBV-YN(GenBank ID:KX819276.1)病毒株的形式存在。为了精确鉴定、快速检测中蜂囊状幼虫病毒,根据AmSBV-YN的CDS保守区域,设计合成特异性引物并建立相对应的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的标准曲线循环域值(C_(t))与标准品模板浓度在2.34×10^(2)~2.34×10^(9)copies/μL间的线性关系良好,相关系数R~2为0.994,斜率为-3.118。该方法与蜜蜂残翅病毒、黑蜂王台病毒、蜜蜂以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,表明该方法特异性强;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于3%。所建立的荧光定量PCR方法对中华蜜蜂样品的检测结果显示,阳性率达90.0%,高于常规PCR方法的检测阳性率73.3%,说明该方法具有良好的适用性。结果表明,该方法可应用于对中蜂囊状幼虫病毒的快速检测,为中蜂囊状幼虫病的及时防控提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 中华蜜蜂 AmSBV-YN SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
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中华蜜蜂囊状幼虫病毒和东方蜜蜂微孢子虫顺序感染对中华蜜蜂营养和免疫的影响
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作者 王程程 张真 +4 位作者 李小青 郭悦 马振刚 周泽扬 党晓群 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期798-807,共10页
【目的】中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae都是严重威胁蜜蜂健康的重要病原,本研究旨在探究2种病原顺序感染对中华蜜蜂Apiscerana cerana存活率、营养代谢和免疫的影响。【方法】设... 【目的】中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae都是严重威胁蜜蜂健康的重要病原,本研究旨在探究2种病原顺序感染对中华蜜蜂Apiscerana cerana存活率、营养代谢和免疫的影响。【方法】设置中华蜜蜂取食正常食物、先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫和先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV3个处理,利用PCR检测中华蜜蜂在取食第2天和第4天后体内病原增殖情况;通过RT-qPCR检测中华蜜蜂感染病原后第2天和第4天后体内CSBV数量以及营养代谢基因(ilp1、ilp2、hexamerin70b和hexamerin70c)和免疫应答基因(toll、relish、jra、apidaecin、abaecin、defensin、hymenoptaecin和JAK)的表达情况。【结果】先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内孢子量高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组,而先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内CSBV拷贝数显著高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂营养代谢基因ilp1、ilp2、hexamerin70c和hexamerin70b的表达水平随感染时间延长逐渐呈现下调,而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中显著上调。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组中华蜜峰免疫基因toll和relish表达量呈现先增加后下降,而jra、JAK、apidaecin、abaecin、defensin和hymenoptaecin的表达量显著增加,而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中8个免疫基因的表达量均显著增加。【结论】在顺序感染过程中,东方蜜蜂微孢子虫的感染抑制CSBV的增殖,而CSBV的感染则有助于东方蜜蜂微孢子虫的增殖。先喂食CSBV比先喂食东方蜜蜂微孢子虫对中华蜜蜂营养和生长发育的影响更显著,且更易引起宿主的免疫防御,表明CSBV与东方蜜蜂微孢子虫顺序感染中蜂后引起的免疫应答及营养代谢更为复杂。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中蜂囊状幼虫病毒 东方蜜蜂微孢子虫 顺序感染 营养 免疫
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中华蜜蜂表皮蛋白AcFCP12的克隆表达及其RNAi研究
16
作者 郭悦 李颜 +4 位作者 王程程 张洁 张飞扬 党晓群 周泽扬 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1766-1776,共11页
【目的】昆虫的表皮是维持昆虫形态、抵御病原以及外界环境变化的主要保护屏障。本研究旨在通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)检测中华蜜蜂Apis cerana cerana柔软表皮蛋白flexible cuticle protein 12(FCP12)对CSBV病毒感染的影响。... 【目的】昆虫的表皮是维持昆虫形态、抵御病原以及外界环境变化的主要保护屏障。本研究旨在通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)检测中华蜜蜂Apis cerana cerana柔软表皮蛋白flexible cuticle protein 12(FCP12)对CSBV病毒感染的影响。【方法】采用生物信息学分析鉴定AcFCP12序列特征,通过qRT-PCR检测CSBV感染前后中蜂AcFCP12的转录水平;通过原核表达系统对中华蜜蜂AcFCP12进行表达、纯化及其抗体制备;利用L4440载体表达双链ds AcFCP12,采用RNAi干扰技术下调中蜂幼虫AcFCP12的表达,再对其进行CSBV病毒感染实验,通过qRT-PCR检测AcFCP12和CSBV衣壳蛋白基因VP1的表达量,分析CSBV病毒感染与中蜂表皮蛋白AcFCP12的相关性。【结果】生物信息分析表明,中蜂AcFCP12包含一个几丁质结合域,具有RR1基序,表明该基因编码柔软表皮蛋白。qRT-PCR结果显示,AcFCP12在CSBV病毒感染24 h和48 h分别下调了86%和40%。通过原核克隆表达成功获得约12 kD的AcFCP12重组蛋白并制备了特异性较好的鼠多克隆抗体。利用L4440载体系统成功获得AcFCP12的双链RNA,RNAi实验表明,AcFCP12基因表达下调了65%。通过下调AcFCP12表达后再进行CSBV病毒感染,qRT-PCR结果显示CSBV的VP1基因表达量显著增加了33%。【结论】CSBV病毒感染中蜂引起AcFCP12表达量降低,下调AcFCP12表达后导致CSBV病毒增殖加剧,表明中华蜜蜂AcFCP12在抵御CSBV感染时发挥重要作用,研究结果为阐明CSBV病毒对中蜂的感染机制奠定基础。 展开更多
关键词 柔软表皮蛋白 中华蜜蜂 中蜂囊状幼虫病毒 原核表达 RNA干扰
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中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:15
17
作者 马鸣潇 李明 +4 位作者 袁春颖 李鹏飞 张轶博 苏玉虹 曲祖乙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期425-427,共3页
目的建立中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法。方法参照已发表的中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)基因序列,针对其结构蛋白基因设计1对特异性引物,提取感染CSBV的囊状幼虫RNA,反转录为cDNA,以其为模板,进行PCR扩增,对检测方法进行优化,验证该方法的... 目的建立中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法。方法参照已发表的中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)基因序列,针对其结构蛋白基因设计1对特异性引物,提取感染CSBV的囊状幼虫RNA,反转录为cDNA,以其为模板,进行PCR扩增,对检测方法进行优化,验证该方法的特异性及敏感性,并对31份临床样品进行检测。结果所建立的CSBVRT-PCR检测方法特异性和敏感性良好,以含CSBV结构蛋白基因的重组质粒为模板,最低可检出10pgDNA。临床症状诊断和电镜观察均为阴性的22份样品经RT-PCR检测,有2份扩增出目的条带。结论已建立了中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法,为CSBV检测、流行病学调查及动物模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 反转录聚合酶链式反应 特异性 敏感性
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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP1蛋白的空间结构与B细胞抗原表位预测 被引量:5
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作者 程健 张佩 +2 位作者 马鸣潇 李明 杨松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期280-284,共5页
目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP1蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法以CSBV LN-QY株RNA为模板,RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,对经EcoRⅠ和HindⅢ双酶... 目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP1蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法以CSBV LN-QY株RNA为模板,RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,对经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP1的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP1结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域,亲水性,表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP1结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于47-53,139-145,273-284氨基酸区段。结论本研究为CSBV LN-QY株VP1蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 病毒结构蛋白质类 空间结构 表位 B淋巴细胞 预测
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中蜂囊状幼虫病病毒重庆株编码序列分析 被引量:2
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作者 曹兰 张邑帆 +3 位作者 沈克飞 任勤 杨柳 付利芝 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1561-1566,共6页
目的分析中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)重庆株(CSBV.CQ)编码序列的分子特性。方法采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV编码序列片段,并进行序列测定,使用Clustal W2软件进行多序列比... 目的分析中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)重庆株(CSBV.CQ)编码序列的分子特性。方法采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV编码序列片段,并进行序列测定,使用Clustal W2软件进行多序列比对分析,利用推导的氨基酸序列进行保守结构域BLAST和同源建模,采用MEGA4软件的邻接法(neighbor-joining)中的最大可能性算法(maximum likelihood method)构建系统进化树。结果扩增的片段拼接出8358nt的片段,约占SBV基因组长度的95%;CSBV—CQ与CSBV—GZ的核苷酸和氨基酸序列同源性均最高,在CSBV—GZ的2270~2320位碱基缺失51nt核苷酸;多聚蛋白N-末端包含2个小RNA病毒衣壳蛋白药物结合口袋(drug-binding pocket)结构域(domain),C-末端包含RNA解旋酶(RNA helicase)和RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase)2个结构域;基于基因组水平的系统进化分析显示,所有东方蜜蜂分离株、西方蜜蜂分离株AmSBV-Kor19构成1个基因型,但基于基因组片段的分子系统进化分析显示,部分毒株包含2个基因型片段。结论SBV基因型间存在基因重组现象。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病病毒 编码序列 系统进化 基因重组
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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP3蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测 被引量:2
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作者 费东亮 毛靖宇 +1 位作者 宋英今 马鸣潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第9期1106-1111,共6页
目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSBV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶... 目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSBV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶切鉴定并测序,通过与SBV-KOR、CSBV-UK株VP3基因序列的比对,获得LN-QY株VP3基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列,建立VP3蛋白的3D结构。在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP3结构蛋白的空间构象较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于4个区域:25-50,101-109,112-120,250-268氨基酸区段,其中,可能出现抗原表位的2个区域在100-150和250-300氨基酸区段,应作为抗原表位研究的重点区域。结论预测了CSBV LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位,为CSBVVP3蛋白单克隆抗体的制备以及表位疫苗的设计奠定了理论基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 VP3结构蛋白 空间结构 B细胞抗原表位 预测
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