Effects of different high temperatures and incubation time periods on embryogenesis in isolated microspore culture of Chinese cabbage (Brassica campestris L. ssp pekinensis)

Effects of five incubation temperatures (25℃ ,28℃ ,31℃ ,35℃ and 37℃ for 24hours) and four incubation time periods (0.4,16 and 24 hours at 35℃) on isolated microspore culture of Chinese cabbage were studied. The results showed that cultured microspores of Chinese cabbage developed into embryos at all the incubation temperatues from 28℃ to 37℃ ,but the best response to high temperature occured at 35℃. Among the four kinds of time periods, the highest yield of embryos was obtained at the 24h treatment. Therefore, the isolated microspore culture of Chinese cabbege ran be efficiently carried out at 35℃ for 24 hours.

提高大白菜小孢子胚胎发生及植株获得率的几个因素研究

春季生长在露地条件下的大白菜供体植株，在适宜开花期采集花蕾进行小孢子培养可显著提高小孢子胚胎发生率。连续摘除即将开花花蕾，也可提高适宜花蕾内小袍子胚胎发生率。 ＮＬＮ培养基添加０． ０５～０．１ｍｇ· ｍ Ｌ－１活性炭可使小孢子胚胎发生率提高１倍以上，并使子叶型胚率提高２７．５％～６９．０％。小孢子培养２周后进行摇床培养１周，可促进原胚迅速发育成子叶型胚，并提高胚发育同步性。培养３周的小孢子子叶型胚再生植株率明显高于培养５周的子叶型胚再生植株率，分别为６４．５％和４２．３％。

小白菜游离小孢子培养及其再生植株

在NLN-13添加活性炭的液体培养基中,20个小白菜品种有18个诱导出小孢子胚.各品种间小孢子胚产量差别较大,每花蕾产胚在0.026～26.89个之间.比较NLN培养基中蔗糖、植物生长调节物质浓度效果表明,NLN+蔗糖130 mg·L-1效果较好.接种后小孢子在33℃高温预处理24 h产胚量较高.B5+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+蔗糖30 mg·L-1+琼脂11mg·L-1培养基有利于小孢子胚长成植株.

提高大白菜游离小孢子胚诱导率的研究

采用游离小孢子培养方法,对提高大白菜小孢子胚诱导和形成的因素进行了研究.结果表明,24个大白菜品种(品系)在NLN-13液体培养基中有21个品种诱导出胚.各品种间小孢子胚产量差别极大,每花蕾产胚在0.1～14.66个之间.比较添加不同浓度蔗糖和激素的NLN培养基的培养效果,以NLN+13%蔗糖的效果较好.接种后,小孢子在33℃高温预处理24～48 h,产胚量较高.B5+6-BA 0.2 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂培养基有利于小孢子胚长成植株.

青麻叶大白菜小孢子培养及新品种选育

对影响青麻叶大白菜游离小孢子培养的因素进行了研究。结果表明:供体植株的基因型与小孢子胚胎发生密切相关;33℃,24h高温处理有助于小孢子转化成胚状体,每蕾成胚数比25℃恒温培养提高4 5倍;在培养基中加入外源激素和多种氨基酸可以提高胚状体的诱导效率,平均比对照增加59.64%;培养基的琼脂含量增加到12g/L能显著提高小孢子胚的成苗率,比含琼脂8g/L的高出40.5个百分点。通过对青麻叶大白菜小孢子胚的培养,获得二倍性的双单倍体植株,从中选出性状优良的纯系进行杂交组合的选配,培育出青麻叶大白菜的新品系。

大白菜游离小孢子培养技术研究初报

以中晚熟大白菜为试材,进行游离小孢子培养研究,结果表明,在10～25℃下生长的供体植株适宜小孢子培养;不同基因型反应不同,拧抱炮弹型的诱导率达66.7%,其中18-1-4-2-2-2每蕾产胚量高达100胚;NLN中添加适量活性炭对小孢子胚胎发育的同步性有很好的作用;在MS中附加1.2%琼脂的培养基适宜植株再生,成苗率达62%,已培育出一批健壮苗,并开花结实。

大白菜游离小孢子培养

对13个大白菜品种(品系)进行了游离小孢子培养,从12个品种中诱导出胚,最高诱导效率为每花蕾平均产胚178个。对培养小孢子的发育过程进行了系统观察,结果表明,接种后小孢子先于35℃高温下处理一天,对小孢子发育成胚十分必要。本结果为芸薹属作物花药培养和游离小孢子培养提供了细胞形态学方面的依据。

活性炭对小白菜游离小孢子培养的影响

以24个小白菜品种为材料,通过在NLN培养基中添加不同浓度活性炭,研究其对游离小孢子培养的影响。结果表明：在NLN-13培养基中添加活性炭（0.5 g/L）,有利于小孢子胚的诱导和形成,供试材料（N4,N8）添加活性炭处理胚诱导率较未添加活性炭的处理分别提高19,66.5倍。采用添加活性炭（0.5 g/L）的NLN培养基对24份小白菜品种进行游离小孢子培养,有20份材料诱导出胚,培养成功率为83.3%。表明添加活性炭的培养基对小白菜游离小孢子培养有较好的效果。不同基因型间胚诱导率差别较大,每花蕾诱导胚数为0.4-86.7个。依据胚诱导率的高低可将其分为极易诱导、易诱导、难诱导和不能诱导出胚4类。B5＋6-BA 0.2 mg/L＋NAA 0.02 mg/L＋活性炭0.5 g/L＋3%蔗糖＋1%琼脂培养基有利于幼胚长成植株。

游离小孢子培养育成早熟大白菜新品种‘豫新58’

‘豫新58’是采用游离小孢子培养双单倍体育种技术育成的大白菜一代杂种。该品种早熟，生育期58-60d。叶球矮桩叠抱，单球质量1.5-2.0kg。叶质柔嫩，口感略甜，风味佳，生食、熟食皆宜。净菜产量68.8t·hm^-2。抗病性好。

四倍体大白菜小孢子植株的获得与倍性鉴定

以同源四倍体大白菜为试材，进行了游离小孢子培养的胚胎诱导条件及植株再生研究，并对再生株的染色体数进行了鉴定。结果表明：单核靠边期小孢子是诱导胚胎发生的最佳时期；不同基因型的四倍体大白菜小孢子胚胎发生能力不同，其中９４０５品系产胚率达８１胚／蕾；适于小孢子胚胎发生的培养基为ＮＬＮ附加蔗糖１３％～１７％、ＢＡ０．０５～０．２ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０～０．５ｍｇ／Ｌ；ＮＬＮ中添加活性炭０．０５～０．１ｇ／Ｌ可有效提高小孢子胚胎产率及发育同步性；３３℃２４ｈ热激处理是诱导小孢子胚胎发生的必要条件；子叶型胚适宜植株再生，在Ｂ５附加琼脂１．２％或０．８％并铺有滤纸的培养基上子叶型胚植株再生可达４４％～６２％。共获得７３２个小孢子株系，其中三体株系１０９个。四倍体小孢子培养获得植株为大白菜三体系的创建找到了一条有效的途径。

利用游离小孢子培养技术育成早熟大白菜新品种‘豫新60’

‘豫新 6 0’系采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成的大白菜一代杂种。该品种早熟 ,生育期 6 0～ 6 5d ;高抗病毒病 (TuMV)、霜霉病和软腐病 ;净菜产量 5 9 9～ 6 9 8t·hm-2 ;叶球矮桩叠抱 ,球形指数 1 19,单球质量 1 5～ 2 0kg ;叶质柔嫩 ,生食、熟食皆宜 ;口感略甜 ,风味佳。

提高大白菜小孢子植株获得率的研究

大白菜小孢子胚发生过程中胚胎发育不同步,以子叶形胚数量最多。发育较好的胚状体成苗率较高,子叶形胚和萌发胚成苗率分别为20%和90.5%;较干燥的培养基更利于小孢子胚成苗,最适的琼脂含量是1.2%。培养基中添加200 mg.L-1活性炭可以大幅度提高小孢子胚成苗率,及时地将成熟的子叶形胚转移至再生培养基上,对提高植株获得率至关重要。

利用游离小孢子培养技术育成抗热大白菜新品种‘豫园50’

采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成大白菜一代杂种‘豫园 5 0’。该品种生育期5 2d ,高温结球能力强 ,单球质量 1.4 5kg ,球形指数 1.74 ,抗病毒病、霜霉病、黑斑病和黑腐病等多种病害 ;净菜产量 5 2 .6～ 5 8.7t·hm-2 。

基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响

17个用于大白菜常规育种的基因型在NLN-13液体培养基中进行游离小孢子培养,结果有16个基因型经由小孢子胚胎发生途径获得小孢子胚.这些基因型包括从早熟到晚熟的各种类型.各基因型之间在小孢子胚胎发生频率方面存在很大差异,产量最高的两个基因型T11和CC11,平均每百花蕾分别达35 928和34 132个胚.供体植株生长环境对小孢子胚胎发生具有明显影响:在10/20℃(夜/昼)的部分控温温室生长的供体植株,其小孢子胚产量较高;而在温度无法调控、午间最高温达30-40℃、夜间降至10-15℃左右田间生长的供体植株,胚产量仅为前者的29.5%.

利用游离小孢子培养技术育成豫白菜7号(豫园1号)

对大白菜游离小孢子培养技术进行了研究，并比较了此技术与花药培养胚诱导效率的差异。结果表明游离小孢子培养诱导效率比花药培养高数十倍。常规育种需５～６代自交才能得到相对纯合的自交系，而游离小孢子培养只要１～２年就能获得基因完全纯合的双单倍体系。豫白菜７号（豫园１号）为两个游离小孢子培养产生的自交不亲和系（纯系）配制的一代杂种，表现整齐一致、抗病、高产、优质、耐贮藏，生育期７５～８０天。每６６７ｍ２净菜产量６０３６．７～７５３８．８ｋｇ，比鲁白８号增产８．３６％～２４．４％。１９９４～１９９７年累计推广３．０１万ｈｍ２。

通过游离小孢子培养育成的优质大白菜新品种‘豫白菜12号’

采用游离小孢子培养双单倍体育种技术快速育成的大白菜杂交一代新品种‘豫白菜 12号’ ,中晚熟 ,生育期 80～ 85d ;抗病毒病、霜霉病、黑斑病及黑腐病 ;净菜产量96.5～ 10 6t/hm2 ;半高桩 ,叠包类型 ,球形指数 1.5,叶球白色 ,整齐 ,商品性好 ,耐贮藏 ;软叶率 51.9% ,质地柔嫩 ,生、熟食皆宜 ,口感好 。

影响大白菜游离小孢子培养若干因素的研究

以太原地区大白菜主栽品种的F1“科萌夏秋王”、“科萌78”、“德阳01”等30个品种为试验材料,采用游离小孢子培养方法,研究了基因型、蔗糖、活性炭、细胞分裂素6-BA、生长素NAA、高温热激、氨基酸对小孢子胚胎发生的影响,培养基对子叶期胚分化的影响。研究结果表明：30个品种大白菜在植物组织培养基NLN-13液体培养基中有15个诱导出胚;添加不同浓度蔗糖以NLN-13培养效果最好;合适的活性炭浓度可明显提高小孢子的出胚率;NLN液体培养基中添加NAA和6-BA对小孢子出胚率影响不大,浓度超过一定剂量时出胚率反而降低;高温热激在12-48 h范围内小孢子出胚率差异不大,在此范围以外小孢子出胚率明显降低;添加一定量的氨基酸可提高小孢子出胚率;1 L B5＋0.2 mg 6-BA＋20 g蔗糖＋12 g琼脂培养基有利于小孢子子叶期胚长成再生植株。

秋水仙碱对甘蓝游离小孢子胚胎发生及发育的影响

【目的】研究秋水仙碱对甘蓝小孢子胚胎发生及发育的影响,为促进甘蓝小孢子培养技术的有效利用提供依据。【方法】以甘蓝一代杂种及不同自交代数的高代自交系、低代自交系为试材,在游离小孢子培养基中添加不同质量浓度秋水仙碱,处理时间为48h,以不添加秋水仙碱为对照(CK),在同等条件下进行小孢子培养,分别比较产胚量和胚胎发育状况的差异。【结果】(1)培养基中添加10mg/L秋水仙碱的40份甘蓝材料中,有19份产生了胚状体,产胚材料比率为47.5%,较对照提高25%;(2)以9份甘蓝一代杂种及不同自交代数的高代自交系、低代自交系为试材,在培养基中添加1,10,50mg/L秋水仙碱后,每蕾产胚数、子叶形胚率均较对照有所增加,其中一代杂种及低代自交系材料在1或10mg/L秋水仙碱处理时增加幅度较大,每蕾产胚数和子叶形胚率分别为1.30～2.20个和15.0%～69.1%,而高代自交系材料在10或50mg/L秋水仙碱处理时增加幅度较大,每蕾产胚数和子叶形胚率分别为0.78～1.98个和14.1%～70.6%;(3)在培养48h时,用倒置显微镜观察各试材的小孢子,发现培养基中分别添加1,10,50mg/L秋水仙碱时,膨大小孢子数量均较对照明显增多;在静止培养期间用倒置显微镜观察各试材小孢子的胚胎发育情况,发现培养基中添加1,10,50mg/L秋水仙碱处理的多细胞原胚、球形胚、心形胚、鱼雷形胚频率均较对照高。【结论】在甘蓝小孢子培养基中添加秋水仙碱,可使培养无反应材料的部分材料产胚,使培养有反应材料的产胚量提高,同时也对胚胎的良好发育有促进作用。

早熟大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生的研究

为了优化大白菜游离小孢子培养技术,研究了影响大白菜游离小孢子胚状体诱导及植株再生的主要因素,结果表明:不同基因型的小孢子胚状体的发生频率有明显差异,试验的10个基因型中有7个基因型诱导出了胚,其中以早熟大白菜‘陕秋白’产胚量最高,达到每蕾54.8个胚,耐抽薹的‘05BRF1-20’、‘05BRF1-22’和晚熟的‘秦白3号’没有诱导出胚.研究发现植株的生理状态与小孢子的发育关系密切,盛花期取样的小孢子出胚率最高,分别是初花期和末花期的4.65和15.4倍.在NLN-13培养基中附加0.2 mg.L-16-BA能促进胚状体的发生.B5培养基中附加0.1 mg.L-1GA3是小孢子胚芽分化的最佳培养基.1/2MS培养基中附加0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株的最适生根培养基.

大白菜新品种‘豫新1号’

采用游离小孢子培养双单倍体技术育成大白菜一代杂种‘豫新1号’。该品种生育期75 d;抗病毒病、霜霉病、黑斑病及黑腐病;净菜产量81.1-90.7t/hm2;叶球矮桩叠抱,球形指数1.28,叶球绿白色,整齐,商品性好,耐贮藏;质地柔嫩,生熟食皆宜,口感风味佳。