益神宁心方对斑马鱼睡眠剥夺模型行为学及神经递质的影响

目的观察益神宁心方对斑马鱼睡眠剥夺模型行为的影响,并对其机制进行初步探索。方法将受精后5 d(5 dpf)野生型AB系斑马鱼随机分为正常组、模型组(咖啡因300μmol/L)、褪黑素组(10μmol/L)、益神宁心方低剂量组(100 mg/L)、益神宁心方中剂量组(300 mg/L)和益神宁心方高剂量组(900 mg/L),咖啡因诱导建立斑马鱼睡眠剥夺模型。应用行为追踪系统定量监测自主活动1 h,明暗交替下连续测定斑马鱼的趋触性行为15 min,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)和褪黑素(MT)的含量,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测斑马鱼组织GABA A型受体a1亚单位基因(gabra1)、γ2亚单位基因(gabrg2)和5-HT受体1A类亚型基因(htr1aa)、1D类亚型基因(htr1bd)及MT受体1A类亚型基因(mtnr1aa)、1B类亚型基因(mtnr1ba)mRNA相对表达量。结果与正常组比较,模型组斑马鱼运动状态覆盖距离、运动状态持续时间及中运动时间均显著增加(P<0.05),静止状态持续时间显著减少(P<0.05);中心区域时间百分比及中心区域距离百分比均显著减少(P<0.05);GABA、MT含量及gabra1、gabrg2、mtnr1aa、mtnr1ba mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05),5-HT含量及htr1aa、htr1bd mRNA相对表达量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,益神宁心方高、中剂量组运动距离、运动时间、中运动时间减少(P<0.05),静息时间增加(P<0.05);益神宁心方高剂量组中心区域时间百分比及中心区域距离百分比增加(P<0.05);益神宁心方高剂量组GABA、MT含量和gabra1、mtnr1aa、mtnr1ba mRNA相对表达量升高(P<0.05),5-HT含量和htr1aa mRNA相对表达量降低(P<0.05);益神宁心方中剂量组gabrg2、mtnr1ba mRNA相对表达量升高,5-HT含量和htr1bd mRNA相对表达量降低(P<0.05)。结论益神宁心方可以改善咖啡因造模斑马鱼的睡眠剥夺状态,改善焦虑行为,其机制可能与调节GABA、5-HT、MT相关紊乱的基因水平相关。

香萱益神方对血管性认知障碍大鼠模型海马小胶质细胞炎症反应调节作用的研究

目的探究香萱益神方对大脑中动脉栓塞(MCAO)法复制的血管性认知障碍(VCI)模型大鼠海马小胶质细胞炎症反应的调节作用。方法42只Wistar大鼠随机挑选12只作为假手术组,其余采用MCAO法建立VCI大鼠模型,造模成功的24只大鼠分为模型组和香萱益神方组,每组12只。香萱益神方组大鼠给予香萱益神方7.46g/kg灌胃,假手术组和模型组给予等量纯净水灌胃,每日1次,连续6周。分别于造模2周后和中药干预6周后行新物体识别实验检测大鼠认知功能,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察香萱益神方干预后大鼠脑组织缺血区域大小的变化;苏木精-伊红(HE)染色法检测香萱益神方对VCI大鼠海马CA1区及齿状回(DG)区神经元结构的影响;免疫组织化学染色法观察香萱益神方对VCI大鼠海马CA1区及DG区小胶质细胞离子钙结合衔接分子1(Iba1)的激活情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠海马组织小胶质细胞标记物Iba1、M1型促炎症因子诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞分化抗原86(CD86)和M2型抑炎症因子精氨酸-1(Arg-1)、C型凝集素CD206蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86、Arg-1和CD206mRNA的表达。结果新物体识别结果显示,与模型组大鼠比较,香萱益神方组大鼠新物体探索次数识别指数与探索时间识别指数提高(P<0.05),提示VCI模型大鼠认知功能改善。TTC染色结果显示,与模型组大鼠比较,香萱益神方组大鼠脑梗死面积减少(P<0.05)。HE染色结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马CA1区和DG区锥体细胞形态改善,核固缩减少,细胞间隙缩小,断裂带减少,深染程度降低。免疫组织化学结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马CA1区和DG区Iba1阳性细胞数减少(P<0.05),胞体形态变细。Western blot结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86蛋白水平显著下降(P<0.05),Arg-1、CD206蛋白水平升高(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86 mRNA水平下降(P<0.05),Arg-1、CD206 mRNA水平升高(P<0.05)。结论香萱益神方可能通过调节小胶质细胞促炎表型M1型和抗炎表型M2型极化,抑制海马小胶质细胞炎症反应,从而保护海马神经元,改善大鼠认知功能。

益肾通络方对C-BSA肾病综合征大鼠模型的整体治疗作用

目的:观察益肾通络方对阳离子牛血清白蛋白(C-BSA)大鼠模型的整体治疗作用。方法:采用C-BSA复制肾病综合征大鼠模型,随机分为3组,即模型组,肾炎四味片组,益肾通络方组,每组各10只,并以10只同批正常大鼠为正常组。分别测定大鼠24h尿蛋白,血清白蛋白,血肌酐,血尿素氮;观察大鼠肾组织病理形态,测定面积比。结果:益肾通络方组24h尿蛋白含量、血清肌酐、血尿素氮下降(P<0.01);血清白蛋白提高(P<0.01);肾脏病理损害均有不同程度减轻,面积比减少(P<0.01);其作用优于模型组和肾炎四味片组(P<0.05,P<0.01)。结论:益肾通络方对肾病综合征大鼠有良好的治疗作用,能改善相关蛋白,改善肾功能,减轻肾脏病理损害。

清肺通络方对肺炎支原体诱导A549细胞氧化应激损伤的影响及作用机制研究

目的探讨清肺通络方对肺炎支原体(MP)感染人类肺泡基底上皮细胞(A549细胞)后氧化应激损伤的影响及其可能的机制。方法取A549细胞分为空白组、MP感染组(MP浓度为1×10^(7)CFU·mL^(-1))、不同浓度清肺通络方组(清肺通络方浓度分别为0.5 mg·L^(-1)、1.0 mg·L^(-1)、2.0 mg·L^(-1)),于清肺通络方处理3 d时,以倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光染色法检测不同组细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、胞浆伴侣分子(Keap1)、醌氧化还原酶(NQO1)表达水平。取A549细胞分为空白组、MP感染组、MP+siNC组、MP+清肺通络方组、MP+siNrf2组、MP+siNrf2+清肺通络方组,于清肺通络方处理3 d时进行细胞转染,Western blot检测Nrf2、Keap1、HO-1、NOQ1表达水平。结果适宜浓度的清肺通络方可上调MP感染后A549细胞内Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1蛋白表达,降低细胞内ROS水平,从而抑制细胞凋亡。抑制Nrf2表达后,清肺通络方的抗氧化效应降低。结论清肺通络方可减轻MP感染后A549细胞氧化损伤,其机制可能与调控Nrf2/抗氧化响应元件(ARE)信号通路有关。

活血通络方药理作用及临床应用进展

活血通络方是治疗因血瘀滞引发病症的经典用方,具有活血祛瘀、通经活络之功效。临床对活血通络方已进行了广泛而深入的研究,发现活血通络方及组方中药的有效成分具有抗动脉粥样硬化、抗氧化应激等药理作用,已在内分泌疾病、骨科疾病和心脑血管疾病等临床治疗中收到显著效果。虽活血通络方已在诸多疾病治疗中获得较理想效果,但仍需加深对该方剂的研究和理解,以使其发挥更大的临床价值。

补肾解毒通络方阻止白血病复发机制的网络药理学分析

目的:探讨补肾解毒通络方(BSJDTLF)的作用机制。方法:使用网络药理与蛋白组学相结合的研究方法,对其靶点与作用通路进行了分析、预测。将补肾解毒通络方进行液相色谱质谱分析,对质谱结果中的化合物通过TCMSP与CTD数据库进行分析,得到对应化合物的作用靶点,再通过NCBI和GENE CARD数据库筛选与白血病相关的作用靶点基因。分选给药小鼠的间充质干细胞进行高通量蛋白组学分析筛选出差异蛋白。将差异蛋白与靶点基因进行比对,经GO、KEGG和K核分析得到BSJDTLF作用机制通路。结果:共筛选到潜在靶点50个,关键靶点10个,包括Mmp2、Stmn1、Icam1等。主要涉及慢性白血病、急性白血病、VEGF信号等通路。结论:预测了补肾解毒通络方作用于间充质干细胞的具体机制。

益肾强督通络汤联合西药治疗强直性脊柱炎临床研究

目的:观察益肾强督通络汤治疗强直性脊柱炎的临床疗效。方法:选择强直性脊柱炎患者102例,将愿意服用中药及局部外敷治疗的纳入52例患者纳入治疗组,不愿意服用中药及局部外敷治疗的50例患者纳入对照组,对照组患者采用西医规范治疗,治疗组患者在对照组治疗的基础上加用益肾强督通络汤内服和外敷治疗,两组均以12周为1个疗程。治疗结束后观察两组患者临床症状及体征的变化,比较两组患者临床疗效、专科检查评分(颌柄距、指地距、胸廓扩张度、枕墙距、Schober试验)、中医证候积分、病情活动指数(BASDAI评分、BASFI评分、BASMI评分)、炎性反应指标水平(ESR和CRP)及不良反应等指标。结果:治疗后治疗组和对照组总有效率分别为96.15%和82.00%,经比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组的颌柄距、指地距、枕墙距和中医证候积分均较明显低于对照组(P<0.05),胸廓扩张度、Schober试验指标均明显高于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组的BASDAI评分、BASMI评分和BASFI评分均比对照组改善显著(P<0.05)。治疗组治疗后ESR和CRP水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:益肾强督通络汤联合西药治疗强直性脊柱炎疗效确切,能够显著改善强直性脊柱炎患者的临床症状和中医证候积分,且能明显降低患者的炎症反应。

补肺益肾组分方Ⅲ联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病大鼠的影响

目的基于起效时间和效应探讨补肺益肾组分方Ⅲ联合运动康复对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的影响。方法240只大鼠随机分为空白组(Control)、模型组(Model)、补肺益肾组分方Ⅲ组(ECC-BYFⅢ)、运动康复组(ER)、补肺益肾联合运动康复组(ECC-BYFⅢ+ER)、氨茶碱组(APL),每组40只。1~8周采用香烟联合细菌感染法复制COPD大鼠模型,9~16周给予相应干预处理,分别于第10、12、16、20、24周检测肺功能、炎症因子及肺组织病理等。结果与Control组比较,Model组肺功能下降、肺组织病理损伤、炎症反应明显(P<0.05,P<0.01)。与Model组比较,ECC-BYFⅢ组第10~24周IL-6表达及支气管壁厚度(Wt)降低,第12~24周IL-10、单位面积平均肺泡数(MAN)升高,第16~24周肺功能最大呼气中段流速(MMEF)、CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01);ER组10~24周IL-6、Wt降低,IL-10升高,第16~24周平均肺泡截距(MLI)降低、MAN升高(P<0.05,P<0.01);ECC-BYFⅢ+ER组第10~24周MLI、Wt、IL-6、TNF-α均降低,IL-10、CD4^(+)升高,第12~24周呼气中期流速(EF50)、MAN升高,FRC降低,第16~24周TV、CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01);APL组第10-24周Wt、IL-6、TNF-α降低,12~24周MLI降低、MMEF升高,第16周CD4^(+)/CD8^(+)升高(P<0.05,P<0.01)。与APL组比较,ECC-BYFⅢ+ER组第16周TNF-α降低,ECC-BYFⅢ+ER组第12、20、24周IL-10升高,第24周IL-6降低(P<0.05,P<0.01)。与ER组比较,ECC-BYFⅢ和ECC-BYFⅢ+ER组第24周IL-6降低,ECC-BYFⅢ+ER组12~20周IL-10升高(P<0.05,P<0.01)。结论各方案干预COPD大鼠均具有较好的效应,其中联合干预在改善肺功能、病理损伤及调节炎症免疫方面均起效早、持续时间长,且改善炎症优于运动康复,改善炎症免疫优于氨茶碱。

益肾汤经结肠透析调节自噬改善慢性肾衰竭大鼠肾纤维化

目的 探讨益肾汤经结肠透析通过调节肾脏自噬活性改善慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾纤维化的作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常(N)组10只和造模组20只,腺嘌呤200 mg/(kg·d)灌胃4周制作CRF模型。造模成功后随机分为CRF组和益肾汤经结肠透析(YS)组,每组10只。干预2周后检测血清肌酐、尿素氮水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理改变,HE染色观察结肠组织病理,免疫组化检测结肠组织ZO-1、Claudin-1表达,Westen Blot检测肾脏组织Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、FN、α-SMA表达。结果 CRF大鼠的血清肌酐、尿素氮水平较N组升高(P<0.05),肾脏组织可见肾小球硬化,肾小管扩张,间质炎症细胞浸润,胶原纤维增生;结肠组织可见肠道黏膜绒毛萎缩、倒塌,黏膜层炎性细胞浸润。YS组血清肌酐、尿素氮水平较CRF组下降(P<0.05),病理改变减轻。免疫组化及Western Blot结果显示,与N组比较,CRF组结肠组织ZO-1、Claudin-1表达下降,肾组织FN、α-SMA、p62表达升高,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达下降(P<0.05)。与CRF组比较,YS组结肠组织ZO-1、Claudin-1表达升高,肾组织FN、α-SMA、p62表达下降,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高(P<0.05)。结论 益肾汤经结肠透析可降低肌酐、尿素氮,改善肾纤维化,其机制可能是通过修复肠道屏障,上调肾脏自噬活性。