SO_2致CHL细胞氧化损伤及VC保护作用

目的探讨二氧化硫(SO2)对哺乳类细胞的毒性作用及其防护。方法以SO2体内衍生物-亚硫酸盐和亚硫酸氢盐(分子比为3∶1)及抗坏血酸(维生素C,VC)单独或同时处理中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL),并分别测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质过氧化(LPO)水平。结果(1)SO2体内衍生物单独处理后,CAT活性在12,24 h时显著降低;36 h时,除5 mmol/L组外,其余各组均极显著降低;48 h时15,20 mmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。除12 h时的5 mmol/L组外,其余各组LPO水平在处理12,24 h时均明显升高。(2)VC单独处理后,各组CAT活性只在12 h时显著升高,同时LPO水平降低,但是只有0.10,0.25 mmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)0.1 mmol/L VC和不同剂量SO2衍生物共同处理后,CAT活性仍然呈下降趋势,但加添VC的组CAT活性普遍高于相应的未加VC组,且培养12 h的5,10 mmol/L组及24 h的10,15mmol/L组与未添加VC组比较,差异有统计学意义(P<0.05);VC也降低了SO2衍生物引起的LPO水平。(4)在CHL细胞中未检测到SOD。结论SO2体内衍生物可以使CHL细胞中CAT活性降低、LPO水平增高,且VC可起到一定防护作用。

八氯二丙醚对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的 研究八氯二丙醚 (S2 )对中国仓鼠肺细胞 (CHL)染色体畸变作用。方法 测定S2 对CHL细胞的半数抑制浓度 (IC50 ) ,根据IC50 设立不同剂量组 ,进行正式试验 ,分别观察 2 4h ,4 8h及加S9后的染色体畸变情况 ,根据标准进行结果判定。结果 染毒 2 4h为可疑阳性反应 ,染毒 4 8h以及加入活化系统染毒 6h为阳性反应。结论 S2 可引起CHL细胞染色体产生畸变作用。

甲醛、三氯乙烯、三氯化铝的细胞联合毒作用

目的 研究甲醛、三氯乙烯和三氯化铝的联合毒作用类型。方法 噻唑蓝法 (MTT)测定 3种物质各自的半数生长抑制浓度 (IC50 )及混合物 (甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 )的IC50 ,根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型。结果 甲醛、三氯乙烯、三氯化铝及其混合物质的IC50 分别为 0 . 0 2 2 6 ,0 . 36 8,0 . 5 89和0 . 12 4mg/ml,据Finney法求得Q值为 1 .0 8,Logisitc回归模型参数 β4差异无统计学意义。结论 甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 (6∶11∶33)混合染毒 ,对中国仓鼠肺细胞的联合毒性表现为相加作用。

纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

目的:研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法:以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/m L)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC5 0以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数;Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡和坏死发生率,同时观察细胞染毒后的形态变化,记录前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)信号;Giemsa染色中期分裂相涂片分析染色体畸变发生率。结果:纳米银毒性水平与纳米银浓度呈正相关(r=0.804,P<0.05),IC 50为21.68μg/m L。22.0μg/m L纳米银与CHL细胞接触24 h后,细胞形态发生明显改变;细胞群SSC信号显著增强,为细胞摄入纳米银提供间接证据;细胞周期在G2/M期被捕获,对G0/G1期、S期以及细胞增殖指数变化情况影响显著(P<0.01);22.0μg/m L纳米银染毒CHL 24 h后凋亡发生率与对照组差异明显(P<0.01);各浓度纳米银诱导染色体结构畸变率均大于5%(P<0.01),中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上(P<0.01)。结论:纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到重要作用。

亚硝酸钠对中国仓鼠肺细胞染色体畸变率的影响

[目的]研究亚硝酸钠(NaNO2)致中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变的作用。[方法]测定NaNO2对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行正式实验,分别观察不加及加S9后的染色体畸变情况,根据标准进行结果判定。[结果]NaNO2染毒在不加S9时,128、12.8和1.28μg/ml3个剂量组的染色体畸变率均﹥5%而≤10%,为可疑阳性,而高剂量组(1.28mg/ml)畸变率﹥10%而﹤20%,为阳性反应。NaNO2染毒在加入活化系统S9后,各剂量组引起CHL细胞染色体畸变率在12.8和1.28μg/ml2个剂量组的染色体畸变率均﹥5%而≤10%,为可疑阳性,而中(128μg/ml)和高(1.28mg/ml)剂量组畸变率均﹥10%而﹤20%,为阳性反应。[结论]NaNO2在1.28mg/ml剂量下可引起CHL细胞染色体畸变率增高。

高纯度大豆卵磷脂对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究高纯度大豆卵磷脂对中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变作用。方法测定高纯度大豆卵磷脂对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行正式试验,分别观察高纯度大豆卵磷脂接触CHL 6 h,24 h及加S9后6 h染色体的畸变情况,根据标准进行结果判定。结果染毒6 h,24 h及加S9后染毒6h染色体畸变为阴性。结论高纯度大豆卵磷脂不能引起CHL细胞染色体产生畸变作用。

人参皂苷Rd对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究人参皂苷Rd致中国仓鼠肺细胞(Chinesehamster lungcells,CHL)染色体畸变的作用。方法细胞计数法测定人参皂苷Rd对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rd染毒6、24h及加S9后染毒6h CHL细胞染色体的数目及结构变化,进行染色体畸变分析。结果人参皂苷Rd染毒6、24h及加S9后染毒6h CHL细胞染色体畸变为阴性。结论在本试验条件下,人参皂苷Rd不能引起CHL细胞染色体产生畸变。

藏药绿萝花彗星试验(SCGE)研究

研究藏药绿萝花的抗(致)突变作用,科学合理地利用藏药资源.根据遗传毒性研究试验组合原则和判定标准,以环磷酰胺、丝裂霉素C为阳性药物对照,采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),研究不同剂量绿萝花对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL) DNA的影响.结果显示,环磷酰胺、丝裂霉素C具有很强的致CHL细胞SCGE上升、HDNA下降、TDNA上升、TL和TM增加(超过40μm)的作用;生药浓度为0. 224 g/mL、0. 448 g/mL、0. 896 g/mL的绿萝花在分别染毒1次、2次和3次后对CHL细胞DNA无影响,对环磷酰胺和丝裂霉素C引起的DNA损伤无保护作用.研究表明藏药绿萝花无致基因突变作用,研究结果为绿萝花临床安全用药提供了科学依据.

人参皂苷Rb_3对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究人参皂苷Rb3对中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变作用。方法测定人参皂苷Rb3对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rb3接触CHL细胞6 h、24 h及加S9后6 h染色体的畸变情况,根据标准进行结果判定。结果染毒6 h、24 h及加S9后染毒6 h染色体畸变为阴性。结论人参皂苷Rb3不能引起CHL细胞染色体产生畸变作用。

碲化镉量子点对CHL细胞染色体畸变作用研究

目的探讨碲化镉量子点(CdTe QDs)对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变作用。方法用体外方法检测CdTe QDs在1.6、3.2、6.3、12.6、25.2μl/ml染毒浓度范围内,在代谢活化条件下(+S9)及非代谢活化条件下(-S9)CHL细胞的染色体畸变率。结果 CdTe QDs的代谢活化组(+S9)在染毒浓度为2.6μl/ml和25.2μl/ml浓度组CHL细胞染色体畸变率与对照组比较,显著增加(P<0.01),染色体畸变类型主要是染色体断裂、交换和碎片等。结论 CdTe QDs在代谢活化条件下(+S9)可能导致CHL细胞染色体畸变。

丙烯腈对V_(79)细胞通透性、线粒体膜电位及超微结构的影响

目的观察丙烯腈(ACN)对中国仓鼠肺成纤维细胞株(V79)的毒性作用及对线粒体膜电位、生物膜的完整性和超微结构的影响,以探讨ACN的膜毒性。方法以离体培养的V79细胞为研究对象,台盼蓝染色法观察不同染毒剂量的细胞毒性;电镜技术观察细胞生物膜超微结构,应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位、生物膜完整性。结果ACN染毒后,除1μmol/L组[(91.02±2.17)%]外,其余各处理组的细胞存活率与对照组的差异均有显著性(P<0.05);8、40、200、1 000、2 000、5 000μmol/L组线粒体膜电位改变率[(14.43±3.44)、(22.50±1.50)、(37.96±2.23)、(59.37±5.34)、(93.14±1.23)、(100.00±1.63)%]升高,与对照组[(7.84±0.61)%]的差异有显著性(P<0.05);另外V79细胞生物膜的完整性和超微结构亦发生变化。结论ACN能通过改变线粒体膜电位、膜通透性及超微结构诱导V79细胞生物膜损伤。

VEGF siRNA致中国仓鼠肺细胞染色体畸变的研究

目的研究VEGF siRNA对中国仓鼠肺细胞(CHL)的染色体畸变作用。方法采用25、50和100nmol/L的VEGF siRNA转染中国仓鼠的肺细胞,分别观察24h、48h后的染色体畸变情况。结果在VEGF siRNA转染24小时,仅100nmol/L VEGF siRNA产生可疑阳性反应,其染色体的畸变率为6%;在VEGF siRNA转染48小时后,50nmol/L的VEGF siRNA和100nmol/L的VEGF siRNA均产生可疑阳性反应,染色体的畸变率分别为6%和10%。而25nmol/L的VEGF siRNA无论是在转染后24h还是48h,均未产生染色体的畸变作用。VEGF siRNA产生的染色体畸变类型有断裂、双着丝粒、多倍体、裂隙、三射体。结论 100nmol/L的VEGF siRNA分子可引起CHL细胞产生染色体畸变。

煤焦沥青对中国仓鼠肺细胞周期和凋亡的影响

目的探讨煤焦沥青对中国仓鼠肺(CHL)细胞c-jun、fos和表皮生长因子受体(EGFR)m RNA表达和细胞周期和凋亡的影响。方法常规培养CHL细胞,常规消化细胞后,将细胞接种于6孔板中,待其融合度达到40%左右时,加入含有煤焦沥青的培养液,调整浓度至0、20、40 mg/L,分别于作用24、72 h后提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR技术检测c-jun、fos和EGFR m RNA的表达水平;将等量的细胞接种在50 ml的培养瓶中,待细胞融合度达到40%左右时,加入含煤焦沥青的培养液,调整浓度为0、20、40 mg/L,每组设置6个重复样品,分别加入谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰半胱氨酸(NAC),调整浓度至0、2.5、10 mmol/L,作用120 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和S期细胞的构成比。结果在20 mg/L煤焦沥青作用24 h后,CHL细胞的fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平均高于0 mg/L剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);作用72 h后c-jun和EGFR的表达水平显著高于0 mg/L剂量组(P<0.05)。在40 mg/L剂量组作用24和72 h后,fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平均高于0 mg/L剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。煤焦沥青作用后,细胞凋亡率降低,在GSH作用下,凋亡率有所增加,NAC作用下的凋亡率增加的幅度更加明显,但以上差异均无统计学意义(P>0.05);20 mg/L的煤焦沥青作用120 h后,S期的细胞构成显著增加(P<0.05);GSH和NAC可以显著抑制S期的细胞构成改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论煤焦沥青可以诱导fos、c-jun和EGFR m RNA的表达水平和S细胞周期的构成增加、抑制细胞凋亡率,而GSH和NAC可以抑制这种诱导效应。

二甲基甲酰胺对V79细胞的毒性作用

[目的]了解二甲基甲酰胺(DMF)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性及DNA损伤作用。[方法]以体外培养V79细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)和单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分别检测5个浓度(0.5、2.0、8.0、32.0、128.0mmol/L)DMF在3个时间段(6、12、24h)染毒后对V79细胞的毒性作用和DNA损伤情况。[结果]同一时间组V79细胞存活率随染毒浓度的增加而下降,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),存在明显的剂量-效应关系(6h:b=-0.002,P<0.05;12h:b=-0.003,P<0.05;24h:b=-0.003,P<0.05)。各染毒浓度组的彗星拖尾率、尾长、Olive尾距、尾部DNA百分含量,与同一时间阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]本实验条件下,DMF能够明显抑制V79细胞增殖,存在正向的剂量-效应关系,并能引起DNA损伤。